Очистка белков диализом

При кристаллизации используют предварительное фракционирование и диализ для очистки белка от соли. Для получения требуемой чистоты препарата белок несколько раз перекристаллизовывают. [c.43]

Крупные частицы белка не способны проходить через так называемые полупроницаемые перепонки, примером которых может являться животный пергамент, целлофан и др. Этим пользуются для очистки белков путем диализа очищаемый белок помещают в трубку или мешочек из целлофана и погружают в проточную воду. При этом минеральные вещества, а также органические вещества с небольшими молекулами проникнут через поры целлофана и будут удалены с текущей водой, а молекулы белков, не способные пройти через поры, останутся в целлофановой трубке. [c.343]

При переработке в пищевой белок биомассу дрожжей тщательно очищают. С этой целью клеточные оболочки дрожжевых клеток разрушают с помощью механической, щелочной, кислотной или ферментативной обработки и затем экстрагируют гомогенную дрожжевую массу органическим растворителем. После очистки от органических и минеральных примесей полученный дрожжевой продукт обрабатывают щелочным раствором для растворения белков, затем белковый раствор отделяют от оставшейся массы дрожжей и направляют на диализ. В процессе диализа из [c.265]

В другом варианте очистки белок, осажденный сульфатом аммония или натрия, после диализа растворяют в О, М трис-НС1-буфере с pH 7,5, содержащем 1,0 М Na l, и фракционируют на колонке сверхтонкого сефакрила S-200 (Pharma ia). На колонку размером 2,5X90 см наносят 2 мл раствора белка и элюцию проводят тем же буферным раствором при скорости протекания 10—15 мл/ч. [c.51]

Тепловая обработка. Около 1/4 всего количества осадка растворяют в 0,05 М триэтаноламиновом буфере, pH 7,6, содержащем 2,0 М сульфат аммония и 1 мМ дитиотреитол, до достижения концентрации белка 40 мг/мл и инкубируют в водяной бане при 50°С в течение 5 мин Затем быстро охлаждают в ледяной бане и денатурировавшие белки удаляют центрифугированием при 15 000 в течение 40 мин. Белок из раствора осаждают добавлением сульфата аммония до 3,2 М концентрации, центрифугируют (40 мин при 15 000 ) и осадок растворяют в 10 мМ ЭДТА, содержащем 1 мМ дитиотреитол (pH 7,6). Проводят диализ против того же раствора. После диализа концентрация белка должна составлять 50—60 мг/мл. Этот раствор используют для дальнейшей очистки фермента. [c.262]

При групповом разделении методом гель-фильтрации удается в значительной мере избежать разбавления, если учитывать объемные соотношения, подробно рассмотренные в разделе Обессоливание . При очистке суспензии вируса (выделенного из столовой свеклы) от сопутствующих пигментов путем гель-фильтрации на 4—6-кратном (по отнощению к объему образца) объеме сефадекса 0-75 разделение составляло лишь 20—30% [14]. Свободные от белков катехоламины — адреналин и норадреналин — были выделены без разбавления из 20 мл сыворотки (27% объема колонки) гель-фильтрацией на сефадексе 0-25 (2X25 сж, 78 мл) [15]. Кислюк [16] показал, что с помощью гель-фильтрации на сефадексе 0-50 удается гораздо легче отделить фермент от его кофакторов, чем с помощью диализа. Таким путем удается получить кофакторы в сравнительно небольшом объеме и изучить эффект их вторичного присоединения к ферменту. После гель-фильтрации был выделен совершенно неактивный белок, активность которого вновь восстанавливалась (до 86% исходной) после добавления низкомолекулярной фракции. При диализе активность фермента снижалась только до 38% [16]. Групповое разделение гель-фильтрацией оказалось чрезвычайно удобным методом отделения низкомолекулярных антигенов от антител. Диссоциацию комплекса антиген — антитело часто осуществляют, добавляя избыток гаптена, который затем можно легко отделить от белка гель-фильтрацией [17]. В бактериологии гель-фильтрация на сефадексе 0-75 или биогеле Р-100 может служить для удобного выделения экстрацеллюлярных токсинов. Перед засевом культуральную среду освобождают от высокомолекулярных примесей гель-фильтрацией. Затем на той же колонке после удаления бактерий можно вновь отделить высокомолекулярные токсины от культуральной среды [18]. [c.142]

Аполкпопротеин Е — эукариотический полипептид, синтезируемый в клетках Е. oli, где он находится в нерастворимом состоянии, но его очищают с помощью аффинной хроматографии в присутствии денатурирующих агентов [32] (табл. 4.20). Для этого используют хроматографию на гепарин-сефарозе с 2 М мочевиной. В этих условиях эукариотический белок, чтобы узнавать лиганд, должен частично принять нативную конформацию. Далее используются еще две стадии очистки, одна из которых — это гель-фильтрация на сефакриле S-300 в присутствии 6 М гуанидинхлорида. Затем после диализа, при котором белок ренатурирует, осуществляется конечная стадия очистки с исполь- [c.124]

Осаждаемый сульфатом аммония белок собирают центрифугированием (1200 g в течение 20 мин при 4°С), растворяют в ФСБ-А и три раза диализуют против 50-кратного объема ФСБ-А для удаления сульфата аммония. Подробности очистки и характеристики сывороток приведены в вышеупомянутой монографии Клаузена ( lausen, 1969). [c.209]

Для элюирования антигенов клеточной поверхности мы в нашей практике обычно используем 50 мМ H I-диэтиламиновый буфер, pH 11,5, содержащий 0,5% дезоксихолата, и сразу же после элюирования нейтрализуем элюат глицином. Затем определяем поглощение при 280 нм и измеряем антигенную активность препарата. Выход препарата обычно составляет около 50% от количества антигена, нанесенного на колонку. Фракции элюата концентрируем ультрафильтрацией и, если необходимо, освобождаем от дезоксихолата с помощью диализа. Однажды при очистке Т-лимфоцитарного антигена, названного MR ОХ-34, мы не смогли определить в элюате ни антигенной активности, ни даже поглощения при 280 нм. При этом в экстракте, элюированном с колонки после нанесения антигена, антигенной активности тоже не было. Мы попробовали провести элюцию 0,5 М пропионовой кислотой без детергента и добились успеха, причем с хорошим выходом антигенной активности (А. F. Williams, неопубликованные данные). То же самое было в случае с крысиным антигеном D4(W3/25). Элюирование щелочным буфером дало неудовлетворительные результаты, но пригодным оказался 0,1 М H l-глициновый буфер, pH 2,5 [30]. При этом с колонки элюировался белок с нужной мол. массой,, однако его антигенная активность частично была потеряна. Критериями очистки в данном случае служил сам факт утраты антигенной активности исходного экстракта после нанесения на колонку, а также элюирование из нее белка с известной мол. массой. [c.179]

Даже после длительной очистки белка путем диализа в нем остается некоторое количество ионов, сорбированных, белковыми частицами. Для полного удаления загрязняющих белок ионов используют метод электродиализа возле полупроницаемых мембран диализационной камеры поме- [c.32]

Следует, однако, принять во внимание, что оценка степени очистки вируса по отношению к общему азоту или белку не всегда достоверна. Так, при опредеяении азота по методу Кьельдаля гетероциклические азотсодержащие вещества трудно минерализуются. Ошибка при определении азота увеличится если на одном из этапов очистки применяли высаливание сульфатом аммония даже с последующим диализом препарата. Метод определения белка по Лоури 513] также имеет свои недостатки, так как для построения калибровочного графика должен быть использован белок данного вируса, а не какой-либо другой. [c.149]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология