Низковольтный электрофорез на бумаге

Разделение анализируемой смеси происходит на определенных сортах хроматографической бумаги, пропитанной буферным раствором, в приборах для электрофореза. Белки разделяют при напряжении до 500 В. Схема одного из вариантов приборов для низковольтного электрофореза представлена на рис. 8. [c.89]

Схема прибора для низковольтного электрофореза на бумаге (объяснения в [c.89]

А. НИЗКОВОЛЬТНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ НА БУМАГЕ (III [c.46]

КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ПРИ НИЗКОВОЛЬТНОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ НА БУМАГЕ [c.60]

НЕКОТОРЫЕ ИСТОЧНИКИ ОШИБОК ПРИ ПРОВЕДЕНИИ НИЗКОВОЛЬТНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА НА БУМАГЕ [c.66]

В простейшем приборе для низковольтного электрофореза белков на бумаге (см. рис. 12.5) оба конца полоски бумаги погружены в электролит, находящийся в электродных камерах. Во время электрофореза электролит движется к центру бумаги за счет капиллярных сил, и влажность, уменьшающаяся в результате испарения, восстанавливается. Электролит, кроме того, движется к катоду вследствие электроосмоса. Если нужно узнать заряд разделяемых веществ, то на старт следует нанести незаряженное соединение, например глюкозу. Ее положение после электрофореза указывает на место фактического старта. Градиент напряжения обычно составляет от 5 до 15 В/см. Для аналитических целей используют более тонкую бумагу, например ватман № 1, а для микропрепаративного разделения более подходит ватман № 3. [c.341]

Применялся низковольтный электрофорез на бумаге для исследования условий сорбции кислотных моноазокрасителей на полиамиде обнаружена связь между электрофоретической подвижностью красителей и их сорбцией на полиамидном волокне [137]. [c.99]

Для электрофореза на бумаге необходимо иметь источник постоянного тока с регулируемым напряжением на 200—600 в и силой тока 50 ма (низковольтный электрофорез для высокомолекулярных веществ) или на 3000—10 ООО в и 500 ма (высоковольтный электрофорез для низкомолекулярных соединений). [c.294]

Проточный электрофорез — это разновидность низковольтного электрофореза на бумаге. Образец, растворенный или суспендированный в буфере, непрерывно наносят в верхней части вертикально расположенного листа бумаги. Образец увлекается вниз буфером, стекающим под действием силы тяжести, одновременно с этим [c.129]

Аппарат для низковольтного электрофореза на бумаге. [c.226]

После окончания электрофореза бумагу высушивают, и веш ества определяют так же, как и при низковольтном электрофорезе. [c.228]

Разделение проводят в камере для низковольтного электрофореза (с. 89). Кюветы заполняют цитратным буфером. Вырезают полосы хроматографической бумаги шириной 4—5 см и наносят на них тканевой экстракт и стандартные растворы нуклеотидов- свидетелей в количестве, соответствующем 0,1—0,15 мкмоль каждого нуклеотида Разделение проводят в течение 4—5 ч при градиенте напряжения 15— 20 В/см и силе тока 0,5 мА на 1 см поперечного сечения бумажной полосы. Местоположение нуклеотидов идентифицируют в ультрахемископе. [c.184]

Рис. 461. Схема низковольтного электрофореза с бумагой, уложенной на шнпы.

В качестве преимуществ метода ХТС по сравнению с хроматографией, на бумаге следует специально отметить следующее а) небольшая диффузия приводит к меньшим пятнам, благодаря чему достигается более высокая чувствительность б) меньшее время разделения в) возможность применять самые агрессивные реагенты для обнаружения разделяемых веществ. Последа нее справедливо также для ионофореза в тонких слоях, а пункт б), уменьшение времени разделения, имеет силу в первую очередь для низковольтного электрофореза. Применение свободных неохлаждаемых стеклянных пластинок в качестве носителей адсорбционного слоя имеет известные недостатки. Вследствие сравнительно большой толщины стеклянных пластинок (3,5 мм) затрудняется эффективное охлаждение, совершенно необходимое-для разделения при высоком напряжении (выше 500 в). При использовании более тонких стеклянных пластинок этот недостаток в некоторой степени устраняется. Из-за опасности повреждения слоя труднее осуществить охлаждение с верхней стороны, которое, в противоположность Пастуска и Тринксу [195], мы считаем необходимым уже при напряжении 400—500 в. [c.430]

Применен низковольтный электрофорез на бумаге для разделения и идентификации кислотных антрахиноновых красителей, которые представляли собой товарные продукты с известной структурой или чистые модельные соединения [138]. На бумагу их наносили в виде 0,5-1% растворов в водном пиридине. Применялся прибор со свободно подвешенной во влажной камере полоской бумаги, сконструированный в чехословацкой Академии наук. При предварительных опытах, проведенных в щелочной и кислотной средах, более подходящей была признана щелочная среда. В водных растворах электролитов образовывались растянутые зоны. Добавление этанола к раствору электролита вызывало [c.99]

Разделенне. После нанесения образца включают источник питания, поддерживая соответствующее напряжение в течение всего процесса разделения. Даже при наличии стабилизированных источников питания необходимо постоянно следить за работой прибора, так как если носитель подготовлен недостаточно тщательно, возможен перегрев, а в случае применения бумаги — даже ее обугливание. Низковольтный электрофорез обычно завершается в течение 1—2 ч, хотя для разделения белков на бумаге требуется немного больше времени. Разделение при высоком напряжении, как прави--ло, заканчивается в течение 1 ч. По окончании электрофореза сна- чала выключают источник питания, а затем извлекают носитель. [c.125]

Электрофорез используется для разделения молекул, несущих суммарный заряд. Низковольтный электрофорез на бумаге нашел широкое применение для разделения аминокислот, пептидов, белков, нуклеотидов, нуклеиновых кислот и заряженных производных углеводов. Однако при низковольтном электрофорезе на бумаге имеет место значительная диффузия малых молекул, поэтому для их разделения применяют, как правило, высоковольтный электрофорез, при котором время разделения сводится до минимума и вследствие этого уменьшается диффузия. Вместо бумаги в качестве носителя зачастую используют ацетат целлюлозы, высокая чистота которого обусловливает уменьшение адсорбции образца, а следовательно, и лучшее разделение его компонентов. Одним из преимуществ ацетата целлюлозы является также его слабое фоновое окрашивание, что облегчает выявление соединений после рааделе-ния. Электрофорез на ацетате целлюлозы нашел широкое применение в клинике для разделения белков сыворотки крови (включая гликопротеиды и липопротеиды) и гемоглобинов он применяется также при иммуноэлектрофорезе. Высоковольтный электрофорез, как бумажный, так и тонкослойный, используется для разделения аминокислот, концентрация которых в плазме крови и моче при различных нарушениях обмена может быть довольно высокой. Особенно велика ценность тонкослойного электрофореза при разделении малых молекул, таких, как аминокислоты и нуклеотиды, поскольку [c.136]

Низковольтный электрофорез малоэффективен для небольших молекул (например, аминокислот и нуклеотидов), поскольку из-за малого заряда они обладают низкой подвижностью и, следовательно, медленно делятся. Из-за малого размера молекул имеет место значительное размывание зон за счет диффузии. В высоковольтном электрофорезе скЬрость разделения увеличивается за счет использования градиента потенциала 200 В/см. Высокое напряжение обусловливает большую силу тока, бумага нагревается, поэтому здесь необходимо охлаждение. Для охлаждения бумагу погружают в большой объем несмешивающейся и не проводящей ток жидкости или прижимают ее к охлаждающей поверхности. Метод погружения (рис. 9-2) используется редко, поскольку применяемые охлаждающие жидкости (например, толуол, четыреххлористый углерод или различные масла) являются токсичными и в ряде случаев огнеопасны. Метод закрытой бумаги, показанный на рис. 9-2, находит более широкое применение. Заметим, что в данном случае бумага не погружается в буфер. [c.227]

Зонный электрофорез на бумаге. Различают бумажный электрофорез низковольтный (при градиенте напряжения 20—30 В/см) и высоковольтный (с градиентом напряжения до 200 В/см). Высоковольтный электрофорез применяют для разделения низкомолекулярных соединений. Приборы оборудуют устройствами для отвода джоулевой теплоты, для чего используют инертные жидкости (тетрахлорид углерода, толуол), в которые помещают пропитанные буферным раствором бумажные полоски (фореграммы). Сама жидкость охлаждается с помощью погруженного в нее холодильника. [c.363]

Разделение электрофорезом. Добици и Грассини [160] разделяли ионы перйодата и иодата на тонких слоях алебастра. Слой алебастра насыщали 0,05 М раствором карбоната аммония, служившим электролитом, и проводили разделение при напряжении 300—400 В в течение 1,5—2 ч. Разделение было гораздо лучшим, чем при электрофорезе на бумаге. Могисси [129] использовал для электрофоретического разделения анионов слои силикагеля или кизельгура. Он применял как низковольтную, так и высоковольтную аппаратуру, но опубликовал только данные, полученные на высоковольтном приборе. Для разделения анионов использовался в качестве электролита 0,1 н. гидроксид натрия, и при продолжительности разделения 2 мин и напряженности поля 45 В/см получились следующие длины путей миграции (в миллиметрах) S N- 35 SeO 30 (образование [c.509]

Более быстрым нечувствительным методом определения кетосахаров является электрофорез на бумаге. Отрицательно заряженные комплексы фруктозы и сахарозы с анионом бората удовлетворительно разделяются на бумаге Ватман № 1 или Фильтрак с помощью низковольтного горизонтального электрофореза при градиенте напряжения около 10 В/1ом и продолжительности 90—120 мин. Для нанесения достаточно 20—50 мкг кетосахаров. Электрофореграммы. проявляют димедоном. К сожалению, электрофорез на бумаге служит скорее качественным, чем количественным, методом. [c.126]

Очень часто зональный электрофорез проводят на бумаге, предварительно пропитанной соответствующим буфером. После окончания разделения в высоко- или низковольтном электрическом поле бумагу высушивают, обнару живают вещество (после окрашивания красителями, по флуоресценции, радиоактивности и т. п.), элюируют и определяют концентрацию на спектрофотометре. [c.112]

На рис. 9-1 показана схема типичного устройства для низковольтного (20 В/см) электрофореза на бумаге. Полоску бумаги сначала погружают в буферный раствор, а затем помещают в камеру, как показано на рисунке. Далее образец наносят либо в виде пятна, либо в виде линии. После окончания разделения бумагу вынимают и высу ливают. Если образец содержит достаточное количество вещества, оно может быть обнаружено по его окраске, по флуоресценции или при окрашивании различными красителями. Если требуется количественное определение, вещество можно элюировать и определить спектрофотометрически. Так как элюирование красителя редко бывает количественным, точность такого определения составляет около 20%, Если образец радиоактивен, пя гна можно локализовать путем разрезания бумаги и определения радиоактивности (гл. 5) или с помощью авторадиографии целого листа с использованием рентгеновской плен- [c.225]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология