Фракционирование аминокислот и их производных

ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ АМИНОКИСЛОТ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ [c.482]

Синге [13] и Сэнджер и Туппи [14] использовали ячейку, состоящую из 4 камер, для разделения групп аминокислот, производных аминокислот и небольших пептидов в соответствии с их зарядом. На фиг. 70 показана ячейка из 4 камер, сконструированная для ионофореза. При проведении опыта катодную камеру а заполняли Ио-ным (вес к объему) водным раствором аммиака раствор, предназначенный для диализа, доводили до pH 6,0 и погружали в камеру б. Третью камеру наполняли 1 %-ным (вес к объему) водным раствором уксусной кислоты, а крайнюю анодную камеру — 0,1 н. раствором Н.,504. Опыт проводили при разности потенциалов 200 в и в камере, куда вносили исследуемый раствор, поддерживали pH 6,0. При фракционировании смеси аланина, орнитина и аспарагиновой кислоты в камере с опытным раствором не находили орнитина и аспарагиновой кислоты, которые перемещались в катодную и соответственно в анодную камеры. [c.217]

Очень чувствительным методом идентификации аминокислот является тонкослойная хроматография их диметиламинонафталин-5-сульфонильных производных (гл. ХП1). Для фракционирования их на силикагеле можно, например, воспользоваться следующими системами растворителей хлороформ — бензиловый спирт — уксусная кислота (100 30 3) бензол — пиридин — уксусная кислота (80 20 2) 2-бутанон — пропионовая кислота — вода (15 5 6). [c.237]

Применяя подходящие растворители и стандартные растворы дансиламинокислот, можно идентифицировать дансильные производные всех аминокислот. Вудс и Ванг [19] сообщили о том, что использование полиамидных слоев, связанных с полиэфирной подложкой, чрезвычайно эффективно при разделении дансиламино-кислот (гл. Х1П). Можно добиться вполне удовлетворительных результатов фракционирования с помощью двумерной хроматографии сначала в смеси вода — 90%-ная муравьиная кислота (200 3), а затем в смеси бензол — ледяная уксусная кислота (9 1). [c.237]

Для четкого разделения сложной смеси олигонуклеотидов большое значение имеет тщательное фракционирование смолы по размерам частиц. Влияние гомогенности ионита (по размеру зерна), хорошо известное в случае анализа смесей аминокислот [38], при хроматографии нуклеиновых производных не всегда учитывается. [c.332]

Полиамиды, в том числе и гидрофильные, в меньшей степени гидрофильны, чем целлюлоза или силикагель. Этим обусловлено их применение для распределительной ТСХ ароматических производных аминокислот — ФТГ-АК и данзил-АК. С водными или полярными элюептами полиамидные пластинки ведут себя подобно обратнофазовым сорбентам — замедление миграции веществ вдоль них обусловлено явлением распределения между фазами. С неполярными растворителями сильнее проявляются сорбционные свойства полиамида особенно хорошо сорбируются вещества с делокализованными л-электронами. Подробнее различные механизмы фракционирования на полиамидных и иных носителях рассмотрены в обзорной статье [Zakaria et al., 1983], хотя приведенные в ней примеры несколько устарели. [c.462]

Метод противоточного распределения, разработанный Крейгом [36], был применен для разделения смесей аминокислот и очистки белков [187]. Так как полярные группы, определяющие растворимость аминокислот, одинаковы для различных аминокислот, коэффициенты распределения аминокислот различаются незначительно, и, следовательно, их разделение становится трудной задачей. При ацетилировании [172] или образовании нипсиль-ных производных (/г-иодфенилсульфонилпроизводные) [94] фракционирование облегчается за счет уменьшения влияния полярных групп. Хроматографические методы значительно более эффективны по разрешающей способности, но они ограничены возможностью выделений сравнительно небольших количеств веществ. Успешное применение метода противоточного распределения зависит в значительной степени от подходящего выбора двухфазной системы растворителей. Кроме того, применение этого метода ограничивается возможностью разделения веществ низкого молекулярного веса 10 ООО), за исключением тех случаев, когда пептиды обладают большой устойчивостью к денатураций. В присутствии большинства двухфазных систем растворителей, как правило, легко происходит денатурация белков. Однако при нахождении благоприятных условий противоточное распределение-имеет преимущество по сравнению с другими методами, так как при этом возможно рассчитать коэффициенты распределения компонентов, которые могут быть установлены с большой точностью. Профиль кривой распределения дает хороший критерий чистоты вещества. [c.397]

В качестве примера можно привести синтез у аминомасляной кислоты, осуществляемый по приведенной ниже схеме. Путем обработки триметиленгликоля хлористым водородом при 160 °С получается смесь, из которой путем фракционирования можно выделить с небольшим выходом триметиленхлоргидрин. Гидроксильную группу в нем заменяют на бром, а затем бром заменяют дианогруппой. Полученный у-хлорбутиронитрил нагревают с порошкообразным фталимидом калия и охлажденную смесь извлекают водой нерастворимое производное фталимида гидролизуют кипячением с концентрированной серной кислотой и затем оставляют раствор на некоторое время для выделения фталевой кислоты. Серную кислоту удаляют путем обработки раствора избытком карбоната бария, который не взаимодействует с биполярной аминокислотой +H3N —(СН2)з—С00- после фильтрации раствор упаривают и аминокислоту осаждают абсолютным спиртом [c.599]

Харада и сотрудники, однако, нашли, что эта методика иногда приводит к фракционированию хиральной аминокислоты и рацемата. Поэтому после гидрогенолиза добавляли 2,4-динитрофтор-бензол для образования 2,4-динитрофенильного (ВНФ) производного аминокислоты, которое выделялось путем хроматографии, предположительно без фракционирования, и затем определялось оптическое вращение. В табл. 7-2 в скобках приведены величины избытка энантиомеров в процентах, полученных по последней методике (цифры в скобках) наряду с величинами, вычисленными на основании данных, полученных после выделения по методике Хиски и Нортропа. [c.362]

К электрофорезу в геле эти методы, разумеется, прямого отношения не имеют, так как являются примерами электрофореза в свободной жидкости. Именно с этого начиналось применение электрофореза для фракционирования биополимеров. Однако за последнее десятилетие, во всяком случае для аналитических целей, электрофорез в свободной жидкости был полностью вытеснен электрофорезом в гелях или на твердых носителях (бумаге, различных производных целлюлозы, полиамидных пленках и т. д.), который широко применялся при фракционировании пептидов, аминокислот и других сравнительно низкомолекулярных биологически важных молекул, в том числе и в высоковольтных вариантах. В свое время, например, очень важную роль сыграл метод фракционирования олигонуклеотидов гидролизата РНК двумерным электрофорезом. В первом направлении разделение вели на полосках ацетатцеллюлозы в пиридин-ацетатном буфере (pH 3,5) с добавлением 7 М мочевины, во втором — на ДЭАЭ-бумаге в 7%-ной НСООН [Brownlee, 1972]. Ввиду малой емкости ацетатцеллюлозы общая загрузка не превышала 0,1 мг гидролизата РНК, поэтому использовали препараты, меченные радиоактивным фосфором. [c.119]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология