Антибиотики, биоавтография

Поскольку бумажную и тонкослойную хроматографию применяют в сочетании с колоночной хроматографией, например для проверки гомогенности отдельных компонентов, биоавтографию можно считать общим методом обнаружения антибиотиков. Биоавтография основана на способности антибиотиков подавлять развитие чувствительных к ним штаммов. В результате разделяемые вещества обнаруживаются на хроматограмме по зонам подавления. Более подробно эти вопросы рассматриваются в специальной литературе [3, 4]. [c.204]

К настоящему времени открыто очень много самых различных (и химически и биологически) антибиотиков, поэтому невозможно предложить какую-то универсальную систему для их хроматографии. Для обнаружения классических антибиотиков разработаны были в свое время химические цветные реакции, но обычно их обнаруживают методом биоавтографии. При разработке и идентификации новых антибиотиков стал традиционным метод определения их хроматографических спектров (профилей) посредством биоавтографии. Если установлено, что определенная среда проявляет свойства антибиотика по отноще-нию к какому-либо бактериальному штамму, то эту среДу или экстракт из нее хроматографируют в серии выбранных растворителей и подвергают хроматограммы (в виде полосок) био-автографическому обнаружению (прижимают полоски к пленке с культурой и определяют зоны, в которых подавляется рост бактерий). Значения Rf пятен соединений, проявляющих свойства антибиотика, измеряют во всех растворяющих системах и строят кривую зависимости Rf от используемой системы (на оси ставят номера систем). Соединяя нанесенные точки, получают ломаную линию, которую и называют хроматографическим спектром или профилем. Этого обычно достаточно для получения полной хроматографической характеристики или для идентификации исследуемого антибиотика. Некоторые авторы используют до 14 растворителей для построения хроматографического спектра. В качестве примера приведем перечень систем, исполь- [c.139]

Лишь для небольшого числа из тысяч известных антибиотиков разработаны системы классификации и идентификации. В работе [25] на основании данных ТСХ и биоавтографии предложена классификация 151 антибиотика, обладающего противоопухолевой активностью в работах [26, 27] для классификации 91 антибиотика использован метод мгновенной ТСХ , а в работе [28] рассмотрены вопросы, связанные с применением ТСХ-систем для классификации и идентификации антибиотиков. Существуют два справочника по хроматографии антибиотиков [29, 30]. В Руководстве по хроматографии [31] приведены таблицы с данными по хроматографическим свойствам этих соединений. Описание ТСХ-методик можно найти в подробном обзоре Лотта и др. [32]. [c.145]

Биоавтография является вариантом бумажной хроматографии, когда рост бактерий используется как высокочувствительный индикатор для выявления положения определенных веществ на хроматограмме. Метод имеет преимущества специфического определения веществ с биологической активностью, чего лишены химическая и радиоизотопная системы их обнаружения. Он применим при определении положения на хроматограммах факторов роста из супернатантов культур или клеточных экстрактов, когда концентрация этих факторов настолько низка, что их нельзя обнаружить другими обычными методами. Например, с помощью биоавтографии можно определить на хроматограмме 5—10 нг фолиевой кислоты. Примеры использования биоавтографии для определения факторов роста в клеточных экстрактах приведены в работе [15]. Биоавтографию широко используют также в фармацевтической промышленности для обнаружения антибиотиков на бумажных хроматограммах [22]. [c.367]

При биоавтографии антибиотиков агаровая среда должна содержать полный набор питательных субстратов. Это дает возможность микроорганизму расти по всей поверхности среды кроме тех зон, где на хроматограмме находятся антибиотики. Из-за высокой активности некоторых антибиотиков иногда полезно помещать бумажную хроматограмму на поверхность агара только на короткое время (около 10 мин), а затем снимать ее перед инкубацией чашки. Если надолго оставить хроматограмму на поверхности агара, то зоны ингибирования роста бактерий могут быть слишком большими, и тогда их трудно отчетливо различать. [c.368]

Такое явление наблюдается, например, при хроматографировании нефракционированного препарата карциностатина [55]. На тех хроматограммах, в которых оба синергидных компонента перемещались одинаково, можно было выявить зоны подавления тест-микроба. Они отсутствовали при хроматографировании в таких растворителях, которые разделяли оба компонента (рис. 5), Карциностатин удалось разделить на фракции А vl В. При хроматографировании компонента А хроматограмму перед наложением на агар обрабатывали раствором компонента В и, наоборот, хроматограммы с компонентом В обрабатывали раствором компонента А. В этом случае антибиотики удавалось выявить при помощи биоавтографии (рис. 5). [c.11]

Рис. 14. Использование нескольких тест-микробов при биоавтографии хроматограмм антибиотиков с ephalosporium sp. [177]

Саркомицин. При хроматографировании в органических растворителях подвижность уменьшается, если повышать pH буферных растворов, применяемых для обработки бумаги [111,301]. Препараты саркомицина удается разделить на отдельные компоненты при хроматографировании на бумаге, обработанной 10%-ным цитратным буфером pH 6,5—6,6 в различных органических растворителях. В н-бутаноле, насыщенном водой, наблюдалось разделение на компоненты, характеризующиеся величинами Кг 0,12—0,14, 0,28—0,36 (саркомицин Л), 0,51—0,58 (саркомицин В). Для разделения можно также использовать бутилацетат [843—845], хлороформ, изоамиловый спирт [288]. Антибиотики обнаруживали методом биоавтографии с использованием сенной палочки. [c.116]

Антибиотик выявляли при помощи биоавтографии (в качестве тест-микроба использовали Ba illus subtilis) или визуально [ПО, 725, 787, 312]. [c.140]

Для выявления неомициновых антибиотиков на хроматограммах вначале применяли биоавтографию [58, 59, 791, 1184, 1238], но затем были найдены более простые, химические методы. Сре-111 них наиболее часто используют реакцию с нингидрином [247, 1238—1241]. Эта реакция непригодна для ацетильных производных неомицинов [1193]. Хроматограммы обрабатывают раствором гипохлорита натрия, высушивают на воздухе и помещают в 95%-ный спирт. Далее опрыскивают смесью равных объемов 1 %-ного раствора крахмала и 1%-ного раствора иодистого калия. При этом ацетильные производные неомицинов выявляются в виде темно-синих пятен на бледном фоне. Разработана другая модификация этого метода, пригодная для количественных определений [360]. Хроматограммы помещают на 20 мин. при ко.мнат-ной температуре в раствор хлора в четыреххлористом углероде. Для его приготовления хлор, полученный из 100 мл соляной кислоты и 50 г перманганата калия, пропускают через воду и концентрированную серную кислоту и затем растворяют в 1 л четыреххлористого углерода. Раствор после прибавления примерно 5 г карбоната бария и 5 г плавленого хлористого кальция хранят в темной склянке. Хроматограммы высушивают на воздухе в течение 30 мин. при 4—6° в темноте и обрабатывают крахмальным реагентом 1 г крахмала и 0,25 г иодистого калия растворяют при нагревании в 3,5 мл воды, 0,5 мл этого раствора быстро добавляют к 50 мл пиридина. Для обработки хроматограмм используют свежеприготовленный раствор. [c.197]

Методом хроматографии фузариновую кислоту идентифицировали среди продуктов жизнедеятельности различных грибов, в том числе мутантных форм [1308, 1309]. При хроматографировании фузариновой кислоты образуются длинные полосы. Это нежелательное явление не наблюдается, если хроматографировать антибиотик в виде медного комплекса [1306]. Для него отмечены следующие величины Rt п-бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 5) — 0,27 та же смесь в соотношении 7 3 10 — 0,62 м-бутанол — муравьиная кислота — вода (10 7 10) — 0,09 изопропанол— муравьиная кислота — вода (4 1 5)—0,40 50%-ный диоксан — 0,63 коллидин, насыщенный водой,—0,26 лутидин, насыщенный водой,— 0,30 [1306, 1310]. Для выявления антибиотика на хроматограммах используют биоавтографию [1308], а также химические методы обнаружения [1306, 1310]. В случае медного комплекса хроматограммы обрабатывают рубеановой кислотой (0,1 %-ный раствор в ацетоне), окраска усиливается в парах аммиака. Также можно применять бромкрезолзеленый. Разработан метод обнаружения фузариновой кислоты при помощи сегментов колеоптилей сеянцев томатов [77]. [c.208]

Антибиотики группы эхиномицина можно обнаружить на хроматограммах при помощи биоавтографии на фоне Ba illus subtilis или В. my oides [139,235,1474—1476] в качестве теста применяли саркому 180 и культуру раковых клеток Игла [34, 40]. Хроматограммы можно фотографировать в УФ-свете [139] (рис. 103 и 104). [c.237]

Азалос и сотр. [414] опубликовали список эталонных микроорганизмов, пригодных для обнаружения многих антибиотиков, а Бетипа — обзор по применению биоавтографии в тонкослойной и бумажной хроматографии [415]. [c.289]

Методы обнаружения антибиотиков на протяжении ряда лет практически не претерпели никаких изменений. Обычно они включают бноавтографию с помощью чувствительных к данному антибиотику хмикроорганизмов, посеянных на агаре, или проявление хроматограмм путем их опрыскивания растворами соответствующих реагентов с последующим просмотром при УФ-освещении. Для обнаружения антибиотиков наиболее пригоден метод биоавтографии, суть которого заключается в следующем. Высушенную бумажную хроматограмму, тонкослойную пластинку или электрофореграмму прижимают к поверхности агара, содержащего культуру подходящего микроорганизма, и выдерживают в течение определенного времени. За время инкубации число бактерий увеличивается лишь в тех участках агара, которые не соприкасались с антибиотиком. По положению зон, в которых подавляется рост бактерий, определяют значения Rf соединений, проявляющих свойства антибиотика. Мейерс и Чанг [33] предложили способ увеличения чувствительности обнару- [c.145]

Для характеристики олеандомицина использована хроматография на бумаге ватман № 1 i[134] и на бумаге тойо № 51 [135] в различных системах растворителей. В случае ТСХ для обнаружения антибиотиков служат биоавтография [136, 137] и окрашивающие реагенты [138, 139]. С помощью ВЭЖХ удалось разделить 10 лейкомицинов, времена удерживания которых расположены в диапазоне от 1,5 до 25,8 мин [140]. [c.149]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология