Иммуноглобулины кролика

Иммуноглобулины кролика Белки сои [c.322]

Метод является усложненным вариантом обычного двухцентрового или сэндвич -анализа, в котором образование комплекса детектируется не непосредственно введением в него меченного ферментом антитела, а с помощью содержащих ферментативную метку антивидовых антител. В качестве антивидовых (или вторичных) используют антитела, специфичные к глобулинам тех видов животных или птиц, которых иммунизировали антигеном для получения антисыворотки. Примером наиболее распространенных антивидовых конъюгатов являются меченные ферментом антитела кролика против иммуноглобулинов человека, меченые антитела козы (осла, барана и т. д.) против иммуноглобулинов кролика и т. д. [c.89]

Иммуноглобулины кролика. Для х- и Я,-цепей иммуноглобулинов кролика характерно наличие двух разных групп маркеров Ь и с, которые не имеют между собой антигенного родства. Около 70—90% всех иммуноглобулинов у кролика содержат легкие цепи х-типа в их составе выявлено четыре аллотипических маркера Ь4, Ь5, Ь6, Ь9. Структура двух последних сходна. Фактически [c.83]

Таблица 4. Аллотипы иммуноглобулинов кролика

Для определения относительного количества фермента, связавшегося с ХМТ, конъюгат смешивают с избытком антител кролика против ХМТ. Затем добавляют в избытке антитела козы против иммуноглобулинов кролика. После отмывки от избытка несвязанного конъюгата определяют ферментативную активность в осадке. Она должна составлять около 80% исходной активности фермента. В контроле с нормальной сывороткой кролика вместо антител против ХМТ ферментативная активность в осадке не обнаруживается. [c.259]

ФХ—фитохром no — пероксидаза КАФ — кроличья антисыворотка к фитохрому БАС — баранья антисыворотка к иммуноглобулину кролика КАП — кроличьи антитела к пероксидазе. [c.308]

Подобный размах внутривидовых различий в строении каппа-цепей иммуноглобулинов кролика вызывает удивление. Например, постоянные области каппа-цепей иммуноглобулинов человека и мыши различаются по 40% аминокислотных остатков, а филогенетическое расстояние между этими видами составляет 75 млн лет, в то же время в пределах одного и того же вида каппа-цепи иммуноглобулинов кролика различаются по 35% аминокислотных остатков. [c.45]

Как и при иммуногистологических методах можно обходиться без мечения специфичных к белку антител, обычно вырабатываемых в организме кролика, используя вместо этого имеющиеся в продаже меченые специфические антитела против иммуноглобулинов кролика. Однако это усложняет процедуру исследования. Для описанного варианта метода необходимо, чтобы сорбированные антитела, специфичные к белку, индуцировались У иного животного, чем кролик, — это означает дополнительную выработку антител против белка, например, у козы (этап /). [c.107]

Принцип, положенный в основу методов RIA [91, 117], аналогичен принципу методов ELISA эти методы в основном различаются тем, что для мечения вместо ферментов применяются радиоактивные элементы (главным образом йод) [49]. Широко используемый вариант этого метода не предусматривает иммобилизацию одного из реагентов реакция проходит в растворимой фазе, поэтому очень важным дополнительным этапом является отделение меченых реагентов, участвующих в иммунокомплексах, от тех, которые не участвуют. Если антиген представляет собой белок, обычно проводят разделение иммунокомплекса, осаждая его антителами к иммуноглобулинам кролика (если специфические антитела к белку индуцированы у кролика) [49]. [c.108]

Желательно провести предварительную адсорбцию антител второго порядка экстрактом лизированных клеток Е. соН (табл. 6.2). Антитела второго порядка должны обладать специфичностью по отношению к животному, из крови которого выделяли антитела первого порядка, использовавшиеся при скрининге, например антимышиные иммуноглобулины кролика, конъюгированные с пероксидазой хрена (DAKO), козьи антитела к иммуноглобулинам кролика и т. д. [c.174]

Радиоиммунологический метод. Постановку РИМ осуществляют следующим способом. На предварительном этапе готовят препарат иммуноглобулина кролика против иммуноглобулинов мыщи и метят его радиоактивным иодом. Приготовление меченых вторичных антител проводят следующим образом. [c.115]

Сведения об аллотипических маркерах иммуноглобулинов кролика и их локализации (табл. 4) служат независимым подтверждением полигенного контроля за их синтезом (см. гл. 5). Ведь только для С -района существуют две независимые группы маркеров, ассоциированных с участками молекулы, значительно отличающимися и по первичной, и по пространственной структуре. Антигенная специфичность маркеров группы с1 определяется как аминокислотными заменами в позиции 225, так и расположенной в районе талии дисульфидной связью [c.84]

Овцы, как н кролики, дают хорошие титры антител к Ig человека всех классов. От овец получены преципитирующие антисыворотки, специфичные к подклассам IgG человека, что, по-видимому, свидетельствует о способности этих животных распознавать тонкие структурные различия иммуноглобулинов других млекопитающих. Обычно от овцы и кролика получают одинаково хорошую антисыворотку к изотипам иммуноглобулинов крыс и мышей, а кроме того, как от филогенетически отдаленных видов, и к иммуноглобулинам друг друга. Например, в методах с использованием первых антител кроличьего происхождения вторыми антителами могут быть иммуноглобулины овцы к иммуноглобулину кролика, и наоборот. Очищенные с помощью аффинной хроматографии кроличьи и овечьи антитела стабильны при хранении. В дополнение ко всему вышесказанному Fab- и Р( аЬ)2-фрагменты могут быть получены из овечьих и кроличьих антител по хорошо описанной и легко воспроизводимой методике [И], [c.42]

Аллотипы иммуноглобулинов кролика кодируются несколькими генетическими локусами. У аутбредных животных любой донор и реципиент будут иметь различия. При использовании одной линии (донор и реципиент принадлежат к. одной и той же линии) требуется высокая степень инбредно-стИ, ПО крайней мере по локусам а и Ь. Легко получить анти-идйотипичес кие антитела, направленные к идиотопам-анти- [c.86]

Иммуноглобулин кролика в концентрации от 1,0 до 20 мг/мл в 0,55 М трис-буфере восстанавливали и алкилировали, как описано Флейшманом и др. (Fleis hman et al., 1967). Затем иммуноглобулин диализовали против 1 М пропионовой кислоты в течение ночи при 4 °С. Для удаления преципитированного белкового материала, который может присутствовать в небольших количествах, раствор центрифугировали при высокой скорости или фильтровали. Обычно удовлетворительные результаты получали при центрифугировании в маленькой высокоскоростной центрифуге при 10 ООО g в течение 4—5 мин. Мы предпочитаем фильтрацию через фильтр (размер пор 0,45 мкм), устойчивый к соответствующему растворителю. Такие фильтры выпускаются многими фирмами. После этой стадии образец хроматографируют на тандемно соединенных колонках TSK-G 2000 SW и TSK-G 3000 SW, уравновешенных охлажденной во льду 1 М пропионовой кислотой. Обе колонки имеют размеры 75X600 мм на них можно наносить образец в объеме до 0 6 мл. Количество наносимого суммарного белка не должно превышать 1,3 мг, чтобы в каждом пике было не более 1 мг. Номинальная максимальная нагрузка белка на колонку TSK длиной 600 мм составляет 10 мг, но если при этом на пик приходится более [c.142]

После восстановления и алкилирования препараты иммуноглобулинов мыши диализовали против 1 М пропионовой кислоты и 4,5 гуанидинхлорида (S hwarz Mann). Элюцию проводили тем же буфером, охлажденным во льду. Все остальные процедуры проводили так же, как в случае иммуноглобулинов кролика. [c.143]

При одинаковой специфичности и степени флуорохромирования реагенты, приготовленные из кроличьих и козьих антисывороток, могут сильно различаться по окрашивающим свойствам. Дело в том, что иммуноглобулины кролика теряют свою активность при молярном соотношении больше 2 или 3, в то время как бараньи или козьи антитела сохраняют способность к окрашиванию даже после интенсивного флуорохромирования (до 5—7 молекул флуоресцеина иа молекулу IgG). [c.172]

Т+-бласты мы выявляли путем трехэтапной обработки — сначала кроличьим Ig против мышиных Т-клеток (Sauser et al., 1973) (предоставлен д-ром С. Броном, Институт биохимии Лозаннского университета, Швейцария), затем бараньей антисывороткой к кроличьему Ig, меченной ТРИТЦ, и наконец, бараньей антисывороткой к мышиному Ig, меченной ФИТЦ. Такая,комбинация реагентов была выбрана потому, что перекрестные реакции между иммуноглобулинами кролика и барана выражены незначительно. [c.307]

Методика иммуноферментного анализа. Смешивают в стеклянных пробирках (16X100 мм) по 20 мкл стандартных растворов или образцов плазмы с 30 мкл буфера А. Осторожно перемешав, прогревают растворы в кипящей водяной бане 10 мин. После охлаждения добавляют 0,4 мл буфера Б и 0,1 мл раствора конъюгата. Растворы перемешивают и добавляют 0,1 мл антисыворотки против кортизола в разведении 1 500 (конечное разведение 1 3000) и инкубируют при комнатной температуре в течение 60 мин. После добавления 100 мкл нормальной сыворотки кролика, разведенной в 40 раз, приливают 100 мкл раствора козьих антител против иммуноглобулинов кролика. Смесь перемешивают на вортексе, инкубируют 2 ч при 4°С, затем центрифугируют 10 мин при 2000 g. Осадок дважды промывают буфером Б, Активность фермента в осадке определяют с использованием в качестве субстрата о-нитрофенил-p-D-галактоз и да. Время инкубации при измерении ферментативной активности 1 ч. Количество образовавшегося к концу реакции о-нитрофенола определяют спектрофотометрически при 420 нм. [c.268]

Ферритин выделяли по модифицированной методике Гранина (Grani k, 1942) и подвергали дополнительной очистке на сефарозе 6В. Каждому кролику вводили по 100 мкг очищенного ферритина, смешанного с равным объемом адъюванта Фрейнда. Через И нед проводили повторную иммунизацию такой же дозой антигена. Спустя еще 8 нед от 5 кроликов брали кровь, из которой получали антисыворотку, используемую для покрытия фильтров антителами. Антитела козы против иммуноглобулинов кролика приобретали у Antibodies, [c.303]

Ослиная антись ворот ка против иммуноглобулинов кролика, % [c.303]

ГО комплекса [первичные антитела — вторые антитела]. Пример подбора оптимальной концентрации антител для покрытия фильтров и последующего определения ферритина показан на рис. 20-4. Растворы с тремя различными концентрациями первичных кроличьих антител к ферритину смешивали с различными разведениями препарата козьей антисыворотки, специфичной к иммуноглобулинам кролика, в указанных соотношениях. Образование иммунокомплекса протекало в течение 24 ч. После отделения нерастворимых компонентов смеси фильтрованием через мембранный фильтрат, содержащий растворимый комплекс, наносили на фильтры и высушивали. Готовые фильтры хранили в сухом виде при 2—S . В этих условиях они были устойчивы по крайей мере в течение года. Аналогичный процесс оптимизации осуществляли с антителами к дигоксину и тироксину. [c.304]

Инкубируют с биотинилированными антителами козы против иммуноглобулинов кролика в разведении 1 200 в течение 30 мин. [c.419]

Ферментную фракцию с добавленной в нее антисывороткой кролика инкубировали 3—5 ч на холоду. За это время реакция образования первичных иммунных комплексов проходила до конца. Преципитата, как уже упоминалось, не образуется из-за ничтожности концентрации антигена (ПНФ) и неэквивалентности концентраций антигена и первичных антител. Затем к смеси добавляли 3,5 мкл продажного препарата антисыворотки козы против иммуноглобулинов кролика и инкубировали еще 3—5 ч на холоду. Теперь уже формировалась сетка иммунопреципитата, где в качестве антигенов выступали иммуноглобулины кролика, связанные или не связанные в иммунные комплексы с ПНФ. [c.271]

Рис. 20.2. А. Вирусные антигены в клетках СУ-1 через 48 ч после заражения реови усом типа 3. Клетки окрашивали кроличьей сывороткой против реовя-руса, а затем козьими антителами к иммуноглобулинам кролика, конъюгированными с флуоресцеином. Цитоплазматические включения имеют вид мшго-численных округлых белых пятен. Размер включений тем больше, чем ближе они расположены к ядру. Масшта б — 20 мкм. Б. Электронная микрофотография области клетки СУ-1, зараженной реовирусом типа 3, которая содержит вирусные включения. Увеличение 5250. (Из работы [257] с разрешения авторов.)

В том же 1956 г. были обнаружены и внутривидовые различия в антигенных свойствах иммуноглобулинов кролика (Oudin, 1956). В этом случае аллотипы были обнаружены не с помощью аутоантител (агглютинаторов), а с помощью перекрестной внутривидовой иммунизации. Для этого иммуноглобулины, выделенные из сыворотки одного кролика, вводили другому кролику и, если между иммуноглобулинами этих двух животных существовали антигенные различия, то у кролика-реципиента вырабатывались антитела, специфически реагирующие с иммуноглобулинами кролика-донора. С помощью перекрестной внутривидовой иммунизации были обнаружены также и аллотипы иммуноглобулинов мыши и крысы, но здесь задача облегчалась наличием большого числа ин-бредных линий животных (Herzenberg, 1964 Рохлин и др., 1970). [c.42]

Аллельные варианты легких цепей иммуноглобулинов кролика известны как для каппа-, так и для ламбда-цепей. Для каппа-цепей известны четыре аллельных варианта. Локус, контролирующий образование каппа-цепей, обозначается буквой Ь , а аллельные варианты Ь4, Ь5, Ь6 и Ь9. Локус ламбда-цепей обозначают буквой с , и для с-ло-куса известны два аллельных варианта с7 и с21 (Gilman-Sa hs е. а., 1969). [c.45]

Гибридологическни анализ показал, что гены каппа- и ламбда-цепеи иммуноглобулинов кролика распределяются в потомстве независимо один от другого, и, следовательно, Ь- и с-локусы расположены на различных хромосомах. [c.45]

В отличие от аллельных вариантов каппа-цепей иммуноглобулинов человека различия между аллельными вариантами каппа-цепей иммуноглобулинов кролика обусловлены множественными аминокислотными заменами. Так, постоянная область варианта Ь9 отличается от таковой варианта Ь4 по 33 остаткам из 103 и, кроме того, в постоянной области цепей Ь9 имеются три делении в положениях 109, 141 и 189. Из 33 аминокислотных различий девять обусловлены заменой двух оснований в кодоне (Farnsworth е. а., 1976). [c.45]

Таким образом, структурные н генетические исследования постоянной области легких полипептидных цепей иммуноглобулинов человека, кролика и крысы показали следующее 1) существуют наследственные внутривидовые различия в строении постоянных областей легких полигептидных цепей, и образование постоянной области контролируется соответствующими генами 2) в случае легких цепей иммуноглобулинов человека различия между аллельными вариантами определяются заменой одного аминокислотного остатка, тогда как между аллельными вариантами легких цепей иммуноглобулинов кролика и крысы наблюдаются множественные аминокислотные замены 3) образование постоянной области легких цепей каппа- и ламбда-типа контролируется разными несцепленными генами. [c.46]

Различия между вариабельными подгруппами легких цепей иммуноглобулинов кролика можно выявить уже по первому ЫНг-концевому остатку (Hood е. а., 1970). Если одну из трех обнаруженных вариабельных подгрупп взять в качестве нормы (УьП-подгруппу), то легкие цепи Vxl-подгруппы будут иметь добавочный ЫНз-концевой остаток, а легкие цепи VxII 1-подгруппы будут иметь ЫНг-концевую делецию. Эта закономерность была выявлена при изучении структуры легких цепей гомогенных антител. Но при изучении пула нормальных легких цепей были обнаружены последовательности аминокислотных остатков, характерные для каждой из подгрупп. Важно отметить, что эти вариабельные подгруппы обнаружены у всех изученных особей, и, следовательно, их образование контролируется неаллельными генами. [c.47]

Соответствующий локус был обозначен бу квои п, а аллельные варианты п81 и п82. Гибридологический анализ показал, что п-локус сцеплен с локусами гамма- и альфа-цепей иммуноглобулинов кролика. [c.53]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология