Флуориметрия с временным

До настоящего времени основным методом количественного химического люминесцентного анализа является флуориметрия — метод установления количества люминесцирующего вещества по интенсивности возникающей при определенных условиях люминесценции. При этом предполагается, что существует определенная зависимость между интенсивностью люминесценции и концентрацией вещества. Флуориметрические методы, принципиально ничем не отличаясь от фотометрических и представляя лишь разновидность оптических методов, однако, имеют и свои специфические особенности. Так, в случае фотометрических определений измеряют долю светового потока, поглощенного веществом, пропорциональную количеству поглощающих центров в некотором объеме, в случае флуориметрических определений измеряют интенсивность возникающей люминесценции, пропорциональной количеству поглощающих и излучающих.центров и доле поглощенного света. Как правило, чувствительность флуориметрических методов выше, чем фотометрических. [c.80]

Определение содержания урана по гашению люминесценции морина [129]. Ионы UO2 гасят люминесценцию нейтральных водно-ацетоновых растворов морина. Интенсивность люминесценции измеряется на флуориметре. Она зависит от концентрации морина и ацетона, несколько изменяется во времени и увеличивается с понижением температуры. Мешающее влияние других ионов устраняется предварительным выделением урана в виде нитрата эфирной экстракцией или методом хроматографии на бумаге. Раствор, освобожденный от других ионов, выпаривают досуха и остаток растворяют в 2,5 мл воды. К полученному раствору добавляют [c.330]

Обзор методов количественного измерения флуоресценции веществ, разделенных методом ТСХ, представлен в [378]. Количественная флуориметрия тонкослойных хроматограмм без их разрушения может быть выполнена двумя способами [236] 1) путем измерения флуоресценции веществ, которые сами способны флуоресцировать или образовывать флуоресцирующие соединения после обработки их соответствующим реагентом 2) путем обнаружения соединений на основании тушения ими флуоресценции вещества, предварительно нанесенного на слой сорбента. Ошибка определения первым методом (3—5%) меньше, чем вторым (5—8%). Установлено, что стандартизация времени на отдельных операциях значительно уменьшает ошибку определения. [c.112]

Можно использовать и другие прямые (измерение площади пятна, флуориметрия) и косвенные (флуориметрия, полярография, ИК-спект-роскопия, газовая хроматография) методы количественного определения вещества в пятне, однако вплоть до настоящего времени они не нашли применения в химии углеводов. [c.48]

Методика смешивания реагентов в режиме остановленного потока обычно включает смешивание исследуемого раствора и растворов реагентов при помо-ищ двух шприцев, автоматически управляемых пневматическим устройством, в проточной кювете или смесителе, который служит также и ячейкой для наблюдений. Поток затем резко останавливают при помоищ третьего шприца, и регистрируют аналитический сигнал как функцию времени. Этот подход обычно требуется для быстрых реакций (с временем полупревращения порядка нескольких миллисекунд или секунд). Производительность данного подхода очень сильно зависит от мертвого времени прибора (определяемого временами смешивания и временами прокачки и останова), которое должно быть меньше, чем время полупр ращения реакции примерно на два порядка. На рис. 6.4-2 изображен спектрофотометр (или флуориметр) с устройством, позволяющим работать в режиме остановленного потока, связанный с автоматическим пробоотборником и управляемым компьютером в режиме реального времени. Это экспериментальное устройство может быть использовано для исследования механизмов реакций, включающих быстрые стадии. [c.355]

Несмотря на явные преимущества разрешения по времени, фосфориметрия не столь широко применяется, как флуориметрия. Это связано с дополнительной сложностью оборудования для фосфориметрии, меньшим числом фосфоресцирующих частиц и неудобствами охлаждения проб для получения адекватной фосфоресцентной квантовой эффективности. До сих пор в фосфориметрии необходимо было использовать специальные смешанные растворители, которые образовывали бы прозрачные твердые стекла при охлаждении. Один такой растворитель, часто называемый ЕРА, представляет собой смесь в соотношении 5 5 2 диэтилового эфира, изопентана и этилового спирта. Недавно успешно были использованы для фосфориметрии замерзшие водные растворы в виде снега , [c.660]

Рассмотрен метод определения концентрации хлорофилла а дистанционно с помощью лазерной флуориметрии и на пробах в феофитиновых экстрактах. Приведено описание соответствующей аппаратуры. На конкретных примерах обсуждаются возможности указанного метода для дистанционного зондирования в масштабе реального времени с борта морского или воздущного судна. [c.199]

Еще в 1935 г. Цшайле [316] применил для измерения спектров флуоресценции хлорофиллов а и Ь фотоэлектрический спектрофотометр, а в 1943 г. описал усовершенствованный прибор с вакуумным рубидиевым фотоэлементом [317]. С появлением чувствительных фотоумножителей фотоэлектрическая регистрация спектров флуоресценции оттеснила на второй план менее чувствительную фотографическую запись, которая к тому же менее удобна и не столь точна. Начиная с этого периода и вплоть до 1955 г. в литературе был описан ряд таких устройств [318— 326]. Со времени публикации статьи Боумана, Колфилда и Юден-френда [127], описывающей прибор с двумя монохроматорами, методика флуориметрии была усовершенствована настолько, что, имея даже небольшое количество вещества, исследователь легко может получить автоматическую запись полного спектра флуоресценции и возбуждения. При правильном применении такие измерения фотолюминесценции являются мощным методом химического анализа, как качественного, так и количественного, [c.377]

Сбор первичных сигналов Автоанализатора в ЭВМ, работающую в реальном режиме времени, может осуществляться одним из трех способов 1) мультиплексный сбор слабых сигналов, поступающих непосредственно с детекторных модулей (т.е. колориметров, пламенных фотометров или флуориметров) 2) мультиплексный сбор сигналов с выходов усилителей, соединенных с детекторными модулями или 3) мультиплексный сбор сигналов, сн,1маемых со скользящих контактов самописцев Автоанализатора. [c.366]

Материал этой части главы разбит по разделам возбуждение, приготовление образцов, измерения и разнообразные методические приемы. Вначале рассмотрены главным образом вопросы выбора источников света, интенсивности света и выделения выбранных спектральных интервалов при помощи фильтров и монохроматоров. Кроме возбуждения действием света, существует множество других методов возбуждения, включая возбуждение рентгеновскими лучами, гамма-лучами, электронами и другими быстрыми частицами. Однако в большинстве исследований по люминесценции для возбуждения используют видимый и ультрафиолетовый свет. Поглощение света значительно более селективно, чем другие методы, а так как последние с большей полнотой рассмотрены в ряде уже опубликованных работ, то мы ограничимся здесь только первым методом. Приготовление образцов включает очистку веществ, приготовление твердых стекол, низкотемпературную методику и выращивание монокристаллов. В следующем разделе описана аппаратура для регистрации флуоресценции и фосфоресценции, для измерения времени жизни и квантового выхода. Прингсгейм [17] в своей монографии Флуоресценция и фосфоресценция дает хорошее представление о методах эксперимента, применявшихся примерно до 1949 г. Исчерпывающий обзор по спектроскопии и спектрофотометрии в видимой и ультрафиолетовой области дан Вестом [33]. Более специфичные вопросы, связанные с определением флуоресценции и фосфоресценции, источниками света, приемниками, флуориметрами, приборами для регистрации спектров флуоресценции и фосфоресценции и для измерения времени жизни и квантового выхода рассмотрены Вотерспуном и Остером [35]. Исчерпывающая библиография, собранная Липсетом [36], содержит ссылки на работы, в которых рассматриваются вопросы методики исследования переноса энергии и сходных явлений. [c.81]

I Д1.2.5. продолжительность измерений и воспроизводимость результатов. Сама природа флуоресценции обеспечивает отсутствие процессов денатурации вещества в ходе измерения, что создает возможность применения импульсной флуориметрии. Продолжительность одного цикла измерений интенсивности флуоресценции с разрешением во времени обычно составляет 1 мс, в том числе фаза запаздшания - 400 мкс фаза измерения - 400 мкс и. еа >фаза - 200 мкс. Следовательно, в течение 1 с можно выполнить 1000 измерений и накопить сигаал. [c.156]

Внелабораторные анализы. Ощущается необходимость разработки и создания специальных приборов для каждой сферы применения флуоресценции с временным разрешением. Должны выпускаться автоматические флуориметры двух типов. Приборы первого типа должны быть простыми, надежными, способными работать иа сухих элементах питания. В будущем приборы этого типа, как и соответствующие реагенты, должны использоваться и в больницах, и на дому. Такой прибор позволит осуществить довольно сложные клиничеосие анализы, например, непосредственно в операционной или на дому, ще он даст возможность самим больным контролировать ход лечения. Приборы второго типа должны обеспечивать оценку профилей опрвделяе ых веществ (например, бактерий или вирусных антигенов) на соответствующих стрипах микропланшетов или дисках. [c.163]

Системы ПЦР в реальном времени, основанные на молекулярных маяках , обладают гораздо большей специфичностью, чем система TaqMan, и позволяют обнаруживать одиночные замены нуклеотидов в ДНК. Кроме того, в отличие от последней системы, они пригодны для количественной оценки содержания продукта ПЦР в реакционной смеси по завершении реакции с помощью флуориметра. Молекулярные маяки могут быть использованы и для обнаружения продуктов реакции в системах изотермической амплификации, которые будут подробнее рассмотрены ниже [307]. [c.230]