Сульфат аммония для высаливания

В основу работы по выделению и очистке белков положены такие свойства белков, как растворимость, наличие заряда, молекулярная масса. На различиях в растворимости белков основаны методы высаливания, а именно осаждение белков сульфатом аммония или хлоридом натрия. Такое осаждение представляет собой обратимую денатурацию, так как белки при добавлении воды вновь растворяются и не теряют нативных свойств. [c.24]

Удобен следующий прием медленного добавления сульфата аммония при изоэлектрическом высаливании белков в забуференный рас твор белка опускают целлофановый мешочек с твердым сульфатом аммония, электролит диффундирует через мембрану и вызывает осаждение белка. Осадок белка, содержащий неорганическую соль, диали-зуют (дистиллированная вода) сульфат аммония удаляется и белок переходит в раствор. Для переосаждения используют описанный выше прием. Кристаллизации белка можно достичь после подходящего числа повторений этого процесса. Другой удобный метод переосаждения и иногда кристаллизации — добавление этилового спирта к раствору белка в изоэлектрической точке и охлаждение. [c.689]

Некоторые фибриллярные белки практически нерастворимы в воде, так что все остальные компоненты препарата можно удалить растворением. Растворимые белки чаще всего осаждают из водных растворов путем высаливания, которое сводится к добавлению большого количества соли, например сульфата аммония. Разные белки осаждаются прн разных концентрациях соли, поэтому можно отделить фракцию белков, осаждающихся в заданном интервале концентраций, а затем очищать эту фракцию дальше. Методы, основанные на таком поэтапном осаждении, широко используются как первый шаг очистки, поскольку они позволяют получать сразу большие количества материала. [c.159]

Если экстрагируемое вещество хорошо растворяется в воде,, то применяют метод высаливания к раствору добавляют твердые соли (хлорид или сульфат натрия, сульфат аммония и др.). При этом меняется плотность раствора, уменьшается растворимость, что улучшает результаты экстракции. [c.49]

Для очистки ферментов применяют осаждение их из водных растворов органическими растворителями такими, как метиловый, этиловый, изопропиловый спирты, ацетон высаливание сульфатами аммония, натрия, цинка, хлоридом натрия фракционирование. Высушивание предварительно очищенных и сконцентрированных препаратов осуществляют в распылительных сушилках или методом сублимации. [c.89]

В этом разделе будут в широком аспекте рассмотрены два опубликованных обзора [119, 75]. Совокупность, которую принято называть растворимыми белками, оказывается разнородной, даже если альбумины и глобулины рассматривать по отдельности. Их можно фракционировать, а некоторые компоненты — очищать методами, традиционно применяемыми для белков, среди которых наиболее популярными являются высаливание сульфатом аммония, ионообменная хроматография и препаративный электрофорез. [c.181]

Огромное количество работ по очистке и фракционированию ферментов выполнено с применением сульфата аммония, который чрезвычайно эффективен в качестве осаждающего агента и в первую очередь вследствие своей хорошей растворимости, которая к тому же мало изменяется нри снижении температуры. Соль не только не оказывает денатурирующего действия на ферментные белки, но, наоборот, стабилизирует большинство из них. Поэтому при ее использовании нет надобности вести фракционирование системы при низкой температуре. Даже самые чистые препараты сульфата аммония имеют слабокислую реакцию и во всех случаях при использовании его необходим тщательный контроль pH в растворах. Обычно для того чтобы не увеличивать объемов при высаливаниях, вводят сухую соль или пользуются наиболее концентрированными, насыщенными растворами ее. Характеризуя концентрацию сульфата аммония при осаждении ферментных белков, ее часто выражают десятичной дробью, считая полное насыщение за 1,00. Иногда ту же величину показывают [c.147]

Из растворителей более тяжелых, чем вода, применяются хлористый метилен, хлороформ, четыреххлористый углерод. Для уменьшения растворимости в воде веществ, относительно хорошо в ней растворимых, водные растворы таких соединений насыщают сульфатом аммония или поваренной солью. Такой прием называется высаливанием. [c.41]

Фракционирование сульфатом аммония. К экстракту медленно добавляют сухой сульфат аммония в количестве 300 г/л. Через 1 ч после добавления последней порции соли осадок отделяют центрифугированием (20 000 , 30 мин) и к супернатанту вновь добавляют сухой сульфат аммония (117 г/л). После стояния в течение часа осадок отделяют центрифугированием (20 ООО 30 мин) и к супернатанту добавляют сульфат аммония (13 г/л) оставляют на ночь при 0°С. В процессе высаливания стараются свести к минимуму вспенивание раствора образующуюся пену удаляют пипеткой. В ходе фракционирования поддерживают pH раствора в диапазоне 7,3—7,6 (при 0°С) путем добавления аммиака. В том случае, если на последней стадии осадок не образуется, добавляют еще сухого сульфата аммония (13 г/л). [c.254]

Для выделения у-глобулинов из сыворотки кролика обычно используют метод трехкратного высаливания сульфатом аммония при конечном насыщении 33%. Соли затем удаляют диализом. [c.308]

Из органических растворителей, обладающих плотностью, меньшей, чем вода, для экстрагирования водных растворов применяются эфир, бензол. Однако эфир весьма летуч и огнеопасен, образует взрывоопасные перекисные соединения и заметно растворим в воде (около 8%). Из растворителей более тяжелых, чем вода, применяются хлористый метилен, хлороформ, четыреххлористый углерод. Для уменьшения растворимости в воде веществ, относительно хорошо в ней растворимых, водные растворы таких соединений насыщают сульфатом аммония или поваренной солью. Такой прием называется высаливанием. [c.36]

Осаждение иммуноглобулинов легко осуществить высаливанием при нейтральном pH, при котором они малорастворимы, так что в случае меченого антигена связанную метку можно осадить из раствора вместе с оставшимся свободным антителом, оставляя, таким образом, свободную метку на поверхности. В качестве соли предпочитают использовать сульфат аммония, но недостатком метода в таком случае является высокий уровень неспецифического связывания. [c.577]

Первые попытки разделения белков плазмы были основаны на фракционном осаждении их сульфатом аммония или спиртом. Фибриноген легко может быть получен методом высаливания. Электрофоретический анализ кровяной сыворотки показывает наличие в ней четырех основных фракций, названных альбумином и а-, р- и Y- Глoбyл и нa-ми. С улучшением техники разделения было показано, что эти фракции являются не индивидуальными белками, а группами белков, обладающими одинаковылш подвижностями. Дальнейшие успехи, достигнутые в период второй мировой войны Коном и Эдсоллом , были стимулированы большим спросом на пла шу, необходимую для предотвращения шока, зависящего от поддержания осмотического давления белками сыворотки. Цельная плазма содержит протеолитические ферменты, которые в большой мере расщепляют белки плазмы, поэтому получение белковой фракции крови в сухом виде сулило большие преимущества. [c.670]

Классическое определение глобулинов сыворотки связано с высаливанием ее сульфатом аммония, поскольку глобулинами называют белки, выпадающие в осадок при полунасыщении сыворотки этой солью. [c.8]

Высаливание. При добавлении растворов солей щелочных и щелочноземельных металлов происходит осаждение белков из раствора. Обычно белок не теряет способности растворяться вновь в воде после удаления солей методами диализа или гельхроматографии. Высаливанием белков обычно пользуются в клинической практике при анализе белков сыворотки крови и других биологических жидкостей, а также в препаративной энзимологии для предварительного осаждения и удаления балластных белков или выделения исследуемого фермента. Различные белки высаливаются из растворов при разных концентрациях нейтральных растворов сульфата аммония. Поэтому метод нашел широкое применение в клинике для разделения глобулинов (выпадают в осадок при 50% насыщении) и альбуминов (выпадают при 100% насыщении). [c.26]

Указанный фенольный метод был изменен Московским филиалом ВНИИЖа. Было замечено, что прибавляемый в расгвор сульфат аммония частично извлекается вместе с сапонином, причем полученный сапонин не удается очистить от сульфата аммония. Вследствие этого были проведены опыты с добавлением ЮО /о фенола Из такого расчета, чтобы вода, остающаяся в растворе сапонина, (Образовала 90% фенол. При такой концентрации раствора отпадает Надобность в высаливании сапонина сульфатом аммония. [c.61]

Высаливание сульфатом аммония необходимо вести при 80% насыщении, исходном pH среды 7,8 и температуре 10—15°С. Длительность формирования осадков 24 ч. Отделяют осадок центрифугированием при 3000—4000 об/мин в течение 10—15 мин. Ферментный осадок лиофильно или под вакуумом сушат при 25—30°С до остаточной влажности 10—12%- [c.201]

Высаливание. Высокие концентрации сульфата аммония, а также солей щелочных металлов осаждают белки. Механизм осаждения связан со способностью солей разрушать гидратную оболочку растворенных белковых макромолекул, что приводит к их агрегации и последующему осаждению. Далее используют ряд методов концентрирования и тонкой очистки белков, причем наиболее эффективными являются различные хроматографические процедуры. К преимуществам хроматографических методов следует отнести [c.54]

Гидроперекись получали взаимодействием 0,15 моль непредельного спирта с охлажденной до —10° С смесью 0,39 моль 40%-ной перекиси водорода и 0,42 м.оль 93%-ной серной кислоты. Реакцию проводили при —5° С в течение 5 ч при энергичном перемешивании. После высаливания сульфатом аммония, промывки и высушивания над безводным сульфатом магния получено 18,5 г сырой гидроперекиси с содержанием 95% чистого продукта (выход 98%). Гидроперекись очищали перегонкой в вакууме в атмосфере азота (выход 25—30%). Получаемая таким способом гидроперекись способна к полимеризации без добавления инициаторов. Характеристики этой гидроперекиси, а также всех других синтезированных перекисных соединений приведены в табл. 1. [c.60]

Получение чистых нативных биологически активных белков— гораздо более трудная задача, чем их простое осаждение. Для этого обычно используют метод высаливания, которое основано на том, что многие растительные белки выпадают в осадок при насыщении их растворов различными минеральными солями (хлористым натрием, сернокислым натрием, сернокислым магнием и т. д.) и все белки осаждаются при насыщении их растворов сернокислым аммонием. Отдельные группы белков выпадают в осадок при определенной концентрации сернокислого аммония в растворе. Этот метод осаждения белков под действием сульфата аммония уже давно применяется при работе с белками. Осажденные при высаливании белки освобождаются от солей диализом и вновь переходят в раствор, но их свойства при этом не изменяются. [c.213]

Работа 41. Высаливание белка сульфатом аммония. . Работа 42. Высаливание белка хлористым натром. , Работа 43. Осаждение белка солями тяжелых металлов [c.294]

Обычно считают нецелесообразным повторять фракционирование сульфатом аммония в одинаковых условиях несколько раз подряд. Но если варьировать температуру или pH, то порядок, в котором будут осаждаться различные белки, может измениться. В таком случае целесообразно проводить фракционирование последовательно, при разных условиях. Иногда для разделения системы используют различные соли последовательно или в виде смеси. Так, известен метод, в котором обезжиренную муку земляного ореха экстрагировали 10%-ным хлористым натрием при рН = —6,0, а затем из осветленного экстракта белки фракционировали с помощью сульфата аммония. Чтобы выделять отдельные ферменты, солевое разделение можно использовать и само по себе, и в комбинации с иными способами, с воздействиями, основанными на иных принципах. Сочетаются, например, высаливание, адсорбционные способы и электрофорез, спиртовое разделение фракций и затем их солевая очистка, дробное высаливание и электрофорез и т. п. [c.148]

Гликозиды наперстянки содержатся в растениях в небольших количествах, наряду со стероидными сапонинами. После извлечения измельченных высушенных листьев или семян петролейным эфиром (для удаления жиров) гликозиды экстрагируют метиловым или 70%-ным этиловым спиртом и полученную вытяжку концентрируют в вакууме до сиропообразной консистенции. Остаток растворяют в воде, смолистые вещества извлекают эфиром и далее водную вытяжку освобождают от дубильных и слизистых веществ с помощью раствора основного ацетата свинца. Из фильтрата избыток соли свинца удаляют сероводородом или фосфатом натрия. После высаливания гликозидов сульфатом аммония выделяют близкие по составу дигитоксин — С4 Нб401з, гитоксин — С41Н64О14, дигоксин — С41НП4О14 и др. При более нежной обработке выделены истинные или природные гликозиды, названные соответственно дигиланидами (Л, В и С). [c.543]

Элюат (обогащенная фракция). Высаливание сульфатом аммония, фильтрование [c.210]

Работа 41. Высаливание белка сульфатом аммония [c.63]

В случае дауэкса 50-Х4 в МН4-форме уменьшение сорбции еще значительнее и сорбция воды составляет 1,53 г на 1 г сухой смолы из чистой воды и 0,99 г из 3 М раствора сульфата аммония. Эта смола и дауэкс 1-Х4 дают линейную зависимость log С от концентрации соли, и значения константы высаливания k совпадают для обоих видов смол. Однако эти значения k не совпадают с соответствующими значениями для смол с 8% ДВБ. С другой стороны, смолы, содержащие 12 и 16% ДВБ, имеют те же значения к, что и смолы с 8% ДВБ. Эти данные приведены в табл. 33 [10]. [c.242]

Высаливание двойного сульфата ниобия с сульфатом аммония в присутствии тантала и титана. [c.226]

Эфиры легче всего образуются с олефинами, содержащими третичный углеродный атом (гидролиз этих эфиров ведет к образованию третичных спиртов). Так, например, изобутилен растворяется в 63%-ной серной кислоте при комнатной температуре и атмосферном давлении. При этом образуется моноизобутилсерная кислота (но не диизобутилсерная), которая легко гидролизуется в третичный бутиловый снирт. Спирт может быть выделен путем отгонки с водяным паром пли высаливания сульфатом аммония. Образование сложных эфиров серной кислоты протекает наиболее интенсивно с олефинами Сб—Се [23]. [c.225]

Широкое распространение этого метода очистки ограничено малой потребностью в сульфате аммония одностороннего, низкоконцеьт-рированного азотного удобрения, который пользуется небольшим спросом в сельском хозяйстве. Применяют это удобрение, как правило, в районах солончаковых почв. Тем не менее, метод высаливания органических примесей при очистке ОСК применяется в настоящее время в некоторых отраслях химической промышленности. [c.43]

Е. Н. Зильберман и Г. Т. Федосеева [95] исследовали взаимную растворимость в системах вода — адипонитрил — ароматический углеводород, построили кривые распределения адипонит-рпла между водой и углеводородом и нашли, что экстрагирующая способность ароматических углеводородов убывает в ряду бензол, толуол, о-ксилол. Найдено также, что высаливанием сульфатом аммония можно выделить из воды почти весь растворенный в ней адипонитрил. По-видимому, наиболее эффективным методом является экстракция ароматическими углеводородами в присутствии неорганической соли. [c.684]

Хорошие результаты дает использование сульфат-изопропило-вого способа выделения целлюлазы из культуральной жидкости. В качестве оптимальных условии выделения целлюлолитических ферментов можно считать следующие температура 4—15°С, исходный pH культуральной жидкости 7—8, длительность высаливания сульфатом аммония 12—16 ч, концентрация изопропанола 10%. При этом выход фермента по активности достигает 75— 80%, а активность полученного ферментного препарата составляет 1 — 1000 Сз — ИЗО и Сж — 3900 ед./г. Лучшим методом сушки, обеспечивающим максимальную стабильность препарата является лиофильная или вакуумная сушка при относительно низкой температуре. [c.201]

Эффективность добавки различных солей неодинакова. По данным Махата [42], исследовавшего высаливающую способность при 60 °С сульфата аммония, хлорида натрия, карбоната калия, хлорида аммония и цитрата натрия, степень повышения концентрации этилового спирта в равновесном паре колеблется в пределах от 2 до 8 раз и наилучшие результаты достигаются с карбонатом калия. Все же применять высаливание, по мнению Махата [42], следует чрезвычайно осторожно и только при необходимости (когда концентрация спирта менее 100 мг/л). Добавление минеральных веществ может привести к свертыванию крови и непостоянству коэффициента распределения. [c.125]

Разделение смесей галоген1ЗД-нонов на бумаге Шлейхер-Шюлль 2040Ь (ПФ — ацетон—бутанол—вода с отношением компонентов 2 5 3) [6381 и на бумаге Ватман ЗММ (ПФ — Q N (N114)2304) [б42[ оказалось менее эффективным. Однако с повышением концентрации сульфата аммония до 8 7V различия Rf нонов благодаря эффекту высаливания увеличивались, но все же они были меньше, чем в методе [380]. [c.65]

Очистка остатка, исследуемого на алкалоиды, после их изолирования по методу В. Ф. Крамаренко. На основании данных литературы и собственных исследо-ван1п 1 В. Ф. Крамаренко рекомендует для очистки применять высаливание белков и продуктов их распада безводным сульфатом аммония, центрифугирование и экстрагирование этиловым эфиром веществ, сопровождающих алкалоиды. Методика очистки описана на стр. 129. Этим способом очистки устраняются процессы фильтрования, приводящего к потере алкалоидов за счет адсорбции фильтром и образования стойких эмульсий. Потери алкалоидов при этом способе очистки, по данным В. Ф. Крамаренко, не превышают 1—3%. [c.165]

Мы уже видели, что йз мышечной ткани некоторые белки можно извлечь лишь солевыми растворами (Ш. работу 1). Однако чаще с помощью солей о с а ж д а ю т белки из раствора — высаливание. Поскольку разныё белки осаждаются при разной концентрации соли, sTof метод используется для фракцибнирования белков. Для высаливания чаще всего используют сульфат аммония, отличающийся очень высокой растворимостью в воде (75,4 г в 100 мл). Иногда оказывается более удобным Использовать сульфат натрия, хлорид натрия и другие соли. [c.24]

Оксид М. обжигом магнезита при 700°С получают тя желую магнезию для цементов и строительных материалов, при 1500—1800 °С — для огнеупоров прокаливанием карбоната или гидроксидкарбоната М. — легкую магнезию. Карбонат М. осаждают из смеси растворов сульфата М. и карбоната натрия. Хлорид М. добывают из морской воды и рапы некоторых озер из карналлита высаливанием хлороводорода, а сульфат М.— из природных рассолов морского типа и твер дых солевых отложений. Его получают также нагреванием маг незита и доломита в растворе сульфата аммония. Хлорат М образуется при взаимодействии хлората натрия и хлорида М [c.103]

Получение и состав. Активация трижды кристаллизованного а-химотрипси-ногена трипсином, высаливание образовавшегося а-химотрипсина сульфатом аммония и последующая кристаллизация и сушка., [c.428]

Анолит, содержащий в большом количестве персульфат аммония, передается на дальнейшую переработку в солевое отделение. Персульфат аммония выделяют из раствора путем высаливания хорошо растворимым сульфатом аммония, который добавляют в раствор до концентрации 350—420 г/л. Эту операцию производят в описанном выше аппарате-растворителе, где растворяют и исходный сульфат аммония. Для ускорения растворения применяют барботаж воздухом или циркуляцию жидкости насосом. Насыщенный сульфатом аммония анолит центробежным насосом, изготовленным из стали Х18Н10Т, перекачивается в барабанный кристаллизатор непрерывного действия, охлаждаемый рассолом до [c.115]

Далее, на колонке аналогичной смолы, но уже с низкой степенью сшивки, адсорбируют фермент. Для этого лучше всего применять Какен С-1 (SP-3) , но можно и дуолит С-10 или S-30. Ферментный белок затем очищают вытеснительной хроматографией, высаливанием сульфатом аммония и осаждением ацетоном, после чего, в случае надобности, кристаллизуют. Выход фермента по активности 5—15%. Он расщепляет в казеине — 75% пептидных связей, в клейковине пшеницы —80%, а в яичном альбумине— 87%. Большое значение для стабильности протеазы имеет присутствие в растворах иона Са, обычно прибавляемого в виде Са-ацетата. [c.208]