Иммунофлуоресценция

Рис. 3.6. Иммунофлуоресценция клеток, зараженных вирусом денге, после дот-блот гибридизации. В этом случае клетки не распластываются, как в монослое. Зараженные клетки дают яркую иммунофлуоресценцию (на фотографии они белые)

А. Метод непрямой иммунофлуоресценции [c.97]

Эти приемы упрощают и ускоряют исследование, однако анализ занимает самое меньшее 6 ч. Гораздо большие возможности сокращения времени анализа воды заложены в методах, в которых вообще исключено подращивание бактерий. Прямой микроскопический подсчет общего числа микроорганизмов может быть выполнен за несколько минут (А, С. Разумов, 1932 А. С. Разумов, Л. Е. Корш, 1962 Т. 3. Артемова, Л. Е. Корш, 1974). Принципиально возможно и прямое специфическое определение групп микроорганизмов с помощью, например, иммунофлуоресценции. Прямые методы позволяют создать приборы и автоматы для быстрого объективного учета общего микробного загрязнения воды. [c.71]

Использование системы фермент — субстрат позволяет готовить постоянные препараты для обычной микроскопии. Альтернативные способы окрашивания пригодны для исследований одновременно двух антигенов. Иммунофлуоресценция (так же как и исследования с двойной меткой) позволяет детально окрашивать клеточные структуры [c.29]

МЕТОДЫ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОМПЛЕМЕНТА [c.300]

Бактериальная агглютинация и иммунофлуоресценция используют интактные клеткн того же или родственного штамма, вида и т. п. [c.95]

Коллективная монография, написанная ведущими специалистами, работавшими в Базельском институте иммунологии (Швейцария), посвящена методам иммунохимии и клеточной иммунологии. Авторы имеют большой опыт в этой области, что определяет основные достоинства книги — удачный подбор методов и исчерпывающее, но вместе с тем краткое описание каждого из них. Рассмотрены определение активности антител, их анализ методом пептидных карт, исследование белков методами электрофореза, изоэлектрофокусирования и изотахофореза, методы иммунофлуоресценции, культивирования лимфоцитов, изотопные и другие методы. [c.4]

Б. Возможные расхождения между результатами, получаемыми методом иммунофлуоресценции и в цитотоксическом тесте [c.179]

Метод непрямой иммунофлуоресценции как способ идентификации вируса при отсутствии ЦПД [c.76]

Чашки инкубируют при 37°С до тех пор, пока в 30—50% клеток методом иммунофлуоресценции не будет обнаруживаться вирусный антиген. [c.79]

Обнаружение вирусного антигена методом иммунофлуоресценции [c.82]

Препараты либо используют для иммунофлуоресценции,, бо хранят при —70 °С. [c.83]

Развитие современных аналитических методов, таких, как авторадиография и иммунофлуоресценция, показали, однако, что несколько нейропептидных медиаторов могут присутствовать в качестве нейромодуляторов в одном аминэргическом нейроне. Этот факт, хотя он и не совместим с принципом Дейла, без сомнения, не противоречит его правильному толкованию. [c.216]

Белок 14-3-2 имеется, видимо, только в нейронах центральной нервной системы [Ю]. Это — димер, состоящий из двух полипептидных цепей с М 39 ООО его обнаруживают с помощью иммунофлуоресценции у млекопитающих и птиц. Функция этого белка неизвестна однако недавно была обнаружена энолазная активность в его высокоочищенных препаратах. [c.315]

Флуоресцируюш ий метчик должен специфически связываться с изучаемым веш,еством и не должен связываться с другими сопутствующими веществами. Это требование особенно существенно в медицинской диагностике, иммунофлуоресценции и люминесцентной цитохимии, где специфичность связывания метчика с изучаемым веществом, тканью или клеткой целиком определяет пригодность его для целей специфического обнаружения. Во всех подобных случаях необходимо проводить тщательный контроль, позволяющий убедиться в том, что весь метчик действительно специфически связался, а не связанный удален из среды. Особую ценность при этом имеют метчики, которые не флуоресцируют в растворенном состоянии и начинают флуоресцировать только после связывания с изучаемым веществом. Таким свойством обладает 1-диметиламинонафталин-5-сульфо-хлорид (дансилхлорид), применяемый для метки белков. Еще лучшим метчиком оказался флуорескамин (I), флуоресцирующий только после связывания с аминокислотами и б елками [13] [c.291]

Такое группирование бобовых с соответствующими им видами Rhizobium было особенно полезно для производства ино-кулятов. После первоначального разделения на кросс-иноку-лирующие группы, систематики и производители инокулятов обратили внимание на другие признаки и методики, посредством которых можно детальнее охарактеризовать виды Rhizobium скорость роста [547], индуцированную активность к антибиотикам [548], иммунофлуоресценцию [549] и продолжительность жизни [550]. Таким образом, теперь могут быть селектированы штаммы, которые способны вызывать образование клубеньков только у одного определенного вида или разновидности растений, и вследствие этого лучшие азотфиксирующие бактерии могут быть выбраны как специфический ино-кулят. [c.276]

Гигантский аксон кальмара можно извлечь из тела животного, а его цитоплазму выдавить, как зубную пасту из тюбика. Если капельку вьщавленной аксоплазмы расплющить покровным стеклом и заснять через микроскоп на видеопленку (разд. 4.1.6), то можно увидеть, как органеллы движутся вдоль тонких нитевидных дорожек . Методом иммунофлуоресценции в сочетании с электронной микроскопией удается показать, что эти дорожки представляют собой отдельные микротрубочки. [c.311]

И в самом деле, существует целый ряд указаний на то, что многие клеточные компоненты связаны in vivo с теми или иными частями цитоскелета. Органеллы, ограниченные мембраной, такие как митохондрии и лизосомы, нередко по отдельности перемещаются в цитоплазме весьма характерным образом. Это особое скачкообразное движение происходит как бы по прямым, но невидимым дорожкам и сопровождается внезапными осгановка-ми, часто с последующим возвратом по прежней траектории, а иногда с резким изменением направления. На электронных микрофотографиях можно различить тонкие нити, тянущиеся от этих органелл к близлежащим белковым филаментам. С белковыми филаментами часто бывают ассоциированы группы цитоплазматических рибосом, а после экстракции клеток неионными детергентами значительная часть белоксинтезирующего аппарата остается связанной с цитоскелетом. Даже отдельные растворимые белки, например некоторые ферменты гликолиза, оказываются связанными в миофибриллах с актиновыми филаментами, а в фибробластах - с напряженными нитями, и здесь их можно выявить с помощью иммунофлуоресценции. [c.128]

Иммунофлуоресценция внеклеточных волокон фибронектина (А) и внутриклеточных пучков актиновых филаментов (Б) в трех культивируемых фибробластах крысы. Для выявления фибронектина использованы специфические антитела с присоединенным к ним флуоресцеином, для выявления актина-антитела, связанные с родамином. (R.O. Hynes, А. Т. Destree, ell, 15, 875-886, 1978.) [c.240]

Вирусы можно также внести в культуру вместе с загрязненным трипсином, но главным источником вирусного загрязнения культуры оказываются сами клетки, и особенно первичные клетки. Поскольку многие виды животных могут страдать латентной вирусной инфекцией, не сопровождаемой явными симптомами, то и многие культуры первичных клеток могут нести в себе эти вирусы. Проблема усложняется еще и тем, что многие клетки первично получаются из опухолей, возникших в результате вирусной трансформации, а следовательно могут нести в себе весь вирусный геном или его часть в той или иной форме. Манипуляции с клетками при установлении первичной культуры могут привести к индукции вируса и соответствующему цитопатогенному эффекту. Проблема оказывается более серьезной, если видимого цитопатогенного эффекта не наблюдается, но вирус при этом продолжает реплицироваться с низкой скоростью или только в части клеток. Так, первичные культуры клеток от детей с лимфомой Бёркитта не обнаруживают никаких признаков присутствия вируса Эпштейна-Барр в течение нескольких пассажей, после чего некоторые клетки начинают обнаруживать положительную иммунофлуоресценцию (Неп-1е, Henle, 1966). [c.121]

Люминесцентная микроскопия дает также возможность выявить и оценить численность отдельны с групп микроорганизмов в исследуемой пробе. Это достигается в результате использования специальных флуорохромов (например, калькофлуора белого — для выявления грибов), методов иммунофлуоресценции и др. [c.122]

Toxoplasma. Токсоплазмоз - это широко распространенный кокцидиальный зооноз, который у человека по тяжести протекания изменяется от практически внешне не проявляющейся инфекции до болезни с полной клинической картиной. Согласно данным серологических обследований, 30% взрослых людей являются носителями возбудителей этой болезни, в связи с чем токсоплазмоз представляет реальную опасность для пациентов с пересаженными органами, новорожденных и людей с пониженным иммунитетом. Два наиболее часто применяемых метода диагностики токсоплазмоза - непрямая иммунофлуоресценция ШФА) и ELISA [c.129]

Основная часть неприлипших клеток (97—99%) — это Т-клетки (они идентифицированы в реакции цитолиза с сывороткой анти-Thy-l,2 с комплементом морской свинки). Выход Т-клеток, нанесенных на колонку, составлял у нас 50—90%, а примесь В-лимфоцитов (клеток Ig+ по данным иммунофлуоресценции) — от 0,5 до 2,57о. [c.303]

Метод бактериальной агглютинации. Иммунофлуоресценция метод разведений с меченым антиглобулином. [c.95]

Суспензии других клеток Иммунофлуоресценция и иммуноферментные методы прямые или с использованием меченого антиглобулииа (кн. 2), Комплемент-зависимая цитотоксичность с использованием красителя или Сг. Иммунофлуоресценция лучше — с использованием клеточного сортера. Антисыворотку проверяют на способность тормозить связывание меченого контрольного конъюгата (кн. 2). [c.96]

Для скрининга рекомендуется культивировать различные количества клонированных Т-клеток (от 2-10 до 1,25-10 ) с МПК (10 ) или не-Т-клетками (3-10 ) в 200 мкл RPMI — СПК в лунках плоскодонных микропанелей. В качестве контроля используют культуры, содержащие только Т-клетки, и культуры, содержащие только МПК. Число В-клеток с цитоплазматическим иммуноглобулином можно измерить через 6 сут с помощью иммунофлуоресценции, а количество секретируемого иммуноглобулина в среде — через 8 сут с помощью иммуноферментного анализа (ELISA). В описанных выше условиях оптимальная стимуляция В-клеток происходит только при использовании 5—10-10 Т-клеток, в результате чего образуется 100—300 мкг иммуноглобулина на 1 мл среды. [c.276]

В-Клетки периферической крови стимулировали клетками аллореактивного клона ж 2 мл массовой культуры или в условиях лимитирующих разведений в луиках микропанелей Терасаки. В-Клетки идентифицировали окрашиванием поверхностного Ig. Клетки, содержащие цитоплазматический выявляли на 8-е сутки, используя стандартный метод иммунофлуоресценции на фиксированных препаратах. Общее содержание иммуноглобулина как в массовых культурах, так и прн использованин лимитирующих разведений определяли с помощью иммуноферментного анализа. [c.279]

При применении метода иммунофлуоресценции результат должен быть подтвержден контрольной пробой на специфичность. Сравнительно надежна в этом отношении реакция торможения флуоресцентное окрашивание подавляется после предварительной обработки среза не-конъюгированной специфической антисывороткой обработка неиммунной сывороткой не приводит к торможению. [c.298]

Личинки комаров обрабатывают почти так же. Отделяют новы, готовят парные отпечатки, фиксируют их ацетоном и следуют с помощью иммунофлуоресценции, как описано вы-I. Если имеются конъюгированные с флуоресцеином антите-против данного вируса, флуоресцентный анализ можно 5вести еще быстрее. [c.83]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология