Фракционирование белковых смесей

Высаливание белков концентрированными растворами солей является одним из основных методов фракционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Понижения растворимости белков можно достичь также добавлением спирта и действием низкой температуры. На сочетании действия спирта, солей и охлаждения основаны способы детального фракционирования белковых смесей по Кону например, из сыворотки крови этим путем выделено свыше 12 белков. [c.369]

Высаливание белков концентрированными растворами ЫагЗО или (NH4)2S04 применяется при выделении ферментов из экстрактов тканей и является одним из методов фракционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Растворимость белков уменьшается также при добавлении дегидратирующих веществ (спирта, ацетона). [c.114]

Малоселективными являются классические методы высаливания белков, когда растворимость белка понижается путем добавления соли, чаще всего сульфата аммония, в результате чего начинается выпадение белка из раствора. Так как растворимость различных белков зависит от концентрации соли несколько по-разному, то с помощью сульфата аммония производится частичное фракционирование белковых смесей. Когда-то это был почти единственный известный прием разделения белковых смесей. Он требовал бесчисленного повторения процедуры высаливания белка солями. Первые производства чистых белковых препаратов, например белков кровяной сыворотки или чистых протеолитических ферментов, нашедших значительные применения в медицине, были целиком основаны на высаливании белков солями. Одна пз трудностей этой технологии заключалась в необходимости избавляться от больших количеств прибавленных солей путем диализа. Поэтому в дальнейшем было предложено заменить осаждение белков солями осаждением с помощью органических жидкостей — спирта и ацетона. От последних можно избавиться путем испарения, что [c.132]

Область применения. Фракционирование белковых смесей и очистка выделенных белковых фракций. [c.222]

Высаливание белков концентрирохшнными растворами солей является одним из основных методов фраЕ ционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Понижения растворимости белков можно достичь также добавлением спирта и действием низкой температуры. На тонком сочетании действия спирта, солей и охлаждения до —5° основаны способы детального фракционирования белковых смесей но Кону например, из сыворотки крови этим путем выделено свыше 12 белков. Растворимость белков также сильно зависит от рИ и имеет минимум в изоточке (рис. ИЗ). При смеш,ении от изоточки вырастают заряд и гидратация белковых молекул, что повышает их растворимость. Поэтому ири высаливании белков всегда поддерживают pH близким к изоточке. 1000 Растворимость полимеров и условия их выделения из растворов при добавлении осадителя сильно зависят от их молекулярного веса. [c.259]

В качестве общего метода для фракционирования белковых смесей и для исследования гомогенности белков электрофорез в таких средах, как гранулированный крахмал, целлюлозный порошок [c.251]

Причиной различной способности белков вытеснять подвижные ионы может быть неодинаковое количество и природа заряженных групп в молекулах разных белков, а также влияние общих размеров и конфигурации белковой молекулы на прочность образующихся связей. Таким образом, уже на этой стадии происходит частичное фракционирование белковой смеси. Однако наиболее эффективным этапом разделения является следующая стадия процесса — элюция белков. Элюция достигается обычно введением раствора с высокой концентрацией солей (хлористого натрия, например). Ионы соли вытесняют связанные белки, причем в первую очередь элюируются белки, обладающие меньшим сродством к ионообменнику. В результате начальный эффект разделения белков резко усиливается. Наконец, можно еще больше усилить фракционирование, производя элюцию раствором с постепенно (или ступенчато) нарастающей концентрацией соли (градиентная элюция). Собирая элюат небольшими порциями, можно весьма полно разделить фракции. Для зтого широко применяют автоматические приемники элюата. [c.28]

Для фракционирования белковых смесей, находящихся в растворе, широкое применение получили методы дробного осаждения, основанные на изменении растворимости белков в присутствии растворов солей и органических растворителей. При фракционировании солями чаще всего используют сернокислый аммоний, позволяющий создавать высокую ионную силу раствора при низкой температуре, а из органических растворителей — этиловый спирт и ацетон. На различиях в растворимости белков основано и изоэлектрическое осаждение, достигаемое за счет минимальной растворимости глобулярных белков в изоэлектричес-кой точке. В последние годы для фракционирования белков все чаще находят применение центрифугирование, избирательная адсорбция, различные виды хроматографии и электрофореза. [c.88]

Фракционирование белковых смесей [c.14]

Таким образом, выявляются сразу две существенные особенности ИЭФ, отличающие его от электрофореза белки мигрируют с замедлением, а начальный объем препарата не влияет на конечное положение белковой зоны. Белок может первоначально занимать весь объем проводящей жидкости, например весь объем геля, или его можно внести в любой участок градиента pH, причем в любом объеме. Конечный результат будет одинаковым — все молекулы белка, имеющие одно и то же значение изоэлектрической точки, соберутся в узкую зону в том месте градиента, где рН=р1. Молекулы разных белков фокусируются в различные узкие зоны -— так осуществляется фракционирование белковой смеси по значениям р1 входящих в нее белков. Эти зоны будут оставаться очень узкими неограниченно долго, [c.5]

Фракционирование белковых смесей. Впервые фракционирование растворимых белков было проведено путем высаливания сернокислым аммонием. Белковая фракция, осаждаемая полуна-сыщенным раствором сернокислого аммония, была названа глобулином. Фракция, осаждаемая насыщенным раствором сернокислого аммония, получила название альбумина. [c.10]

Ионообменная хроматох рафия. Белки, как и аминокислоты, можно фракционировать на колонках с ионообменными смолами. Особенно удобны ионообменники с гидрофильными боковыми цепями, например целлюлоза. Для очистки белков обычно используют ДЭАЭ-целлюлозу (анионообменник, образующийся в результате присоединения к целлюлозе диэтиламиноэтиль-ных групп) и КМ-целлюлозу (катионообменник, образующийся в результате присоедииения к целлюлозе карбоксиметильных групп). Фракционирование белковых смесей, нанесенных на колонки, осуществляется пропусканием через колонку буферных растворов с возрастающей ионной силой или ке растворов с возрастающей (или убывающей) величиной pH. Разрешающая способность таких колонок весьма высока. [c.80]

За последнее время разработаны и другие весьма эффеетив-ные методы фракционирования белковых смесей. Из них наиболее широко используется метод фракционирования белков при помощи хроматографии на ионообменных колонках и метод распределительной хроматографии на крахмале, геле, полиакрил-ами и др.. [c.12]

Этот принцип проще всего понять, отталкиваясь от проведенного в предыдущей книге подробного рассмотрения процессов ступенчатого электрофореза [Остерман, 1981]. Вспомним поведение используемых там двух сильно отличающихся по электрофоретической подвижности анионов — хлора и глицина. Хлор в ходе электрофореза отходит к аноду, и вслед за ним из катодного резервуара движется отрицательно заряженный при щелочном pH ион глицина. Значение pH задается Трис-буфе-ром. В любой ситуации, при любом pH ион глицина следует вплотную за ионом хлора. В формирующем геле при pH 6,8, когда электрофоретическая подвижность глицина мала, происходит перераспределение напряженности электрического поля таким образом, чтобы обеспечить миграцию ионов глицина с такой же скоростью, как и ионов хлора. Разрыва между ними быть не может — иначе бы не было тока. Перераспределение напряженности поля вдоль столбика геля при ступенчатом электрофорезе используется длй сужения исходной полосы сме- си белков. Существенно, что концентрация белков при этом настолько мала, что вклад их собственной ионной проводимости незначителен по сравнению с электропроводностью буфера. Белки мигрируют в электрическом поле, не зависящем от их присутствия. Ион глицина обгоняет самый быстрый из белков, и собственно фракционирование белковой смеси происходит в Трис-глициновом бу( ре с pH 8,8 — в поле неизменной напряженности. [c.75]

Еще большая дробность фракционирования белковых смесей вплоть до выделения индивидуальных белков обеспечивается при проведении электрофореза в поддерживающих средах с градиентом pH. Поскольку в этом случае положение белка на том или ином уровне в колонке или тонком слое носителя определяется значением его изоэлектрической точки, метод получил название изоэлектрического фокусирования (синонимы—электрофокусирование, изота-хофорез). Градиент pH создается при посредстве специально синтезированных для этой цели О. Вестербергом полиаминополикарбоновых кислот—амфоли-нов, состав которых выражается следующей формулой [c.29]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология