Клеточные линии гибридом

Клеточные линии гибридом служат источником моноклональных антител [34] [c.226]

Соматическая гибридизация — процесс вовлечения в генетическую рекомбинацию хромосомы и гены ядра и органелл вне сексуального цикла, например, путем слияния изолированных протопластов. Приводит к появлению гибридных клеточных линий и соматических гибридов растений. [c.467]

В ряде случаев для определения частоты соматического мутагенеза необходимо исследовать огромное число клеток, экспрессирующих один и тот же V-ren. Практический подход для идентификации такой группы состоит в характеристике иммуноглобулинов, получаемых от серии клеточных линий, осуществляющих иммунный ответ на одинаковый антиген. (Используемые для этой цели антигены представляют собой маленькие молекулы, имеющие дискретную структуру, которая, по-видимому, обусловливает стойкий иммунный ответ. Они отличаются от больших белков, отдельные части которых могут стимулировать образование разных антител. Эти маленькие молекулы получили название гаптенов. Для того чтобы придать им свойства антигена, их соединяют с инертным белковым носителем. Иммунизируя таким антигеном мышь, получают реактивные лимфоциты, которые соединяют путем слияния с миеломными клетками для получения гибридом. Такие гибридные клетки продолжают независимый синтез желаемого антитела.) [c.515]

Вариабельность потери хромосом человека у клеточных гибридов мышь—человек облегчает картирование человеческих генов. Для картирования генов мыши используют клеточные гибриды мышь—хомячок. Если присутствие продукта изучаемого гена коррелирует с наличием какой-либо одной хромосомы в гибриде, то этот ген, скорее всего, локализован в этой хромосоме. Должны соблюдаться два условия. Во-первых, исследуемый признак, кодируемый хромосомами человека, должен четко (на клеточном уровне) отличаться от аналогичного признака мыши. Например, исследуемая линия клеток человека содержит мутантную лактатдегидрогеназу А (LDH-A). Этот фермент отличается от белка, кодируемого соответствующим мышиным геном. Эти две формы легко разделяются при гель-электрофорезе. Второе условие, необходимое для картирования,-возможность идентификации данной человеческой хромосомы, присутствующей в исследуемой клеточной линии. [c.297]

В этой главе будет приведено описание процедур сохранения и получения характеристик клеточных линий и гибридом Американской коллекции типовых культур (АТСС). Изложенные в главе материалы основаны на результатах исследований последних 20 лет, когда стали ясны сложности, связанные с микробным, а также перекрестным загрязнением клеток, и увеличилась потребность в хорошо охарактеризованных линиях клеток. [c.109]

Келер и Мильштейн (Kehler, Milstein) получили первые клеточные линии гибридом, секретирующих моноклональные антитела [c.207]

Рис. 20.21. Привязка маркера к специфическому хромосомному району с использованием делеционной панели гибридных клеток. А. Схематическое представление районов хромосомы, присутствующих в монохромосомном клеточном гибриде (А) и в клеточных линиях В—J делеционной панели гибридных клеток. Районы (с 1 по 10) определяются границами делеций в хромосомах делеционной панели. Закращенный прямоугольник - центромера каждой хромосомы. Б. Результаты ПЦР-амплификации ДНК гибридных клеточных линий (A-J) с использованием STS-маркеров (с STS-a по STS-e). Наличие или отсутствие ПЦР-продукта указано знаком плюс или минус соответственно. Данные о наличии или отсутствии ПЦР-продуктов клеточных линий делеционной панели с STS-маркером используются для определения хромосомного района, в котором находится STS. Например, STS-d отнесен к району 7, поскольку соответствующий ПЦР-продукт образуется при амплификации каждой клеточной линии делеционной панели, в которой присутствует район 7.

Имеются многочисленные наблюдения (хотя и не складывающиеся пока в полную картину), что глиальные клетки — это не только просто цемент , т. е. скрепляющая ткань, но эти клетки играют также важную активную роль. Возможно, они контролируют внеклеточное окружение нейрона и непосредственно влияют на интеграцию групп нейронов. Кроме того, они могут снабжать нервную клетку важными веществами, метаболитами и факторами питания. Более подробно роль глиальных клеток, в частности на примере онтогенеза, мы рассмотрим в гл. И, где увидим, что по крайней мере в клеточной культуре эти не нервные клетки ганглия влияют на экспрессию синтеза медиатора. Вот еще один пример. В клеточных культурах линия клеток нейробластомы проявляет способность к образованию выростов нейритов (аксонов нервной клетки), но не функциональных синапсов, тогда как линии гибридов нейробластомы и глиомы образуют синапсы, что является еще одним доказательством важной дополнительной функции глиальных клеток. Периферические глиальные клетки (шванновские клетки) участвуют в восстановлении поврежденных нервов. Было даже показано, что после денервации щванновская клетка может заменять дегенерированное нервное окончание в мыщце и даже выделять медиатор. [c.31]

Сортировка X- и Т-хромосом. В работе [333, 330] осуществлена препаративная проточная цитофотометрия X- и У-хромосом человека. Х-хромосома была выделена из клеточной линии с кариотипом 48,ХХХХ с помощью однолучевой сортировки. Этот материал был использован для приготовления библиотеки хромосомной ДНК после обработки рестриктазой ЕсоК1 и клонирования в фаге (см. разд. 2.3,2,2), У-хромосома отобрана с помощью двулучевого сортера из материала гибридной клеточной линии китайский хомячок X человек . Получение клеточных гибридов будет описано в разд, 3,4,3 в связи с локализацией генов в хромосомах. Важная особенность гибридных клеток человек х мышь или [c.132]

Хромосомный набор клеток или клеточных гибридов служит важным критерием для прослеживания природы культивируемых клеток. С помощью этого критерия можно обнаружить взаимное загрязнение различных линий клеток или обнаружить хромосомную локализацию того или иного генетического маркера. При росте in vitro клетки часто изменяют свой хромосомный набор, и большинство клеточных линий утрачивают характерный диплоидный набор хромосом. Клетки становятся анеу плоидными и характеризуются широким диапазоном числа хромосом в расчете на клетку (разд. 2.1). [c.102]

Принимая во внимание широкое использование гибридомноп технологии, никакой обзор свойств клеточных линий не будет полным, если в нем не будет упомянута эта область исследований. Наиболее надежным критерием идентификации является, естественно, специфичность моноклональных антител, продуцируемых гибридомой. Если этот клеточный продукт отсутствует и его синтез не может быть восстановлен, то линия гибридомных клеток ценности не представляет. Однако потенциальное количество различных гибридом, теоретически равное числу существующих эпитопов, намного превышает число имеющихся различных линий слившихся клеток. Это создает проблему для любого учреждения, создающего банк гибридом, поскольку ни одна индивидуальная организация не в состоянии идентифицировать все моноклональные антитела даже в современной ситуации, когда количество антител относительно невелико. [c.155]

Используемые для получения гибридом плазмацитомные клеточные линии дефектны по ферменту гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазе (ГГФРТ) и отбираются на среде. [c.117]

В том случае, когда клетки после слияния рассевают в лунки панели для культуры ткани объемом 2 мл, вероятность того, что в одной лунке окажется более одного клона, повышается. Просматривая культуры под инвертированным микроскопом, можно наблюдать два и более клонов в лунке. Клонирование клеток, продуцирующих антитела нужной специфичности, предпринимают немедленно после образования монослоя (обычно па 21—28-е сутки после гибридизации). Тем не менее гибридо-ыу продолжают наращивать в нескольких лунках, а затем во флаконах, пока не образуется достаточное для замораживания и хранения в жидком азоте количество клеток. Необходимо иметь, по меньшей мере, пять ампул исходной клеточной взвеси на случай, если возникнут трудности или неудачи при клонировании. Во время культивирования гибридомы во флаконах культуральную среду тестируют для выявления антител нужной специфичности. Если наблюдается прогрессирующее сни-жение образования антител на стадии роста культуры во флаконах, то это означает, что несекретирующие варианты гибридных клеток обогнали в росте антителообразующие клетки, В таком случае важно отобрать антителообразующие гибрид ные клетки путем клонирования, а небольшое количество клеток из этих флаконов сохранить для последующих процедур клонирования. Клонирование клеток из тех флаконов, где а культуральной среде выявляют прогрессивное снижение образования антител, почти всегда безуспешно. Если все же очень важно выделить такую клеточную линию, то следует извлечь из жидкого азота и разморозить образец клеток, замороженный на самой ранней стадии культивирования и сразу же после восстановления клеток в культуре провести клонирование. Клони-рование может быть осуществлено либо путем высевания небольшого количества клеток в мягкий агар, либо с помощью лимитирующих разведений. [c.139]

В отличие от гибридом грызунов клетки человека, образующие антитела, разумеется, невозможно выращивать в брюшной полости сингенного хозяина. Однако исследуется возможность размножения клеток человека в брюшинной полости крыс и мышей nude. Большинство же препаратов МКА человека в настоящее время получают непосредственно в виде культуральной среды. Если антитела предполагается использовать для диагностических целей, достаточно просто профильтровать среду через мембрану с диаметром пор 0,2 мкм, чтобы удалить небольшую примесь вируса, который может латентно инфицировать лимфобластоидные клеточные линии. [c.162]

Выращенные таким образом в небольшом количестве культуры гибридных клеток проверяют на способность секретировать в питательную среду специфических антител и далее рассевают до отдельных клеток методом последовательных разведений. В результате, каждая клетка потенциально может стать родоначальницей клона, продуцирующего mAb требуемой специ-<4 ичности. Поскольку синтез антител в ряде случаев может быть токсичным для клетки-продуцента, вместо культивирования in vitro на этой стадии параллельно используют культивирование in vivo в виде асцитных опухолей у мышей. Отмечено, что непродолжительное культивирование in vivo в дальнейшем способствует стабилизации клеточных линий, продуцирующих mAb. Полученные таким образом, охарактеризованные клоны гибридом являются источником неограниченного количества mAb данной специфичности, которые можно получать, культивируя гибридомы в искусственной питательной среде или асцитной жидкости организма мышей. [c.405]

Для соматических клеток уже в 60-х гг., т.е. в самом начальном периоде развития генетики соматических клеток, для проведения генетического анализа, был предложен своеобразный метод парасексуального процесса (Barski et al., 1960, 1961). Оказалось, что при совместном культивировании, клетки разных линий способны сливаться, образуя двуядерные и многоядерные гетерокарионы. В конечном счете возникают две одноядерные дочерние клетки, содержащие хромосомы, полученные от исходных родительских клеток, которые во многих случаях могут дать начало длительно раз-множаюш имся гибридным клеточным линиям. Такие гибриды могут содержать полный набор хромосом одной из исходных клеток и одну или несколько хромосом из другой. Такие гибридные клетки служат мощным орудием исследования функций индивидуальных хромосом. Методы гибридизации получили широкое распространение и стали совершенствоваться во всех лабораториях, изучающих генетику соматических клеток. В Советском Союзе гибридизация соматических клеток впервые была осуществлена в Лаборатории соматических клеток ИАЭ (Волкова, Какпакова, 1972). [c.252]

Необходимо хорошее оборудование для работы с культурами, в том числе СОг-термостат (содержание СОг в воздухе — 5%)- Желательно иметь ламинарный бокс для осуществления манипуляций в стерильных условиях. Следует отметить, что знание основ асептики и некоторый опыт в работе с клеточными культурами важны для успешного проведения работ. Для визуального наблк>дения за культурами необходим инвертированный микроскоп (например, Olympus СК модель снабжена широкой ровной подста вкой, объективом ХЮ и бинокулярной насадкой WF 15Х). Кроме контейнеров с жидким азотом для хранения плазмацитом и гибридом, для получения моноклональных антител необходимо не так уж много специального оборудования. Позднее будут рассмотрены возможные варианты процедур скрининга, которые, по-видимому, следует усовершенствовать и более широко внедрять в практику. Для иммунизации необходимо иметь инбредные линии мышей (обычно BALB/ ) или крыс (Lou). Если предполагается выращивать гибридомы в виде асцитных опухолей, то понадобится довольно большое количество животных. [c.117]

Для получения гибридомы, образующей антитела N 5/1, мышей иммунизируют перевиваемыми лимфобластами человека, берут клетки мышиной селезенки и проводят их слияние с клетками мышиной миеломы, а затем отбирают полученные гибриды. В качестве реагента, содержащего моноклональные антитела, используют разбавленный 1 10 нли 1 20 супернатаит среды, в которой культивировалась данная линия гибридных клеток. Чтобы избежать спонтанного Т-клеточного розетирова-иия, образование розеток с участием моноклональных аитнтел к DR-антнгенам проводят с эритроцитами быка (ЭБ), а ие барана. [c.202]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология