Мутанты вирусные

В результате этой реакции аденин превращается в гипоксантин, гуанин в ксантин и цитозин в урацил. Последнее превращение особенно важно, поскольку при этом оба основания, как исходное, так и получающееся в результате превращения, могут естественным образом входить в состав РНК. Если последовательность оснований кодирует последовательность аминокислот, то превращение цитозина в урацил эквивалентно изменению информации. Поскольку, как предполагают, гипоксантин эквивалентен гуанину, его появление также ведет к изменению информации. Образование ксантина приводит либо к разрушению кода, так как он не несет никакой информации, либо к появлению гуанина после репликации. Из более чем ста мутантов, возникающих под действием азотистой кислоты (так называемые нитритные мутанты), примерно одна четвертая часть содержит одну измененную аминокислоту и лишь немногие содержат две измененные аминокислоты в белковой субъединице оболочки вируса. В большинстве же случаев не удается установить каких-либо изменений в белковой части. Этот результат можно понять, если допустить, что часть молекулы РНК вируса кодирует другие белки (ферменты), необходимые для осуществления вирусной инфекции и для репликации. [c.364]

На искусственно индуцированных мутантах вируса табачной мозаики (ВТМ) были получены данные, подтвердившие существование триплетного кода [71, 72, 195]. Если обработать азотистой кислотой РНК из ВТМ, то в строении вирусной РНК произойдут следующие изменения [71, 72] во-первых, цитозин дезаминируется в урацил (Ц У), а аденин дезаминируется в гипоксантин, который в коде ведет себя как гуанин (А Г). Обработав такой РНК зараженные растения, можно получить мутанты вируса, у кото- [c.275]

Рассмотрим теперь вкратце не совсем понятные химические явления, лежащие в основе таких явлений, как генетическая рекомбинация, интеграция вирусной ДНК с геномом клетки-хозяина и исключение профага из хромосомы клетки-хозяина. О сложности процесса рекомбинации свидетельствует тот факт, что у мутантов, дефектных по способности к рекомбинации, мутации локализуются не в одном, а в нескольких участках (генах) хромосомы Е. oli-, соответствующие гены обозначаются через гесА, В, С, F, G и Н. Бактерии с мутациями в некоторых из этих генов необычайно чувствительны к ультрафиолетовому облучению, что свидетельствует об их неспособности репарировать (восстанавливать) повреждения ДНК, вызванные действием ультрафиолета (гл. 13, разд. Г, 2). Из этого следует, что некоторые из ферментов, обеспечивающих процесс рекомбинации, нужны клетке также и для восстановления повреждений, вызванных действием ультрафиолетового излучения. Однако специфические функции большинства продуктов этих генов все еще до конца не выяснены. Считают, что у Е. oli имеются две полноценные системы общей рекомбинации. В геноме фага Я, имеются гены, кодирующие другую рекомбинационную систему, функционирующую независимо от продуктов генов фага Я, inf и xis (рис. 15-15), необходимых для интеграции и исключения генетического материала вируса и обеспечивающих процессы сайт-специфической (для определенных участков геномов) рекомбинации между генами клетки-хозяина и вируса. [c.281]

Как правило, реконструированные частицы, получаемые путем объединения белковой оболочки с вирусной РНК, обработанной азотистой кислотой, не обладают инфекционной способностью. Следовательно, в большинстве случаев дезаминирование оснований под действием азотистой кислоты приводит к летальным мутациям. В некоторых случаях мутации не легальны и белок мутантного вируса отличается от нативного белка по аминокислотному составу. Например, известен нитритный мутант, у которого на местах, занятых в нативном вирусе пролином, аспарагиновой кислотой и треонином, находятся соответственно лейцин, аланин и серии. В белке ВТМ С-концевая последовательность аминокислотных остатков имеет вид -Гли-Про-Ала-Тре. Протеолитический фермент карбоксипептидаза отщепляет от С-конца при каждом акте отщепления одну аминокислоту. [c.364]

Другой подход к проблеме кодирования заключался в использовании мутантов вируса табачной мозаики, полученных в искусственных условиях. При обработке вирусной РНК азотистой кислотой цитозин превращается в урацил, а аденин — в гуанин. Белок вирусов, образованный при участии РНК, обработанной азотистой кислотой, отличается от белка необработанного вируса в том отношении, что в нем некоторые аминокислоты замещены другими. Сравнивая изменения аминокислот с известными изменениями нуклеотидов, которые обусловлены действием азотистой кислоты, можно расшифровать код. [c.488]

Если в трансгенном растении экспрессируется ген, кодирующий белок оболочки вируса, который обычно инфицирует это растение (а данный белок зачастую является основным белковым компонентом вируса), то способность вируса проникать в растение и распространяться в нем часто значительно уменьщается. Механизм ингибирования пролиферации вируса в присутствии генов белка оболочки точно не установлен, однако ясно, что противовирусное действие начинает проявляться на ранних стадиях репликации вируса, так что вирусные частицы не образуются. Это снижает вероятность возникновения спонтанных вирусных мутантов, способных к репликации в присутствии вирусного белка оболочки. С помощью этого подхода были получены устойчивые к различным вирусам трансгенные растения множества различных зерновых культур (табл. 18.3). И хотя абсолютной устойчивости при этом достичь не удавалось, ее уровень был весьма высок. Более того, обнаружилось, что ген белка оболочки одного вируса иногда обеспечивает устойчивость к широкому кругу неродственных вирусов. Ценность подхода повышается и благодаря тому, что трансгенные растения развиваются одинаково как в полевых условиях, так и в лаборатории. [c.396]

Изменения в структуре ДНК встречаются очень редко. Так, например, в среднем ген может удвоиться 10 раз, прежде чем произойдет заметная мутация [128а]. Тем не менее, работая с бактериями нли бактериофагами, мы можем обследовать чрезвычайно большое число особей в поисках мутаций. Если, например, посеять один миллион вирусных частиц на чашку с агаром в условиях, позволяющих распознать мутацию определенного гена, то в среднем мы можем надеяться обнаружить один мутант. Наиболее часто встречаются мутации, обусловленные заменами пар оснований (точковые мутации). Оии происходят в результате включения неправильного основания при репликации или репарации ДНК. При таких мутациях одно основание в триплете кодона замещается другим. В результате возникает другой кодон, что приводит к замене в соответствующем белке одной аминокислоты на другую . Замену одного пиримидина на другой С—)-Т или Т—)-С) или одного пурина на другой пурин иногда называют транзицией, тогда как замену пурина на пиримидин или, [c.246]

Открытия и перспективы использования белковой инженерии. Это уже упомянутые высоколизиновые мутанты кукурузы и ячменя, это отработка новых технологий, позволяющих по структуре гена предсказать положение участков молекул белка, определяющих его антигенную активность. Например, такие участки выявлены у вирусных белков, что дало возможность синтезировать соответствующие им олигонуклеотиды (10—15 аминокислотных остатков) и использовать их при вакцинации животных. [c.398]

Поскольку дефектные по тимидинкиназе ВКО спонтанно возникают с относительно высокой частотой (примерно 1 на 10 -10" вирусных частиц), нередко проводят котрансфекцию клеток каким-либо селективным маркером и нужным геном. Это облегчает разграничение спонтанных мутантов и мутантов, полученных с помощью гомологичной рекомбинации. В качестве селективного маркера обычно используют ген neo, кодирующий фермент неомицин-фос-фотрансферазу И и обеспечивающий устойчивость к аналогу канамицина G-418. Этот ген, в отличие от других селективных маркеров, остается стабильным при встраивании в геном ВКО. [c.240]

Вирусные частицы, дефектные в том отношении, что они содержат меньшее по сравнению с нормальным количество нуклеиновой кислоты, обнаружены и среди многих мутантов РНК-содержаш их фагов, а также среди фагов f2, выраш,енных в присутствии фторурацила или реконструированных в отсутствие фактора созревания (см. гл. X, разд. В). Эти частицы содержат РНК с константой седиментации 14—18S (вместо 26S) и не обладают инфекционностью в то же время па электронных микрофотографиях они не отличаются по своему внешнему виду от типичных фаговых частиц. Исследования, проведенные недавно на мутанте фага f2, содержащем РНК с константой седиментации 14S, показали, что у этой РНК отсутствует 5 -конец, а также цистрон, который в полной вирусной РНК кодирует образование белка оболочки [297]. [c.189]

Эти мутанты возникают спонтанно, а также могут быть индуцированы аналогами оснований во время внутриклеточного развития фага f2 в этом случае мутации возникают в результате ошибок копирования либо во время синтеза минус -цепей РНК при образовании РФ, либо во время синтеза плюс -цепей на РП. Мутанты могут быть также индуцированы путем обработки зрелых вирусных частиц или выделенной из них инфекционной РНК химическими мутагенами, такими, как азотистая кислота. [c.475]

II. Характеристика вирусных мутантов....... [c.8]

Мутации часто приводят к появлению белков, неполноценных как по своим химическим свойствам, так и но функциональной активности. Как уже было отмечено, все до сих пор полученные штаммы ВТМ, мутантные по белку оболочки, менее стабильны, чем дикий тип. Многие из таких мутантов оказались настолько нестабильными, что вообще не удалось выделить мутантный вирус. Для нескольких дефектных штаммов вирусные белки, выделенные из тканей, листьев, инфицированных этими вирусами, хотя и сохраняли способность к образованию спиральных агрегатов, не могли образовывать палочковидные частицы с РНК ВТМ (как дикого тина, так и мутантного). Два из этих белков были проанализированы [182, 449, 450], и выяснилось, что у одного из них произошла одна замена, а у другого — две. При этом две из этих трех аминокислот оказались расположенными у края немутирующего участка (остатки 95 и 112 см. фиг. 13). [c.207]

Г. Е. Фрадкин. Ничего невероятного в наших данных нет. Они совпадают с литературными данными, например с результатами исследований Каплана, показавшего, что при ультрафиолетовом облучении умеренных фаговых частиц каппа выход вирулентных мутантов достигает 2%. Я хочу подчеркнуть, что в наших экспериментах сравнительно высокий выход фаговых частиц, преодолевающих иммунитет, был обнаружен только при облучении в условиях непрямого действия излучения, когда преобладают радиационнохимические реакции, близкие по своему механизму к химическим и фотохимическим (ультрафиолетовое излучение) реакциям, вызывающим мутации у покоящихся вирусных корпускул. Кроме того, необходимо заметить, что для фага X, как указывают Стент и Бертани, типично легкое возникновение фн-зиолого-генетических изменений, нарушающих функцию иммунитета. В наших эксперименгах мы в основном выявляли изменения эгого рода, и поэтому число частиц, преодолевающих иммунитет, столь непривычно велико. Весьма возможно, что изменения, называемые Стентом физиолого генетическими, являются точечными мутациями, легко репарируемыми клетками во время первого цикла репродукции. [c.174]

Единственный генетический эксперимент, который может быть поставлен на ВТМ, заключается в том, что используется РНК различных мутантов ВТМ. Мутанты отличаются друг от друга либо морфологически но внешней картине некрозов, которые образуются на листьях, либо по патологии заболевания. Суш,ествуют мутанты ВТМ, приводяш,ие только к местным поражениям листьев, в которые введен впрус, в то время как обычно встречаю-Ш.ИЙСЯ дикий тип ВТМ есть общее заболевание всего организма. Извлекая из разных мутантов ВТМ отдельно РНК и белок, мы можем произвести реконструкцию вирусов, соединяя различные РНК с гомологическими белками от других мутантов. В результате получаются вполне активные вирусные частицы, причем они всегда несут в себе признаки того мутанта, от которого взята РНК, и не воспринимают никаких качеств от мутанта, давшего белок. К сожалению, более сложные генетические опыты с ВТМ невозможны, так как для него не удается наблюдать генетическую рекомбинацию. [c.359]

В последнее время Гиреру и Шрамму удалось получить мутанты ВТМ путем химического мутагенеза in vitro па очищенной РНК. Применялась обработка РНК азотистой кислотой (HNOg), которая действует дезаминирующе на аденин, цитозин и гуанин.Было получено несколько десятков мутантов ВТМ ири заражении растений химически измененной РНК. Измененные вирусы удалось отобрать и очистить (пользуясь внешними морфологическими различиями в поражениях табачного листа иод действием разных мутантов). Более того, был очищен белок из нескольких десятков подобных мутантов ВТМ и после триптического гидролиза изучены отпечатки пальцев белка. Оказалось, что многие (до 40) мутированные вирусы имеют измененные белки, причем изменения сводятся к перемене 1—2 аминокислотных остатков в цепи. Несколько десятков других мутантов не обнаруживали никаких изменений в вирусном белке но сравнению с диким типом. Это означает, что информация, заключенная в РНК ВТМ, содержит больше, нежели один цистрон. [c.360]

В 1963 г. в Голландии были начаты исследования по преиммунизации томатов для защиты от мозаики. Для этого всходы инокулировали ослабленным вирусом мозаики табака (индуцированный мутант), специфическая интерференция должна была подавлять заражение вирулентным диким штаммом. Подобный вирус для получения индуцированного иммунитета (штамм М П-16) оказался вполне пригодным и имеется в продаже [386]. Хорошие результаты применения этого метода получены также в Шотландии, НРР и СССР. В ГДР вирусный препарат под названием томавир допущен в производство. [c.221]

Разработка метода бляшек для вирусов гриппа в клетках фибропластов куриного эмбриона ( EF) [111 117] позволила идентифицировать одношаговые мутанты и установить частоту реверсии [117]. Она привела также к подтверждению более ранних исследований по кросс-реактивации вируса, инактивированного УФ-луча-ми [4, 19, 32, 64J, и, что особенно ван<но, к основанию методов клонирования некоторых бляшкообразующих штаммов вируса 1111]. Позднее использование перевиваемых человеческих клеточных линий расширило перечень вирусов, для изучения которых можно было применять метод бляшек и готовить рекомбинанты, различающиеся по типу образующихся бляшек [121, 122]. Только значительно позднее было установлено, что загадочная неспособность вирусов гриппа образовывать бляшки обусловлена главным образом необходимостью обязательного расщепления вирусного НА эндогенными протеазами клетки хозяина, без чего невозможны инфицирование клетки и репликация вируса [67, 76]. Возможность применения только тех нескольких вирусов (в основном WSN и RWS — вариантов оригинального штамма WS), которые образовывали отчетливые бляшки, значительно ограничивала проведение генетических экспериментов. К настоящему времени установлено, что образование бляшек вирусом WSN, по крайней мере [c.15]

Но особенно широко известен автор своими исследованиями по разделению вируса табачной мозаики на белковый и нуклеиновокислотный компоненты и искусственному воссозданию из этих компонентов целого, активного вируса, выполненными в середине пятидесятых годов. Эти его работы стали теперь классическими. Вошли в курсы молекулярной биологии и более поздние работы Френке.яь-Конрата по инфекционности свободных вирусных нук.теиновых кислот, а также по первичной структуре белков мутантов вируса табачнох мозаики в связи с расшифровкой генетического кода. [c.5]

Исходя из этого, мол но предложить следующий план действия в поисках реакций, которые уничтожили бы инфекционность некоторого вируса, следует отдавать предпочтение таким реагентам, которые препятствуют комплементарному спариванию оснований — необходимому условию репликации если же целью работы является получение мутантов, то следует избрать реагенты, изменяющие таутомерное равновесие у одного или нескольких типов оснований. При этом н елательно, чтобы реагент непосредственно взаимодействовал с атомами основания. Изучение таких мутагенных реакций и их влияния на вирусы, а также на вирусные и прочие нуклеиновые кислоты стало весьма плодотворным направлением исследовательской работы. [c.191]

Недавно удалось выяснить условия, при которых происходит агрегация вирусных белков и РНК с образованием вирусоподобных частиц еще для одного, несколько меньшего, класса вирусов — РНК-содержащих фагов группы f2. Частицы, полученные из оболочечного белка фага MS2 и его РНК, в соответствующих условиях имели на электронных микрофотографиях такой же вид, как и частицы исходного фага, однако константа седиментации таких частиц составляла 69S вместо 81S и, кроме того, они не обладали инфекционностью [491]. Очень похожие результаты были получены в опытах с фагом fr [211]. Свойства этих неинфекционных частиц напоминали свойства фагов некоторых генетически дефектных штаммов (атЬег-мутанты), у которых отсутствовал фактор созревания — гистидинсодержащий белок, получивший название белка А. Фаги дикого типа этой группы содержат по одной молекуле белка А (см. гл. VHI, разд. В). [c.223]

Первый набор мутантов НА, которые были проанализированы экспрессией в рекомбинантах SV40-HA, имел делеции в последовательностях, кодирующих N- и С-терминальные гидрофобные участки белка. Эти участки играют решающую роль в транспорте НА в пределах инфицированной клетки. N-терминальная сигнальная последовательность требуется для векторного переноса образующегося полипептида через мембрану эндоплазматического ретикулума завершенный белок погружен своей С-терминальной гидрофобной последовательностью в липидный двойной слой клеточной мембраны или вирусной оболочки. [c.179]

В то же время F. Fenner и J. Sambrook 55], занимаясь проблемами генетики вирусов животных, обратили внимание на важную роль условно-летальных мутантов при изучении физиологии вирусной репликации. В том же (1964) году появилось первое сообщение о выделении температурочувствительных (ts) мутантов вируса животных (Синдбис) 32]. Использовав эти результаты, а также доступность бляшкообразующего вирусного штамма (WSN), [c.186]

Для индукции вирусных мутантов используют набор разнообразных мутагенов (табл. 16). Чаще всего вирус выращивают в присутствии 5гфторурацила (5-ФУ). Эффективным является включение 5-ФУ вместо У (до 50% основного замещения) при этом другие основания остаются неизмененными [80]. При репликации 5-ФУ-содержащей РНК происходят переходы А—>-Г и У—>-Ц из-за того, что уменьшается способность 5-ФУ таутомеризовать до енольной формы в результате в базовом спаривании вместо А участвует Г [64]. [c.191]

Смотреть страницы где упоминается термин Мутанты вирусные: [c.226] [c.226] [c.83] [c.107] [c.465] [c.214] [c.249] [c.279] [c.14] [c.16] [c.21] [c.74] [c.75] [c.79] [c.92] [c.93] [c.97] [c.167] [c.180] [c.181] [c.187] [c.189] [c.190] [c.194]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология