Плазмиды резистентности

Гены инактивирующих ферментов расположены в плазмидах резистентности (К-плазмидах) [c.230]

Помимо ряда общих ф-ций, свойственных очень многим П (таких, как автономная репликация или ф ция переноса), существует множество спец ф-ций, детерминируемых той или иной П У бактерий наиб изучены три главные группы плазмид Р-П (факторы фертильности) ответственны за половой процесс, К-П (факторы резистентности) обеспечивают устойчивость бактериальных клеток к действию антибиотиков (напр, к стрептомицину и тетрациклину) и сульфаниламидным препаратам, в Со1-П (колициногенных факторах) локализованы гены синтеза колицинов (бактерио-цинов)-токсичных белков, к-рые не действуют на производящую их клетку, но убивают др бактерии [c.553]

Для отбора клеток, содержащих рекомбинантную ДНК, используют специальные приемы. Чтобы уменьшить количество кольцевых плазмидных молекул, образующихся ири сшивании фрагментов ДНК-лигазой Т4, рестрицированную плазмидную ДНК обрабатывают щелочной фосфатазой, удаляющей 5 -концевые фосфатные группы. Для отбора трансформированных клеток, содержащих гибридные плазмиды, проводят 1) тестирование на резистентность к определенным антибиотикам или колориметрическую реакцию 2) иммунологические тесты или выявление специфического белка - продукта клонированного гена 3) гибридизацию с зондом, комплементарным како-му-либо участку искомого гена. [c.78]

Плазмиды. Они представляют собой кольцевые ДНК, локализованные в бактериальных клетках. И хотя они занимают всего лишь несколько процентов генетического материала, их биологическая значимость достаточно велика. Они содержат информацию о резистентности к различным токсическим веществам, например к антибиотикам, а также участвуют в усвоении клеткой некоторых питательных веществ. В бактериальных клетках количество плазмид варьирует в пределах от единиц до сотни, причем их репликация автономна и не связана с репликацией хромосомы. Плазмиды являются гораздо более мобильным хранилищем генетического материала, чем хромосома, и при конъюгации клеток обмен генами происходит только за счет этих структур. [c.500]

Ген MLS-резистентности находится в плазмидах. Продукт экспрессии гена - специфическая метилаза, катализирующая метилирование остатков аденина в 23S рибосомальной РНК, т.е. РНК, находящейся в 50S рибосомальной субъединице. [c.244]

Возможно, что ген MLS-резистентности в бактериальных плазмидах происходит из генома стрептомицетов - продуцентов макролидов. [c.245]

Передача резистентности. Гены, обусловливающие резистентность, могут передаваться от одной бактерии к другой различными путями. Наиболее обычный механизм — конъюгация, простейшая форма полового процесса, описанная в разд. 2.3.3. Гены резистентности часто находятся в плазмидах (мелких кольцевых фрагментах ДНК). Они способны реплицироваться, а их копии могут передаваться в ходе конъюгации чувствительным бактериям, которые в результате становятся устойчивыми к данному антибиотику. Обмен генетической информацией между микробами (даже разных видов) может привести к так называемой множественной резистентности, т. е. неуязвимости возбудителя сразу для нескольких лекарственных препаратов. Большой проблемой для многих больниц в настоящее время является инфекция, вызываемая полирезистентными штаммами золотистого стафилококка. [c.227]

Поведение многих транспозонов было прослежено в процессе нескольких циклов транспозиции. На рис. 36.1 приведена схема, показывающая состояние как донорной, так и реципиентной молекул. Плазмида, несущая транспозон, введена в клетку, которая содержит другую плазмиду без транспозона. Производится отбор реципиентных молекул, получивших транспозон (например, по инактивации маркера резистентности к антибиотику в реципиентной плазмиде). Затем выделяются молекулы плазмидной ДНК донора и реципиента. Их исследование подтверждает, что реципиентная ДНК действительно приобрела вставку транспозона, а донорная ДНК не -утратила его копию. Таким образом, транспозиция связана с образованием дополнительной копии транспозона в реципиентном сайте. [c.459]

Плазмиды, несущие гены устойчивости микроорганизмов к антибиотикам, обнаруживаются практически у всех групп патогенных бактерий. Поэтому частота резистентности к антибиотикам обусловлена, в первую очередь, распространением генов, детерминирующих устойчивость. Перенос генов устойчивости может происходить не только внутри клеток одного вида, но и у различных видов и родов микроорганизмов. [c.456]

Наряду с плазмидами, ответственными за устойчивость бактерий к антибиотикам, в бактериальных клетках имеются так называемые мигрирующие элементы, одни из которых — транспозоны — сложные структуры, иногда содержащие дополнительные гены, связанные с резистентностью к антибиотикам. Но и сами продуценты многих антибиотиков способны служить источниками генов резистентности, передавая их с помощью различных механизмов другим микроорганизмам, в том числе и патогенным. [c.457]

Векторы, используемые для клеточной трансформации, представляют собой плазмиды, которые помимо участка начала репликации содержат один ген резистентности, применяющийся для селекции в клетках прокариот, и второй ген резистентности, который может использоваться для селекции в эукариотических клетках. Такие векторы имеют также несколько сайтов рестрикции, по которым и проводят клонирование нужного гена. Ряд векторов, обладающих этими свойствами, показан на рис. 4-1. [c.75]

Плазмиды контролируют разнообразные признаки у бактерий образование бактериоцинов — колицинов (Со1-плазмиды), резистентность к антибиотикам (R-плазмиды) и др. Бактерио-цины продуцируют различные бактерии, например кишечная палочка, шигеллы, сальмонеллы. Колицины, образуемые разными сероварами Е. oli, могут отличаться друг от друга по спектру чувствительных к ним бактерий. Метод определения спектра чувствительных к определенному колицину бактерий называется колицинотипированием, а метод определения типа самой Со1-плазмиды ( ol А, ol В и др.) — колициногенотипированием. Данные методы позволяют маркировать бактерии одного и того же вида или биовара, что имеет эпидемиологическое значение для установления источника инфекции. [c.68]

Среди П, обеспечивающих устойчивость бактерий к антибиотикам, осн массу составляют т наз факторы множеств резистентности, несущие сразу неск соответствующих детерминант С помощью трансмиссибетьных П детерминанты резистентности легко могут распространяться между видами, способными к конъюгации На такие П гены резистентности могут передаваться с помощью транспозонов Кроме детерминант лек резистентности из числа функцион элементов П хорошо изучены гены нек-рых бактериальных токсинов, напр энтеротоксинов, вырабатываемых возбудителями кишечных инфекций, носителями т наз Тох-П (факторов патогенности энтеробактерий) Показана способность Тох-П передаваться между бактериями в организме животных и человека На этих П могут находиться также детерминанты резистентности к антибиотикам В этой связи активно развивается новое направление в практич бактериологии-поиск и создание в-в, избирательно подавляющих репликацию плазмид или экспрессию их генов Пример таких в-в-клавулановая к-та (ф-ла I) и ее производные - ингибиторы Р-лактамазы [c.553]

Основная проблема - кишечный тракт животных превращается в резервуар тетрациклинрезистентных, эритромицинрезистент-ных бактерий. Гены резистентности включаются в плазмиды и переносятся в патогенные виды бактерий. [c.247]

Особенно разнообразны механизмы возникновения резистентности к антибиотикам у микроорганизмов. У них возможно явление так называемой инфекционной антибиотикорезистентности, передаваемой от одного вида к другому в виде плазмид. Так, плазмида. [c.208]

Механизм устойчивости к антибиотикам, определяемой К-факторами, может быть не таким, как в случае ее хромосомного наследования. Наглядным примером этого служит резистентность к стрептомицину. Если она зависит от хромосомного гена, то она связана с изменением субъединицы 30S рибосомы, так что бактерия не имеет мишени для воздействия стрептомицина (разд. 2.2.2). В отличие от этого устойчивость, обусловленная ii-фактором, основана на инактивации антибиотика в результате его аденилирования под влиянием фермента. Ферментативная химическая модификация антибиотиков часто бывает причиной устойчивости к ним, обусловленной плазмидами например, хлорамфеникол ацетилируется, канамицин и неомицин подвергаются фосфорилирова- [c.463]

Изменения состава белков могут происходить либо в метаболических ферментах [69], что блокирует метаболизм вредного вещества, либо в транспортной системе или в клеточной стенке [70], что блокирует их поступление в клетку. Сообщалось о потере в таких условиях специальных транспортных белков мембраны [71]. Кроме того, микроорганизмы могут продуцировать внеклеточные связывающие белки, такие как металло-тионены [72], или пассировать токсины в цитоплазматических вакуолях или гранулах. Неспецифическое внеклеточное связывание токсинов такими компонентами клеточной стенки, как тей-хоевая кислота, полисахариды и липополисахариды, также способствует детоксикации [73]. Известно, что многие из этих адаптаций детерминированы плазмидами, как, например, двойная резистентность некоторых штаммов Staphylo o us aureus к ртути и антибиотикам. [c.55]

Впервые транспозоны были обнаружены, когда оказалось, что некоторые гены устойчивости к антибиотикам связаны с инфекционными факторами устойчивости. Общая структура факторов устойчивости изображена на рис. 8.13, Б. При исследовании гетеродуплексной ДНК, образованной ДНК F-фактора, и фактора устойчивости обнаружена гомология по всей области tra-генов, что свидетельствует об эволюционном родстве этих структур. Последовательность ДНК, кодирующая устойчивость к тетрациклину, tet, обрамлена элементами IS 3 и встроена в область гомологии фактора устойчивости и F-фактора. В негомологичной области карты локализованы гены, кодирующие резистентность к ампициллину (атр), сульфонамиду (sul), стрептомицину (str), хлорамфе-николу (ст[) и канамицину (кап). Эти гены устойчивости порознь или группами обрамлены IS элементами или другими инвертированными повторами (указаны стрелками на рис. 8.13, Б). Отдельные гены устойчивости например, tet или атр, могут переноситься в другие эписомы или плазмиды, а также в хромосомы фагов и бактерий, почему и возник термин транспозон. [c.244]

Факторы резистентности (К-плазмиды, К-факторы) содержат гены, которые определяют устойчивость клетки к различным веществам, в том числе к антибиотикам (сульфонамидам, стрептомицину, хлорамфениколу, тетрациклину, канамицину и др.) и тяжелым металлам (ртути, никелю, кадмию, кобальту). Кроме того, они могут определять устойчивость к мутагенам. Устойчивость, обусловленная К-плазмидами, чаще всего обеспечивается ферментами, модифицирующими молекулу антибиотика или тяжелого металла. Устойчивость к сульфаниламиду обусловлена тем, что К-плазмиды детерминируют дублирующие ферменты синтеза витаминов, нечувствительные к этому лекарственному препарату. [c.343]

Такой механизм устойчивости бактерий имеет место в отношении антибиотиков тетрациклиновой группы, макролидов, карбапе-немов и др. и занимает заметное место в повышении резистентности микроорганизмов. Гены, кодирующие транспортные системы активного выноса из клеток антибиотиков, обычно локализованы на плазмидах, что способствует их быстрому распространению. [c.455]

Факторы устойчивости микроорганизмов к антибиотикам, связанные с переносом генов резистентности, впервые были обнаружены на примере Shigella в 1957 г. японскими исследователями. Позднее было установлено, что устойчивость штаммов бактерий к лекарственным препаратам определяется наличием плазмид, передаваемых при конъюгации. [c.456]

Определить частоту образования рекомбинантов (трансконъюгантов) при передаче R-плазмиды, контролирующей множественную резистентность к антибиотикам, от одного штамма Е. oli другому. [c.69]

Селекцию растительных клеток, трансформированных неонкогенными векторами, на фоне нетрансформированных клеток можно осуществить по их способности расти на питательной среде, содержащей антибиотики, в норме токсичные для таких клеток. Из подобных резистентных к антибиотикам тканей можно регенерировать нормальные побеги с помощью стандартных методов культуры тканей. Однако при попытках трансформировать растительные клетки неонкогенными векторными системами на основе Ti- или Ri-плазмид перед исследователем встает следующая проблема. В отличие от индукции корончатого галла или косматого корня неонкогенные трансформированные растительные клетки необходимо снабдить ростовой средой строго определенного состава, содержащей правильное соотношение фитогормонов. Такие среды специально подбирают для конкретных видов (или даже сортов) растений, чтобы поддержать образование каллуса после непродолжительного деления клеток в ответ на поранение. Обычно пораженную ткань культивируют in vitro — с этим подходом связаны различные проблемы, имеющие отношение к селекции трансформированных клеток [c.101]

Поскольку физиологически и морфологически нормальные растения невозможно регенерировать из онкогенных клеток корончатых галлов, большинство современных векторов на основе Ti-плазмид неонкогенны. Как упоминалось выше, главная особенность онкогенных систем трансформации с помощью агробактерий состоит в том, что галлы и косматые корни вырастают из эксплантатов, и, следовательно, трансформированные клетки легко отличить. Это очень важное свойство, поскольку трансформация эксплантатов с помощью неонкогенных векторов часто не позволяет отобрать резистентные к антибиотику ткани на фоне нетрансформированных клеток. Таким образом, онкогенные векторы, которые к тому же несут гены устойчивости к антибиотикам [38, 39], очень полезны для быстрого подбора наилучших эксплантатов и методик инокуляции, чтобы получить оптимальную трансформацию. Индукция микроопухолей в местах поранения с большой площадью поверхности, таких, как срезы клубня или главного корня (рис. 2.7), тоже представляет собой удобный способ получения. нескольких тысяч легко отличимых, независимых трансформантов. [c.109]

Можно регенерировать трансформированные растения из косматых корней, индуцированных у определенных видов (приложение 2[УП1]). Из некоторых корончатых галлов дикого типа, индуцированных у определенных видов (тополь и люцерна), тоже удалось регенерировать трансформированные растения с нормальной морфологией и фертильностью. Таким образом, если в качестве помощника уг>-функций бактериального хозяина используют штаммы А. rhizogenes или А. tumefa iens, содержащие Ri- или Ti-плазмиды дикого типа, то можно разработать среды -и условия культивирования, позволяющие регенерировать из опухолей резистентные к антибиотику трансформированные побеги. Часть последних может утратить онкогенную Т-ДНК и представлять собой морфологически и физиологически нормальные побеги (сведения относительно отдельных видов даиы в приложении 2[Vni]). [c.115]

Для разработки методов получения неопластических, резистентных к какому-либо антибиотику каллусов на безгормо-нальной среде в качестве помощников используют онкогенные угг-плазмиды с бинарными векторами, содержащими доминантный ген устойчивости к антибиотику . Это позволяет определить условия, оптимальные для трансформации. [c.116]

Современные DMGT-векторы представляют собой небольшие плазмиды (см. следующий раздел), как правило содержащие множественные сайты для клонирования, гены резистентности к антибиотикам, приспособленные для функционирования в растительных клетках либо в качестве доминантных селективных маркеров, либо в экспериментах по кратковременной (транзиторной) экспрессии, и, кроме того, прокариотические гены устойчивости к антибиотикам для селекции в бактериях (рнс. 3-1). С этими малыми плазмидами манипулируют in vitro, чтобы получить вектор в окончательном виде, а затем вводят [c.197]

С помощью электропорации были получены стабильно трансформированные растения или клеточные линии некоторых видов растений. К йх числу относятся табак [38], морковь [22] и кукуруза [13]. Шиллито с соавторами [38] использовал вектор, содержащий доминантный селективный маркерный ген (npt-ll), который ранее успешно применяли в экспериментах по пере носу генов с помощью ПЭГ [31]. Эту плазмиду вводили с помощью электропорации в протопласты табака и отбирали трансформанты на основе резистентности к канамицину. Дан<-ные исследования, очевидно, отнимают больше времени, чем эксперименты по временной экспрессии, но в конечном итоге позволяют разработать методику стабильной трансформации. В настоящее время при использовании методов электропорации частота трансформированных колоний может достигать 2%. что более эффективно, чем трансфекция ДНК с помощью ПЭГ. Пути интеграции перенесенной ДНК такие же, как и при иС пользовании ПЭГ, и в обоих случаях перенесенные гены наследуются в соответствии с нормальными менделевскими соотношениями. [c.216]

Клетки, приобретающие плазмиды, как правило, приобретают и новые признаки. Эти признаки легли в основу названий обнаруженных впервые плазмид, а именно Р-плазмид (фактор пола), придающих клеткам донорные свойства Со1-плазмид, способствующих синтезу колицинов и К-плазмид, определяюшда устойчивость (резистентность) клеток к антибиотикам. Многие свойства плазмид зависят от содержащихся в их составе транспозонов. [c.65]

Смотреть страницы где упоминается термин Плазмиды резистентности: [c.248] [c.84] [c.257] [c.277] [c.518] [c.118] [c.77] [c.725] [c.196] [c.200] [c.113] [c.463] [c.91] [c.105] [c.96] [c.102] [c.117] [c.446] [c.21] [c.83] [c.153]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология