Фракционирование спиртом

Фракционирование спиртом. Определяют содержание белка во фракции 3 и разводят ее 0,005 М раствором ацетата магния так, чтобы концентрация белка была равна 15 мг/мл. Доводят pH раствора до 8,6 охлажденным 0,5 н. раствором аммиака После этого раствор белка помещают в баню при —10° С и добавляют небольшими порциями хорошо охлажденный 96%-ный этанол в таком количестве, чтобы конечная концентрация его была равна 34%. Температура раствора белка не должна превышать 0°С. Через 20 мин после добавления последней порции спирта раствор центрифугируют при —15° С 15 мин (15 000 ). Осадок отбрасывают, а в супернатанте увеличивают концентрацию спирта до 64% Снова центрифугируют в тех же условиях, полученный осадок суспендируют в 0,1 М растворе ацетата магния в объеме, равном 1/4 части объема фракции 3, имеющей концентрацию белка около 15 мг/мл. Суспензию центрифугируют 20 мин при 15000 и получают прозрачный темно-желтый раствор фракция 4) [c.235]

Фракционированием спиртом не всегда достигается полное разделение полисахаридов, однако обогащение отдельных фракций полисахаридами одного вида облегчает дальнейшее разделение и очистку полисахаридов другими методами. Простота разделения, незначительные потери полисахаридов делают этот метод весьма ценным для предварительного их разделения. [c.37]

В начале, по-видимому, всегда целесообразно отделить заметную часть балластных белков путем фракционной денатурации прогреванием или осаждением в слабокислой среде. Наоборот, кристаллизацию выгоднее проводить на заключительных этапах очистки. Основными операциями, выполняемыми на средних стадиях, являются фракционирование органическими растворителями, нейтральными солями, адсорбцией или хроматографическим разделением на колонках, в том числе с применением ионообменников. Очень важно, по возможности, чередовать этапы таким образом, чтобы избежать операции диализа. Так, высаливание, удобное в качестве первого этапа, требует диализа, но фракционирование спиртом позволяет его избежать. Простого прибора для быстрого диализа больших объемов жидкостей пока еще не существует можно полагать, что из всех способов очистки диализ — самый медленный и неудобный. Его легче проводить в заключительных стадиях, когда вещества уже мало и объемы невелики. Во время диализа возможны значительные потери активности фермента. С большими объемами жидкостей неудобно работать и в колонках последние лучше использовать [c.155]

Результаты измерений распределения УС1 были вполне воспроизводимы. Сначала фракционирование спирта было менее тщательным, что приводило к непостоянным результатам, по-видимому, вследствие переменного содержания изомеров. Эти предварительные измерения ниже не принимаются во внимание. [c.230]

НОСТИ цветных реакций. Эти попытки, однако, не имели достаточного основания, поскольку окраска, получаемая с белками, как правило, слабее окраски, получаемой с соответствующими белковыми гидролизатами. Это обусловлено, по всей вероятности, тем, что в белковой молекуле некоторые реактивные группы скрыты внутри глобулы и вследствие этого недоступны действию окрашивающего реагента (см. гл. VII). Поэтому для определения аминокислотного состава белка необходимо подвергнуть его полному гидролизу. Большинство аминокислот можно определить в кислотном гидролизате, однако некоторые аминокислоты обнаруживаются только после гидролиза белка гидроокисью бария (см. выше). Разделение смеси аминокислот представляет собой трудную задачу, так как аминокислоты являются амфолитами, растворимыми в воде и нерастворимыми в таких органических растворах, как спирт. Только иминокислоты пролин и оксипролин раство римы в этиловом спирте. Ввиду того что аминокислоты обладают сходными физико-химическими свойствами, их нельзя разделить фракционированием спиртом или нейтральными солями. Некоторые аминокислоты можно, однако, отделить путем осаждения их при соответствующих условиях. Например, растворимость цистина при нейтральной реакции и тирозина при слегка кислой реакции настолько мала, что при доведении реакции среды до соответствующего значения pH они почти полностью выпадают в осадок. Другие аминокислоты можно осадить специфическими реактивами. Однако ни один из этих методов не является полностью удовлетворительным в количественном отношении, так как все соответствующие осадки до известной степени растворимы. [c.31]

Основной примесью фракционированных спиртов С — Сд, Сш—0)6, Св—Сю, Сш—Сго п т. п. являются углеводороды (2—8%), максимальная стенень чистоты сииртов [c.72]

Гамма-глобулин для профилактики кори представляет собой раствор гамма-глобулиновой фракции белка крови человека и содержит антитела, нормально присутствующие в крови взрослых людей. Каждую серию препарата готовят путем фракционирования спирто-водными осади-телями при температурах ниже нуля из смеси сывороток, плазмы или плацент не менее чем от 1000 человек. Растворителем служит изотонический 0,9% раствор хлорида натрия или изотонический раствор с добавлением стабилизатора — глицина до концентрации 0,3—0,5 мол. [c.328]

Из перечисленных гликонротеинов наиболее хорошо можно очистить гликопротеин подчелюстных желез свиньи, применяя общий метод, описанный для ПЖБ-П, с дополнительным осторожным фракционированием спиртом раствора гликопротеина в 50%-ном водном растворе хлористого кальция 133]. [c.148]

Часто дополнительно вводимые группы выбирают так, чтобы изменить реакционную способность гостя . Наличие гидроксильной группы вблизи центра парафиновой цепи, например во вторичных спиртах — деканоле-5, тридеканоле-6 и тетрадеканоле-7 или в ри-цинолевой кислоте, 12-гидрокси-А -октадеценовой кислоте (из касторового масла), не полностью исключает образование комплекса мочевины. Таким образом, дальнейшее фракционирование спиртов или гидроксикислот можно осуществить, уменьшая способность к аддуктообразованию путем ацетилирования гидроксильных групп. Этот процесс позволяет разделять первичные и вторичные спирты путем увеличения длины прямой цепи в первичных спиртах и одновременного увеличения размера боковой группы во вторичных спиртах. Мид 130] применил для этерификации борную кислоту. Эти процессы оказались очень полезными при изучении ланолина и спиртов [84,108]. [c.471]

Белки можно фракционно осаждать, увеличивая концентрацик> неполярных растворителей, таких, как этанол и ацетон. Во время фракционирования необходимо поддерживать температуру, близкую к точке замерзания смеси. При фракционировании спиртом следует применять центрифуги с охлаждением. Поскольку теплота растворения этанола выделяется в основном при разбавлении абсолютного этанола до 90%, для фракционирования целесообразно использовать 90%-ный этанол. [c.14]

При разделении белков иногда применяются центрифуги типа Шарпля. Гравитационное поле в такой центрифуге при максимальных достижимых скоростях является достаточным для успешного отделения более тяжелых частиц вирусов от основной массы примееей [294]. Центрифуги этого типа полезны также для отделения кровяных шариков от плазмы и бактерий от культураль-ной жидкости и для разделения белиов, осаждаемых в большом количестве из плазмы крови человека с помощью фракционирования спиртом ( метод 6 [181]). Такие центрифуги могут быть также успешно использованы в недавно разработанных методах накопления и разделения форменных элементов крови и в новых методах фракционирования [12, 51, 295]. [c.68]

Поведение (-кислого гликопротеипа на ионообменной смоле и отделение его от альбумина и 2-гликопротеина было изучено Шмидом [38]. Из надосадочной жидкости фракции V , полученной фракционированием спиртом при низкой температуре, авторы выделили электрофоретически гомогенный (-кислый гликопротеин с выходом 95%. Исходная смесь белков содержала 35% (-кислого гликопротеипа, 50% альбумина, 12% г-глико-протеипа и 3% -глобулина. Выход (-кислого гликопротеипа был ниже (75%), когда для разделения использовали фракцию VI , но при этом от (-кислого гликопротеина лучше отделялись небольшие примеси, выявлявшиеся при иммунохимическом анализе. [c.71]

Химия. Метод, использованный Сквайром и Ли [5] для очистки ГСИК овцы, состоял из фракционирования спиртом, сульфосалицилатом и сульфатом аммония, хроматографии на колонках со смолой амберлит IRG-50 и зонального электрофореза на крахмале. Было получено доказательство существования двух хроматографически различных фракций, обозначенных а- и fi-ГСИК. Одна из выделенных фракций, Р-ГСИК, была гомогенна по следующим критериям хроматографии на колонках со смолой амберлиг IR -50, зональному электрофорезу на крахмале и скорости седиментации в ультрацентрифуге. [c.236]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология