Метод измерения площади пятна

Метод измерения площади пятна. Если на бумагу наносить одинаковые объемы растворов, то площади S получающихся на хроматограмме пятен пропорциональны логарифму концентрации веществ в каждом пятне [c.101]

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В РАСТВОРЕ МЕТОДОМ ИЗМЕРЕНИЯ ПЛОЩАДИ ПЯТНА НА БУМАГЕ [9] [c.272]

Работа 6. Количественное определение глюкозы в растворе методом измерения площади пятна на бумаге........... [c.279]

Метод измерения площади пятна [c.134]

Одним из методов количественного анализа является метод измерения площади пятна. Если на полоску бумаги наносить постоянные объемы растворов, то площадь получающихся на хроматограмме пятен будет пропорциональна логарифму концентрации веществ в каждом пятне [c.90]

Методы испытания пятен на бумаге включают а) измерение площади пятна б) измерение большой полуоси овального пятна в) измерение количества прошедшего или отражен- [c.564]

Помимо методов, основанных на измерении площади пятна, существуют способы количественной оценки соединений по размерам пятен [56]. В этих способах учитывают только ширину и длину пятен или же максимальный и минимальный диаметры пятен и оптическую плотность в центре пятна [57]. [c.40]

Особенно подробно изложены в книге вопросы теории и техники двух основных методов количественного определения веществ в зонах метода, предусматривающего элюирование, и методов прямого (без > отделения сорбента-носителя) определения веществ в зонах хроматограмм. Последние методы более чувствительны, менее трудоемки и поэтому весьма перспективны при анализе микро- и субмикроколичеств смесей. Рассмотрены три главных способа количественного определения веществ непосредственно на хроматограммах визуальное сравнение интенсивности окраски зон, измерение площади пятна и денситометрия. [c.6]

Некоторые авторы [35, 90] предпочитают простые изящные методы, основанные на измерении площади пятна, несмотря на несколько большую точность спектрофотометрических методов. Другие [70], наоборот, предпочитают метод элюирования измерению площади пятна для определения адреналина, хотя сведения о статистических данных не приводят. Авторы работы [29], определявшие барбитураты, считают, что колориметрический метод лучше. [c.74]

Для определения разделенных соединений непосредственно на пластинке ее опрыскивают реагентом (см. раздел 10.3), который через некоторое время образует с определяемым соединением окрашенные или флуоресцирующие вещества, концентрации которых количественно определяют денситометром. Этот метод включает сканирование пятна (хроматограммы) в проходящем или отраженном свете, который затем попадает в фотоумножитель. Разность в интенсивности падающего и проходящего или отраженного света в виде электрического сигнала регистрируется на графике. Высота пика является мерой интенсивности пятна. Градуировочный график строят в координатах масса вещества — площадь пика, причем точность измерения площади пятна денситометром не менее 2—5% [2]. [c.195]

Количественный анализ непосредственно на слое сорбента можно осуществлять по размеру пятна, так как площадь пятна зависит от количества определяемого вещества. Площадь пятна зависит от активности сорбента, от толщины его слоя и объема наносимого раствора. Поэтому для сравнения на эту же пластинку наносят известные количества определяемого вещества. Площадь пятна определяют как и в хроматографии на бумаге. Метод прост в исполнении и не требует специального оборудования. Однако его скорее можно считать полуколичественным методом вследствие недостаточной точности измерения площади пятна и нарушения линейности соотношения 5 = а пС+ , если концентрация вещества больше 80 мкг. [c.124]

Существуют и другие методы количественного определения веществ на бумажных хроматограммах способ визуального сравнения пятен, методы измерения площади или интенсивности окраски пятна, метод вымывания компонента из бумаги. [c.246]

Можно использовать и другие прямые (измерение площади пятна, флуориметрия) и косвенные (флуориметрия, полярография, ИК-спект-роскопия, газовая хроматография) методы количественного определения вещества в пятне, однако вплоть до настоящего времени они не нашли применения в химии углеводов. [c.48]

Количественное определение ионов после хроматографического разделения на бумаге можно проводить несколькими методами 1) извлечением из пятен отдельных компонентов после разделения смеси и количественное их определение обычными микроаналитическими методами 2) измерением площади пятен на хроматограммах. Площадь 5 пятна на хроматограмме является функцией концентрации С компонента в анализируемой пробе 8 = a g + В, где а и й — постоянные, определяемые экспериментально. Однако первый метод трудоемкий, а при использовании второго приведенная зависимость площади пятна от логарифма концентрации соблюдается не строго и для получения более или менее надежных результатов необходимо проводить много параллельных определений. Одной из причин разброса результатов анализа является то, что при хроматографировании разделение происходит по нескольким механизмам протекающим одновременно — распределение ионов между двумя растворителями, ионный обмен, образование малорастворимых осадков, физическая адсорбция на бумаге. [c.341]

Методы количественного хроматографического анализа на бумаге могут быть разделены на две группы методы, не требующие удаления определяемого вещества с бумаги, и методы основанные на вымывании разделенных веществ. В первом случае используют зависимость интенсивности окраски и величины площади пятна от количества вещества. Строят градуировочные графики по серии стандартных растворов с различным содержанием определяемого вещества. Однако площадь и интенсивность пятна может зависеть не только от концентрации, но и от размера капли, сорта бумаги, качества растворителя, температуры и других условий. Поэтому только при строгом соблюдении одинаковых условий разделения при градуировке и анализе можно получить правильные результаты. Более точные результаты получают при измерении интенсивного/ [c.207]

В целом, пределы ошибок, допускаемых при использовании методов с измерением площади или размеров пятен обычно составляют 5—6%. На размер ошибки может, например, оказывать влияние неравномерность распределения вещества в пятне и некоторые другие причины. [c.40]

Более точным является метод, основанный на измерении длины или, чаще, площади пятна. [c.134]

Количественная хроматография на бумаге и в тонком слое весьма перспективна ввиду ее простоты и в принципе должна быть точным методом анализа, поскольку в идентичных условиях количество вещества в зоне всегда будет определяться количеством вещества, нанесенным в точку на линии старта. Кроме того, распределение в зоне должно быть постоянным, для того чтобы метод конечного измерения (по площади пятна, по показаниям денситометра или путем измерения оптической плотности после элюирования) обеспечивал количественное определение первоначально нанесенного вещества. Однако на практике исключительно трудно создать идентичные условия развития каждой хроматограммы. Цель настоящей работы — обсуждение факторов, вызывающих изменения в распределении вещества в зонах, и способов их преодоления. [c.9]

Измерение площади пятен — метод Фишера [53] — основан на том, что при нанесении на бумагу постоянных объемов растворов площади пятен, получаемых на хроматограмме, пропорциональны логарифму концентрации вещества в каждом пятне. Точность метода -f-5%. [c.44]

Таким образом, 8 линейно зависит от lg q. Однако для тонкослойной хроматографии это правило, по-видимому из-за несовершенного детектирования границ пятна, не всегда выполняется. Поэтому количественная оценка может быть проведена только прямым сравнением с серией стандартных растворов. Для этого Зеер [18] предложил следующий метод стандартный объем определяемой смеси веществ наносится в виде точек через определенные интервалы на слой силикагеля. Между этими точками наносятся стандартные объемы ряда эталонных растворов различной концентрации. После развития и проявления хроматограмм приготовляют контактную фотографию пластинок. На ней измеряют площади соответствующих пятен и строят по эталонным растворам графическую зависимость измеренных площадей от количеств вещества. Из полученного графика находят содержание вещества в определяемой смеси. [c.303]

Более точным является метод, основанный на применении градуировочного графика S —Ig , где S — площадь пятна, с — концентрация. В указанных координатах график линеен. Используется также измерение интенсивности окраски пятна, которая пропорциональна концентрации. Методами распределительной жидкостной хроматографии успешно анализируют смеси катионов в неорганическом качественном анализе, смеси аминокислот и других органических кислот, смеси красителей и т. д. [c.350]

Прямые определения на пластинке могут быть выполнены различными методами 1) полуколичественно путем визуального сравнения величины и интенсивности окраски получающихся пятен с размерами и окраской пятна, образующегося при хроматографировании известных количеств вещества 2) количественно по точно определенному размеру площади пятна 3) фотометрированием пятна (в некоторых случаях в УФ-свете) 4) измерением излучения радиоактивных веществ и т. д. [c.110]

Помимо так называемого метода измерения площади пятна , основанного всецело на кажущемся размере пятна, без учета распределения концентрации вещества в нем, существуют четыре оптических метода для количественного сканирования in situ [c.105]

Фотохимическая активность соединений серебра используется в аналитической химии. Например, бумага, пропитанная растворами нитрата серебра, после облучения ультрафиолетовым светом приобретает светло-брон-зовую окраску, обусловленную выделением металлического серебра. Эта бумага, применяется для количественного определения хроматов путем нанесения на нее анализируемого раствора и измерения площади пятна, образовавшегося после облучения [257]. Велькулеску [403] использовал фотохимическую активность бромида серебра для разработки чувствительного метода обнаружения серебра. [c.121]

Количественный анализ хроматограмм можно осуществлять, исходя из размера пятна, так как площадь пятна зависит от количества элемента, нанесенного на слой сорбента. Площадь пятна будет зависеть от активности сорбента, толщины его слоя и объема наносимого раствора. Для сравнения на эту же пластинку наносят контрольные количества этого вещества с известной концентрацией. Площадь пятна определяют, как в хроматографии на бумаге (стр. 90). Этот метод анализа хроматограмм скорее можно считать полуко-личественным методом ввиду недостаточной точности измерения площади пятна и нарушения линейности соотношения 8 = а пС + Ь, если концентрация вещества будет > 80 мкг. [c.101]

Методики, основанные на использовании хроматографических характерик, довольно многообразны. Количество вещества можно определить, например, методом шкалы, когда на одной и той же хроматограмме получают пятно раствора с неизвестной концентрацией и пятна нескольких стандартов. Концентрацию неизвестного раствора находят прямым сравнением площади пятна и интенсивности его окраски у исследуемого и у стандартного растворов. Более точным является метод, основанный на измерении площади пятна или интенсивности его окраски. Методами распределительной жидкостной хроматографии успешно анализируют смеси катионов в неорганическом качественном анализе, смеси аминокислот и других органических кислот, смеси красителей и т. д. [c.167]

Методы, используемые для количественного определения веществ в зонах, могут быть различными и зависят от природы анализируемых веществ элюирование (с последующим весовым, спектрофотометрическим, флуориметрическим, полярографическим, радиометрическим измерением), измерение площади пятна, денсито-метрирование. Считается, что наиболее точным является метод элюирования (ошибки 1 %), но для его осуществления необходимо сравнительно большое количество материала. Точность денситометри-ческих методов несколько ниже (1—2%), но для анализа требуется гораздо меньше материала. Определения по измерению площади зон дают среднюю точность 5—10%. [c.107]

Сеховский [159] применил тонкослойную хроматографию на слоях силикагеля для количественного определения хромовой кислоты, использовав метод измерения площади пятен, дававший стандартное отклонение 6%. Элюирующим растворителем была смесь метанол—вода (8 2). При низких концентрациях хромовой кислоты можно было в десять раз уменьшить предел обнаружения, производя опрыскивание 1 %-ным раствором дифенилкарбазида в ацетоне, благодаря чему пятна окрашивались в фиолетовый цвет. [c.509]

В другом методе [420] определение заканчивают поглощением выделяющегося арсина бромиднортутной индикаторной бумагой и измерением площади окрашенного пятна. Мышьяк предварительно отделяют от германия соосаждением с двуокисью марганца. [c.163]

Количественный анализ в ТСХ возник на ранних этапах развития метода. Первые попытки количественной оценки хроматограмм, основанные на измерении размеров пятен, были сделаны Фишером в 1948 г. [18]. В 1962 г. предложен [19] метод количественного анализа, основанный на использовании эмпирического соотношения между площадью пятна и количеством содержащегося в нем вещества. При последующем развитии количественной ТСХ с пластинки снимался слой адсорбента в области хроматографических пятен и из него вымывалось исследуемое вещество, которое затем анализировалось каким-либо физическим или физико-химическим методом. Начиная с 1967 г., намечается переход от методов извле-"чения вещества из тонкослойной пластинки (так называемых элюционных методов) к количественному анализу in situ, т. е. анализу непосредственно на слое путем сканирования пятен ж отыскания распределения вещества путем измерения свето-поглощения, флуоресценции, радиоактивности или каких-либо других свойств (например, электропроводности [20]). [c.267]

Исследование вещества на слое может быть выполнено путем измерения только площади пятна или, лучше, интегрированной площади и плотности пятна на проявленной и обнаруженной хроматограмме или на ее фотокопии или фотографии. Эти величины затем связывают с количеством вещества в пятне, используя стандарты и калибровочные кривые. Для образцов и стандартов, хроматографированных одновременно, эти измерения можно сделать при визуальном сравнении, путем измерения площадей, с помощью денситометрии, флуори-метрии, спектрофотометрии и методом меченых атомов. [c.168]

Методом денситометрии измеряется суммарная функция площади пятна и его интенсивности. Это означает, что начальная плошадь нанесенного пятна больше не является таким критическим параметром, как в двух предыдущих методах, хотя следует все-таки заботиться о том, чтобы площади пятен были одинаковыми. Факторы, влияющие на площадь окончательного пятна, влияют и на его интенсивность, но противоположным образом. Голдман и Гуцол /28/рассмотрели теоретические основы денситометрии, которая базируется на теории Кубелки - Мунка, описывающей взаимодействие света с беспорядочно распределенным поглощающим веществом, и пришли к выводу, что проводить измерения предпочтительнее в проходвшхем свете, чем в отраженном. [c.171]

Прямое количественное обнаружение на хроматограмме можно проводить, измеряя площадь пятна или определяя интенсивность его окраски, но такое определение сопряжено со значительными экспериментальными погрешностями и поэтому пригодно только для ориентировочных измерений. Более точные методы определения содержания соединений непосредственно в слое требуют применения специальных приборов. Все методы этой группы основаны на принципах фотометрии, причем чаще всего применяют денситометрию, затем спектрофотомет-рию, флуориметрию и авторадиографию. Тем читателям, которых интересуют указанные методы обнаружения, следует обратиться к отличной обзорной статье Иорка и Крауса [24] или монографии Тачстона [67]. [c.121]

Количественный анализ можно вести фотометрическим методом путем измерения интенсивности окраски пятен фотометром в отраженном свете. Полученные данные наносят на график и сравнивают с данными комбинированной кривой, построенной по стандартным препаратам [211]. Как и в бумажной хроматографии, определяют концентрацию веществ по площади пятна (полуколичественный метод, который может быть переведен в количественный при получении воспроизводимости окраски) и измерением интенсивности окраски рефлектометри-ческим методом [172]. [c.44]

В сочетании с другими методами и при использовании прибо- / ров этот метод иногда позволяет быстро получить воспроизводимые результаты. Так, после проявления пятен на хроматограмме окрашенные зоны компонентов можно количественно охарактеризовать денситометрическим методом. С его помощью измеряется суммарная функция площади пятна и его интенсивность менее чем за 10 мин, однако в этом случае необходим прибор. Метод включает сканирование конечного пятна на хроматограмме пучком света. Отраженный или прошедший свет попадает на фотоумножитель, и разность в интенсивностях прошедшего и отраженного света измеряется по электрическому сигналу и записывается в виде хроматографических кривых, как при элюировании с колонки. Хроматограммы сканируют на двухлучевом саморегистрирующем и интегрирующем денситометре Хромоскон . Количество вещества определяют по градуировочным графикам, построенным в координатах высота пика — масса вещества в пятне. Массу вещества в пятне получают измерением площади под хроматографической кривой с использованием интегратора. Чтобы уменьшить ошибку, которая может составить 1,7— 2,8%, необходим тщательный подбор проявляющих реагентов интенсив- [c.125]

Освальд и Флук [288] исследовали различные методы установления связи между площадью пятна и количеством вещества на тонкослойных хроматограммах. Эти авторы на примере многих хроматограмм подтвердили данные Пурди и Трутера. Однако во многих случаях зависимость площади пика пятна от массы вещества не была линейной. Поэтому они разработали методику, основанную на том, что на любой кривой можно найти короткие участки с линейной зависимостью. Освальд и Флук исследовали зависимость размеров пятна от массы на примере различных веществ и обнаружили, что в пределах 20 % измеряемой величины можно найти достаточно хорошо выраженную линейную область, выше которой размер пятна сильно уменьшается с ростом количества вещества. В то же время ниже этой точки небольшие размеры пятна сильно увеличивают ошибку. Для изученных алкалоидов была эмпирически выделена оптимальная область размера пробы. Площадь пятен авторы измеряли планиметром. Результаты проведенных измерений показали, что площадь пятна должна быть не менее 100 мм, чтобы ошибка измерения была минимальной. [c.349]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология