Моноклональные антитела свойства

В иммуноферментном анализе используются поли- и моноклональные антитела как по отдельности, так и вместе. Относительная легкость получения поликлональных антител из антисывороток иммунизированных животных в ряде случаев дает возможность пренебречь их гетерогенностью. Однако разработка метода получения моноклональных антител — продуктов гибридных клеток — дала им огромные преимущества в иммунохимическом анализе в связи с уникальными свойствами, выгодно отличающими их от антисывороток. Использование моноклональных антител в иммуноферментном анализе дает возможность работать с практически неограниченным источником антител, однородных по молекулярным и иммунологическим свойствам. С их появлением открылись новые возможности для структурного изучения антигенов. Это связано с тем, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами, связываются со специфическим участком на поверхности белковой молекулы — антигенной детерминантой и могут быть использованы в качестве селективных зондов на определенные структурные участки. [c.306]

В разделе изложены методы иммунизации животных и гибридизации клеток для получения поликлональных и моноклональных антител, методы получения препаративных количеств антител и их очистки, способы введения ферментных меток в антитела и антигены для использования в иммуноферментном анализе, способы введения радио-изотопных меток в антитела для радиоиммунного анализа, методы изучения антигенных свойств ферментов [c.307]

В клетке можно пометить любые молекулы для этого е них вводят один или несколько радиоактивных атомов. Нестабильные радиоактивные атомы распадаются, испуская излучение, что позволяет прослеживать судьбу исследуемых молекул. Применение радиоизотопов в клеточной биологии ограничено двумя видами экспериментов анализ метаболических путей по методу вытеснения метки и локализацией меченых молекул в клетке с помощью радиоавтографии. Антитела представляют собой очень удобный и чувствительный инструмент для локализации специфических биологических макромолекул В организме позвоночных животных продуцируются миллионы различных антител, в каждом из которых имеются участки связывания, опознающие специфические группы молекул. Метод гибридом позволяет получать моноклональные антитела с одинаковой специфичностью практически в неограниченных количествах. В принципе можно получать моноклональные антитела против любых макромолекул в клетке и затем использовать эти антитела для локализации или очистки определенных макромолекул, а в некоторых случаях и для анализа внутриклеточных свойств этих молекул. [c.228]

Таблица 7. Сопоставление свойств моноклональных антител и поликлональных антисывороток (М. О Наге, 1984)

Особенностью таких клеток является их способность размножаться и продуцировать антитела в искусственных условиях вне организма. С помощью специальных методой клонирования можно выделить одну гибридную клетку, которая, размножаясь, будет секретировать в неограниченных количествах антитела только одного вида — моноклональные антитела. Подчеркнем, что моноклональные антитела гомогенны как по специфичности, так и по физи-ко-химическим свойствам. Вопросы, связанные с получением поликлональных и моноклональных антител для иммунохимического анализа, подробно рассмотрены в гл. 5, 6. [c.12]

Во-первых, гетерогенностью антител по физико-химическим свойствам, в том числе по сродству к антигену. Во-вторых, сложностью определения общего количества антител, а также отдельных фракций. В-третьих, в случае поливалентных антигенов возможностью образования комплексов сложного состава, в том числе циклической структуры, в которых проявляется кооператив-ность Взаимодействия активных центров антител. Все это не позволяет применить традиционные методы для расчета истинных значений констант связывания. Более надежные данные могут быть получены для моноклональных антител и их РаЬ-фрагментов, так как в этом случае могут быть выделены индивидуальные антитела в гомогенном виде. [c.41]

Специфичность моноклональных антител. Основным свойством, на котором основано применение моноклональных антител в иммуноанализе, является высокая специфичность взаимодействия. Поликлональные антисыворотки часто имеют высокую перекрестную реактивность, что делает затруднительным и даже невозможным [c.170]

Свойства поликлональных антисывороток и моноклональных антител [c.21]

Используя специфические связывающие свойства антител, исследователь может выбирать между двумя различными формами реагента, приготовленного на их основе это обычные поликлональные антисыворотки (или иммуноглобулиновые фракции, полученные из сыворотки) и моноклональные антитела (МКА). Препараты и тех, и других получают различными путями с различной целью выбор между ними осуществляется зачастую не произвольно, а в большой степени зависит от соответствия специфических свойств антител требованиям теста. [c.21]

В разд. 5 мы рекомендовали выбирать метод скрининга, адекватный использованию МКА. Следует иметь в виду, что в неадекватных системах МКА иногда не обнаруживают антигена. Например, моноклональные антитела к растворимым белкам, отобранные методом пассивной гемагглютинации с помощью эритроцитов, нагруженных антигеном, могут распознавать только одну антигенную детерминанту. Такие антитела не обладают преципитирующими свойствами. В таком случае преципитация антигена достигается при использовании комбинации моноклональных антител различной специфичности, которые распознают две различные детерминанты на молекуле белка. [c.149]

Гибридомная технология интенсивно развивается. По-видимому, менее чем через десять лет будет получено около 10 различных типов моноклональных антител различной специфичности, синтезированных гибридомами, полученными при слиянии клеток крыс и мышей. Большинство из этих гибридом будет рассредоточено во всем мире по отдельным лабораториям. Очевидно, в пределах различных центров некоторые виды гибридом будут многократно дублироваться. Это создает проблему иного плана, чем просто явное повторение. Важным свойством моноклональных антител является то, что они могут быть получены в количествах, достаточных для снабжения ими большого числа лабораторий, занимающихся сходными или дополняющими данную тему анализами. Результаты этих исследований можно сопоставить и сравнить. Однако часто различ- [c.150]

Чтобы можно было сделать более определенные выводы, нужны дальнейшие исследования однако нз приведенных примеров видно, какие потенциальные возможности дает определение констант равновесия прн взаимодействии моноклональных антител с мембранными антигенами для оценки адекватности той нлн иной молекулярной модели этого взаимодействия н для уяснения физических свойств н поведения поверхностных антигенов. [c.36]

В сыворотке иммунизированных животных всегда накапливаются продукты, секретируемые многими клонами В-лимфоцитов. Сывороточные антитела при любых схемах иммунизации представляют собой смесь молекул антител, гетерогенных по специфичности, аффинности и классовой принадлежности, вследствие чего имеется неизбежная перекрестная реактивность иммунных сывороток с разными антигенами. Перекрестная реактивность делает трудным или невозможным идентификацию уникальных антигенов. Моноклональные антитела, в отличие от поликлональных, являются продуктами потомков всего лишь одной В-клетки, и поэтому препараты моноклональных антител имеют особые свойства, вытекающие из небывалой степени биохимической гомогенности моноклональные антитела высокоспецифичны. Они направлены против одной и той же антигенной детерминанты моноклональные антитела стабильны как эталоны в отношении специфичности и аффинности (прочности связи с антигеном). Исследователь может целенаправленно подобрать моноклон, вырабатывающий антитела только нужного сорта , т. е. класса, подкласса, специфичности, аффинитета. [c.309]

С развитием гибридомной технологии вновь появилась надежда на то, что антитела можно будет использовать в качестве терапевтических средств для поддержания постоянного уровня чистых моноспецифичных антител в организме. Однако остаются проблемы, связанные с риском развития перекрестных реакций, приводящих к развитию иммунного ответа и анафилаксии ведь в организме больного могут вырабатываться собственные антитела на детерминанты моноклональных антител мыши. Поэтому основная задача в настоящее время состоит в том, чтобы разработать методы получения моноклональных антител человека, обладающих как специфическими иммунотерапевтическими свойствами, так и пониженной иммуногенностью. [c.211]

Общей и наиболее значительной особенностью этого нового класса антибиотиков является их исключительная активность как противоопухолевых агентов. Так, каликеамицин y l (293) примерно в 4000 раз более активен, чем наиболее мощный применяемый в клинике антибиотик адриамицин. Сам 293 из-за своей высокой токсичности не может применяться в медицине, однако конъюгаты его производных с моноклональными антителами, селективными по отношению к опухоли, обнаруживают многообещающие свойства высокую активность против опухолей при низкой токсичности [40b,h] (поясним, что использование подобных антител обеспечивает возможность целевой доставки агента к тканям-мишеням, т. е. в данном случае к опухоли. Само по себе это не влияет на общую токсичность антибиотика, но позволяет резко снизить терапевтическую дозу). Эсперамицин А] (292) обнаруживает мощную активность против ряда модельных опухолей мышей при исключительно низких дозах (примерно 100 нг/кг) и сейчас проходит II фазу клинических испытаний [40b,g]. [c.520]

Радионуклиды для терапии. В последние годы в связи с ростом онкологических заболеваний активно ведутся поиск и исследование PH, которые обладали бы оптимальными для радиотерапии свойствами. Биологическое поведение PH, а именно, особенности распределения и накопления нуклидов в организме, скорость захвата и время жизни в отдельных органах, антигенные проявления, а также характеристики самих опухолевых образований (радиочувствительность размер, влияющий на проницаемость излучения близость расположения к здоровым тканям и органам степень гетерогенности поглощения радиационной дозы в зависимости от региональных изменений потока крови в опухоли) служат основой для выбора терапевтических PH. По мнению медиков радиотерапия имеет меньший риск с точки зрения возникновения вторичных нежелательных явлений, например, лейкемии, по сравнению с химиотерапией и лучевой терапией на пучках частиц. Такое заключение было сделано по результатам многолетних исследований с и Наиболее эффективной считают радиоиммунотерапию (РИТ) с мечеными моноклональными антителами (МКАТ) как дополнение к другим формам воздействия (химиотерапия, хирургическое вмешательство), особенно на начальной стадии появления опухолевых клеток. [c.350]

Астат-211. Альфа-излучатель At (Т[/2 = 7,2 ч ЭЗ 58,3%, а 41,7% основные 7-кванты с = 92,4 кэВ (2,3%) 687,0 кэВ (0,25%) Еа = = 5,866 МэВ), изотоп пятого, самого тяжёлого элемента в группе галогенов, относится к числу немногих нейтронодефицитных изотопов, применяемых в радиотерапии. У астата нет стабильных изотопов, а радиоактивные изотопы имеют короткие периоды полураспада (самый большой Т1/2 = 8,3 ч у At). Поэтому исследование химических свойств этого элемента происходит на уровне ультрамикроколичеств, что требует исключительной аккуратности в создании определённых экспериментальных условий и их стабильности во времени с учётом того факта, что астат имеет несколько устойчивых валентных состояний, как аналог йода. Всё это привело исследователей к открытию целого ряда новых свойств элемента, на основе которых были разработаны методы выделения ультрамикроколичеств At из сложных смесей продуктов ядерных реакций и синтеза ряда неорганических и органических соединений астата [19]. В последнее время было показано, что перспективными для применения в радиотерапии по своим свойствам могут быть такие препараты с At как метиленовый голубой, моноклональные антитела (МКАТ), коллоидный металлический Те (размер зёрен 3-5 мкм) с сорбированным At [19, 20]. [c.356]

Преимуществом At является чёткая схема распада и относительная доступность изотопа. Сходство химических свойств астата и йода зачастую рассматривается в качестве достоинства этого нуклида. Однако стабильность п vivo большинства соединений, меченых астатом, является неудовлетворительной. Энергия связи астат-углерод значительно слабее связи йод-углерод. Если будут найдены способы, с помощью которых можно будет добиться устойчивой связи астата с био-специфическими компонентами (такими как, например, моноклональные антитела), то у него будут замечательные перспективы и можно будет говорить о том, чтобы использовать специализированные циклотроны для получения этого изотопа на рутинной основе. [c.378]

Использование гибридных белков для получения моноклональных антител имеет особое преимущество участки молекулы нативного белка, обладающие сильной или слабой иммуноген-ностью, могут изменить свои иммуногенные свойства при экспрессии в составе большого гибридного белка. Это особенно важно при получении антител к иммунологически неактивным ( молчащим ) участкам молекулы белка. В случае большого Т-антигена вируса SV-40 получено много разных моноклональных антител, узнающих антигенные детерминанты на N- и С-концах нативного белка, но всего несколько видов антител, узнающих структуры, расположенные в центре молекулы. Мы успешно использовали этот подход для получения антител к такому иммунологически неактивному участку большого Т-антигена. [c.173]

Линии клеток, продуцирующих моноклональные антитела, обычно получают от грызунов, например мышей и крыс, дающих хороший иммунный ответ на иммуноген. Готовят суспензию клеток селезенки этих животных и вызывают их слияние с мие-ломными клетками. Полученные в результате слияния клетки обладают свойствами и тех, и других родительских клеток, сочетая в себе способность к неограниченному размножению, свой-ствеипую миеломным родительским клеткам, со способностью продуцировать специфические антитела, присущей В-лимфоци-там селезенки. Выделение клона клеток, продуцирующих одно антитело, позволяет нарабатывать эти моноклональные антитела в больших количествах. [c.180]

Выделение гибридных белков, содержащих -галактозида-зу, было детально описано в предыдущей главе. Для иммунизации мышей требуются относительно небольшие количества антигена, поэтому его можно наработать любым методом. Хотя белковый материал, полученный в результате препаративного ДСН-электрофореза в ПААГ, не всегда обладает такими имму-ногенными свойствами, которые присущи большинству нативных препаратов, он имеет то преимущество, что вызываемый им иммунный ответ обусловлен устойчивыми к денатурации эпитопами. Используемый нами метод выделения нерастворимых гибридных белков приведен в табл. 6.4. Моноклональные антитела к таким эпитопам часто удается с успехом использовать в последующем детальном иммунохимическом анализе белковых антигенов. Наличие абсолютно чистого иммуногена не требует- [c.180]

Принципиально новый шаг в решении этой проблемы был сделан после того, как был предложен способ получения моноклональных антител (Г. Кёлер, К. Мильштейн, 1975) (рис. 17). В ответ на введение антигена в организме мыши активируются продуцирующие антитела В-клетки. Эти клетки могут жить только в организме хозяина и при их переводе в искусственную культуральную среду быстро гибнут. Однако если слить иммунную клетку с опухолевой (миеломные лимфоциты, которые способны неограниченно долго жить в искусственной среде), то в результате образуются гибридные клетки, унаследовавшие свойства своих предшественников, так как они способны долго жить в искусственных условиях и одновременно синтезировать антитела. Такие клетки получили название гибридом . С помощью специальных методов на особых ростовых средах можно отобрать отдельные клетки, синтезирующие только один тип антител. Такие клетки помещают в культуральную жидкость, в которой они размножаются и образуют много родственных ( клон ), синтезирующих большое количество антител, получивших название моноклональных. Моноклональные антитела — это антитела, однородные по своей структуре и специфичности, которые можно производить в неограниченных количествах. [c.105]

СО свойствами гибридомных клеток. Рассмотрим характерные особенности ферментеров и процесса, применяемых для получения и очистки моноклональных антител на фирме ellte h. [c.45]

В зависимости от области применения антител и от их свойств можно использовать самые различные способы очистки. Для диагностических целей часто достаточно имет препараты антител 70-95%-ной степени чистоты. С другой стороны, при применении антител in vivo их чистота должна быть намного выше. В сывороточных средах содержание антител не превышает 10% от общего количества белка. Хотя проведение процесса на бессывороточных средах и облегчает очистку, на практике относительно легко достичь 90%-ной и даже более высокой степени чистоты независимо от содержания сывороточных белков. При очистке антител для их использования ш vivo на последних стадиях очистки приходится решать одни и те же проблемы независимо от природ и питательной среды. Высокоэффективные методы очистки необходимы для удаления следовых количеств не только примесных белков, но и пирогенов и ДНК. Ранее для очистки антител широко применяли фракционирование сульфатом аммония с послед)пющей ионообменной хроматографией. Применение этих методов осложняется тем, что различные моноклональные антитела имеют разные изо-электрические точки [34, 36 J. Кроме того, после ионообменной хроматографии чистота антител не превышает 90%, поэтому для дальнейшей очистки необходимы другие методы, например гель-фильтрация. Однако в тех случаях, когда моноклональные антитела использ)пют для диагностики или иммуноаффинной очистки, ионообменная хроматография или ее сочетание с предварительным осаждением позволяют получить препараты достаточного качества. [c.47]

Использование микрокомпьютерной системы управления позволяет совершенствовать метод аффинной хроматохрафии. Свойства аффинных колонок после каждого цикла меняются, как бы точно ни выполнялись условия очистки. Поэтому система управления, основанная на регистрации времени или объема, не может реагировать на такие изменения. Высокая стоимость аффинных колонок, особенно белка А, а также ценность получаемых моноклональных антител требуют включения в систему управления приборов, реагир)пющйх на любые отклонения и неполадки. Например, применение датчиков на воздух позволяет предотвратить высушивание колонки при прекращении подачи раствора, а использование клапанов давления перед входными фильтрами предотвращает разрушение системы, если колонка забьется. [c.49]

СЛИЯНИЯ гибридом с родительскими миеломами, имеющими особенно благоприятные характеристики. Кроме того, большое поле деятельности открывается в области инженерии моноклональных антител. Эта технология позволит создавать новые типы моноклональных антител с заранее заданными свойствами и получать их в больших количествах. Необходимо также развивать методы скрининга для поиска клонов, секретирующих антитела при культивировании на бессывороточных средах. [c.50]

Поликлональные антитела, применявшиеся ранее в тестах на беременность, неизменно давали перекрестные реакции с LH, имеющимся в моче любой женщины, поэтому с помо1Цью этих тестов можно было надежно определять только высокие концентрации h G. Кроме того, аффинность специфичность поликлональных аятисывороток и содержание специфических антител в них изменялись от партии к партии в широких пределах. Развитие гибридомной технологии получения моноклональных антител [6 ] позволило решить проблемы, связанные со специфичностью и непостоянством свойств антисывороток. На базе моноклональных антител появилась возможность создания высокочувствительных тестов с использованием не только кон урентных, но и прямых сандвич -методов. [c.94]

Меченые антитела с высокой специфической активностью удобно и просто получать с помощью активированного N-гидpo-, ксисукцинимидного эфира акридиния [6]. Это производное быстро реагирует с первичными и вторичными алифатическими аминами в водных средах при pH 8,0, давая устойчивые конъюгаты, которые легко очистить гель-фильтрацией. Полученные таким способом меченые антитела использовались более двух лет без какой-либо заметной потери их свойств. Простота введения метки, а также доступность реагентов (очищенных моноклональных антител) и стабильность конъюгатов помогают успешно преодолеть один из основных недостатков всех методов иммуноанализа - отсутствие надежного метода получения устойчивых меченых реагентов. [c.180]

Принимая во внимание широкое использование гибридомноп технологии, никакой обзор свойств клеточных линий не будет полным, если в нем не будет упомянута эта область исследований. Наиболее надежным критерием идентификации является, естественно, специфичность моноклональных антител, продуцируемых гибридомой. Если этот клеточный продукт отсутствует и его синтез не может быть восстановлен, то линия гибридомных клеток ценности не представляет. Однако потенциальное количество различных гибридом, теоретически равное числу существующих эпитопов, намного превышает число имеющихся различных линий слившихся клеток. Это создает проблему для любого учреждения, создающего банк гибридом, поскольку ни одна индивидуальная организация не в состоянии идентифицировать все моноклональные антитела даже в современной ситуации, когда количество антител относительно невелико. [c.155]

Дальнейшие исследования возможностей использования моноклональных антител неожиданно встретили затруднения, обусловленные распознаванием моноклональными антителами только нативной формы антигена. Например, моноклональные антитела к клеточным антигенам часто не распознают антиген, перенесенный на нитроцеллюлозную мембрану с полиакриламидных гелей после проведения электрофореза растворимых клеточных экстрактов в присутствии ДСН. В данном случае антиген денатурируется и поэтому не связывается с антителами. Подобным образом моноклональные антитела, которые окрашивают клетки в суспензии, могут оказаться непригодными для иммуногистологических исследований парафиновых срезов зафиксированного формалином материала. Эти соображения наводят на мысль, что как выбор метода скрининга, так и природа материала, используемого для иммунизации мышей, являются важными факторами, влияющими на свойства полученных в конечном итоге моноклональных антител. [c.149]

Серологические свойства моноклональных антител не всегда можно предсказать по известным серологическим свойствам адсорбированных поликлональных антисывороток. В случае поликлональных реагентов взаимодействие с антигеном осуществляется благодаря комбинированному эффекту различной специфичности антител, которые 6 совокупности идентифициру- [c.149]

ЮТ определенные типы клеток или белков и не распознают другие образования и структуры. Моноклональные антитела к, корпускулярным антигенам или гликопротеинам могут проявлять неожиданные серологические свойства, а именно окрашивать различные клетки или же связывать большое число разнообразных гликопротеинов. Такие антитела, как правило, распознают специфические углеводные структуры, которые могут входить в состав самых разнообразных белков. Примером служит углеводная структура З-фукозил-М-ацетиллактозамина,. которая может быть обнаружена в кислом гликопротеине а-К лактоферрине, а-амилазе секрета околоушной железы, цервикальном муцине и в секреторном компоненте. Моноклональные антитела различной специфичности могут найти практическое применение во многих областях биологии и медицины. С помощью серологических исследований следует предварительно определить, что определенные моноклональные антитела действительно проявляют специфичность именно в данной тестирующей системе. [c.150]

Таблица 25-2. Свойства моноклональных антител против иммуноглобулинов Xenopus

Справочник химика 21

Химия и химическая технология