Расщепление трипсином

Трипсин и химотрипсин обладают наиболее высокой специфичностью по отношению к субстрату, что и используется для определения стерической однородности пептидов. Трипсин расщепляет только пептидные связи, в образовании которых принимают участие карбоксильные группы аргинина и лизина. Гидролиз протекает очень медленно или вообще не идет, если эта аминокислота является N-концевой или второй от N-конца пептида. Не расщепляются пептидные связи, образованные со-за-мещенными аминокислотами, и связи Lys-Pro и Arg-Pro. Неспецифический гидролиз происходит крайне редко (ср. [2678]). Химотрипсин расщепляет главным образом пептидные связи, в образовании которых принимает участие карбоксильная группа остатка ароматической аминокислоты. Иногда имеет место и неспецифический гидролиз, например по амидным связям лей-цил—аминокислота. На гидролиз, катализируемый химотрипсином, природа всей молекулы пептида оказывает большее влияние, чем на расщепление трипсином (ср. [2678]). [c.403]

Трипсин 21 расщепляет пептидные связи, в образовании которых участвуют карбоксильные группы лизина и аргинина. К гидролизу трипсином устойчивы связи лизина и аргинина с пролином (лиз—про и арг—про). Замедление гидролиза этим ферментом наблюдается тогда, когда остатки лизина и аргинина находятся рядом со свободными а-амино- и а-карбоксильными группами, а также в участках полипептидной цепи с повышенным содержанием основных аминокислот (связи ЛИЗ—лиз, арг—арг, лиз—арг и арг—лиз расщепляются только частично). Селективность расщепления трипсином можно повысить путем блокирования e-NH2-rpynn лизина (например, ангидридами янтарной, малеиновой или цитраконовой кислот) или же гуанидиновых группировок аргинина (дикетоновыми реагентами, такими как диацетил, циклогександион, фенилглиоксаль и др.). Гидролизу трипсином могут подвергаться связи, образованные и остатками цистеина, после превращения его в аминоэтилцистеин обработкой белка этиленимином. [c.140]

Каждый протеолитический фермент гидролизует пептидные связи только определенного типа. Например, трипсин катализирует гидролиз пептидных связей, образованных исключительно карбоксильными группами лизина или аргинина. Каждый пептид, полученный в результате расщепления трипсином, за исключением, быть может, исходного СООН-концевого, должен оканчиваться остатком аргинина или лизина. [c.179]

Гистон Н1 существенно отличается от других гистонов. Он не входит в состав минимальных нуклеосом (см. раздел 4 этой главы) и участвует в организации 30-нм фибриллы хроматина. Его молекулярная масса превышает 20 ООО. Положительно заряженные аминокислотные остатки Н1, главным образом лизины, находятся в основном в С-конце молекулы и в меньшей степени в Ы-концевой части. Центральная область N-кoнцeвoй половины молекулы богата гидрофобными остатками и образует глобулу. Н1 обладает выраженной доменной структурой, мягкое расщепление трипсином легко делит его на глобулу и хвост . Помимо лизинов хвост богат остатками пролина и глицина и имеет неупорядоченную конформацию. [c.235]

Расщепление трипсином быстро инактивирует молекулу необычная группировка из четырех остатков основного хар ак-тера —Лиз.Лиз.Арг.Арг.Про—- приводит к появлению боль- [c.193]

Окисленная рибонуклеаза. Действие химотрипсина на рибонуклеазу менее специфично, чем действие на этот субстрат трипсина. Об этом свидетельствуют более низкие выходы полипептидов при разделении гидролизата методом ионообменной хроматографии [154]. В выделенных полипептидах установлено наличие 151 аминокислотного остатка, в то время как в полипептидах, полученных в результате расщепления трипсином, обнаружено всего 124 остатка. По-видимому, это объясняется тем, что некоторые участки полипептидной цепи появляются более чем в одном из пептидных обломков. О более сложном составе гидролизата можно судить по небольшим количествам примесей (как правило, не выше 15%), присутствующих в большинстве основных фракций. Эти примеси не мешали определению аминокислотного состава фракций, но их присутствие еще раз подчеркивает трудности, которые встречаются при фракционировании смесей пептидов, полученных менее специфическими методами гидролиза. Гидролизаты рибонуклеазы были получены инкубированием в течение 24 час с ферментом при pH 7. При более кратковременном инкубировании гидролизат содержал дополнительно [c.204]

При расщеплении трипсином образуются 26 пептидов и 10 свободных аминокислот. [c.447]

В последующих работах выделенные из нормального человеческого глобина и разделенные методом противоточного распределения а- и р- Цепи подвергались расщеплению трипсином, химотрипсином и пепсином. Идентификация полученных пептидов, определение их аминокислотного состава. С- и N-концевых групп полностью подтвердили предложенную ранее структуру а- и р-цепей. [c.129]

Таблица 4.9. Расщепление трипсином гибридного белка -галактозидаза— -эндорфин

Присутствие дискретных полос, различающихся по размеру на несколько сотен аминокислотных остатков, требует некоторых дополнительных объяснений. Если бы процесс по механизму застежки-молнии был абсолютно плавным, а все участки расщепления трипсином одинаково чувствительными, то можно было бы ожидать полной серии полос,. каждая из которых отличалась бы от следующей на величину, отражающую пространственное расположение чувствительных к трипсину связей (остатков лизина и аргинина). Отсутствие такой серии полос свидетельствует о том, что либо 1) сайты расщепления неодинаково чувствительны (обработка трипсином в этих опытах кратковременная), либо 2) процесс происходит не плавно, а останавливается в некоторых характеристических точках, где сборка проходит труднее. [c.494]

Рис. 14-21. Сборка по механизму застежки-молнии молекул коллагена типа III, начинающаяся с С-конца (ответ 14-13). Результаты расщепления трипсином частично собранных молекул показаны справа. Устойчивые к действию трипсина пептиды-это те, что выявляются при электрофорезе.

Соединения (2) иДЗ) удалось различить только с помощью хроматографии на тонком слое окиси алюминия в системе вгор-бутанол/3%-ный аммиак (100 44), а также путем электрофореза на носителе при pH 2,1 или 9,1. Разделение этих соединений в препаративном масштабе было достигнуто хроматографией на нейтральной окиси алюминия в системе метанол/2 н. водный аммиак (I I). Строение октапептида (3) установлено его расщеплением трипсином, в результате которого образовалась смесь гексапептида (4) и дипептида (5), а структура последнего в свою очередь доказана сравнением с синтетическим образцом H-Asp-p-Arg-OH. До сих пор не установлено, в какой степени процесс транспептидации сопровождается рацемизацией. А5р -р-Уа1 -Ангиотензин II оказался на 50% активнее УаР-ан-гиотензина II в тесте на повышение кровяного давления у крыс с удаленными почками (ср. [10876]). Гросс [868] высказал предположение, что повышенная активность и пролонгированное действие А8р -р-Уа1 -ангиотензина II объясняются его большей устойчивостью к инактивации, которая вызывается не только эндопептидазами и карбоксипептидазами, но и аминопептида-зами. Точно таким же образом можно объяснить более высокую [c.65]

Вкратце рассмотрим a +.Mg + ATPaay мембраны саркоплазматического ретикулума, биохимические особенности которой подробно охарактеризованы. Молекула фермента состоит иэ одной полипептидной цепи (AI 100 000), возможно, это протеолипид. Частичное расщепление трипсином показало, что обе функции —гидролиз АТР и транспорт ионов — осуществляются на разных участках одной и той же полипептидной цепи. Фрагмент триптического расщепления с М 30 000 содержит участок, который, как и в Na+,K+-Ha o e, кратковременно фосфорилируется АТР другой фрагмент с М 20 000 может быть встроен в искусственную липидную мембрану с появлением селективной кальциевой проводимости. Возможно, что он представляет собой ионофор [9]. При этом, однако, не выяснен механизм сопряжения энергии гидролиза АТР с ионным транспортом. [c.179]

Модифицирующая группировка удаляется путем обработки 0,5 М гидроксиламииом при pH 7,0. 37 С, что дает возможность проводить последующее расщепление трипсином по освобождающимся остаткам аргинина. [c.44]

Для расщепления полипептидной цепи на отдельные фрагменты можно использовать несколько методов. Один из широко распространенных методов-это частичный ферментативный гидролиз полипептида под воздействием пищеварительного фермента шрнисмка. Каталитическое действие этого фермента отличается высокой специфичностью гидролизу подвергаются только те пептидные связи, в образовании которых участвовала карбоксильная группа остатка лизина или аргинина независимо от длины и аминокислотной последовательности полипептидной цепи (табл. 6-6). Число более мелких пептидов, образующихся под действием трипсина, можно, следовательно, предсказать, исходя из общего числа остатков лизина и аргинина в исходном полипептиде. Полипептид, в котором содержатся пять остатков лизйна и (или) аргинина, при расщеплении трипсином обычно дает шесть более мелких [c.148]

Val -Ангиотензин I был выделен Пиртом [1704, 1705] из продуктов инкубации плазмы быка с ренином кролика. В этом случае в отличие от Пеи -ангиотензина обработка кислотами не дезактивирует ангиотензнназу, поэтому инкубирование пришлось проводить в присутствии малоактивного животного угля, на котором адсорбировался Уа15-ангиотензин I затем последний элюировали уксусной кислотой и очищали. Строение Val -ангиотензина I было установлено Эллиоттом и Пиртом [672, 673] с помощью ферментативного расщепления (трипсином, химо- [c.37]

Структуру физалемина определяли путем расщепления трипсином и химотрипсином, а также частичным кислотным гидро- [c.217]

Для выяснения аминокислотной последовательности полипептидных цепей денатурированный мочевиной глобин подвергали частичному расщеплению трипсином [49]. Полученные таким образом пептиды разделяли ионообменной хроматографией [50, 51]. Было выделено двадцать семь триптических пептидов — тринадцать пз а-депи и четырнадцать из р- цепи. [c.129]

Сайты расщепления НА трех различных подтипов (Н1, НЗ и НЮ) были изучены с использованием расщепления in vivo или расщепления трипсином или другими протезами. После обработки трипсином высокоочищенных вирусов в субъединицах НА1 отсутствует С-терминальный аргинин. Возможно, вирус, а не система хозяина, снабжает экзопептидазой карбоксипептидазы типа В, которая заканчивает это вырезание [41]. На сайте расщепления НА1/НА2 у НА вируса чумы птиц удалена промежуточная последовательность 6 аминокислот (пять основных) [42]. Это коррелировало с патогенными свойствами вируса и его способностью размножаться во многих различных типах клеток-хозяев [16]. [c.117]

В табл. 25 приведены данные, полученные описанным аргининовым минрометодом, по активности пепсина и трипсина по трем различным белковым субстратам — окисленйому лизоциму, гемоглобину я сывороточному альбумину человека. Последние два белка перед опытом денатурировали нагреванием при 95 С в течение 30 тайн. Расщепление белков пепсином проводили при pH 2, а расщепление трипсином — при pH 8,5. [c.213]

С целью расширения области применения фермент.ш разработано несколь-жо приемов. Например, превращение остатков цистенна в S-аминоэтилцистеино-iBbie остатки прн действии этилеиимина делает возможным расщепление трипсином связей этих остатков по карбонильным группам. [c.180]

Аминокислотная последовательность небольших индивидуальных пептидов может быть определена с помощью метода гидролиза ферментами, отщепляющими ЫНг и СООН-концевые остатки, в. сочетании со ступенчатым фенилтиогидантоиновым методом. Для более крупных пептидов может оказаться необходимым дополнительный гидролиз другим протеолитическим ферментом. Так, пептид, полученный при расщеплении трипсином и имеющий структуру A-B- -Tyr-E-F-G-H-Lys (где А, В, С, Е, F, G и Н —алифатические остатки типа глицина, аланина, серина и т. д.), может быть гидролизован химотрипсином по остатку тирозина с образованием пептидов А-В-С-Туг и E-F-G-H-Lys. Поскольку положение этих, двух пептидов относительно друг друга уже установлено (пептид, содержащий остаток тирозина,— NH2-кoнцeвoй, а пептид, содержащий остаток лизина, — СООН-концевой), дальнейшая работа по-установлению последовательности сравнительно проста. [c.182]

Смотреть страницы где упоминается термин Расщепление трипсином: [c.140] [c.295] [c.166] [c.201] [c.327] [c.273] [c.623] [c.410] [c.134] [c.562] [c.320] [c.504] [c.455] [c.185] [c.93] [c.107] [c.109] [c.149] [c.344] [c.284] [c.287] [c.287] [c.39] [c.41]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология