Электрофорез бумажный

Хроматография — колоночная, тонкослойная, бумажная. Электрофорез на бумаге. Г ель-фильтрация [c.230]

Предлагаемый метод количественного определения аминокислот после их разделения методом электрофореза основан на их реакции с нингидрином в слабокислой среде. Получаемое в результате этой реакции производное синего цвета затем превращают путем обработки спиртовым раствором сульфата меди в стабильное медное производное оранжево-красного цвета, имеющее максимум поглощения при длине световой волны 530 нм. Это производное хорошо экстрагируется с бумажной полоски этиловым спиртом. [c.148]

При одновременном проведении хроматографирования и электрофореза бумажный лист пропитывают раствором электролита и закрепляют между разноименными электродами. Одновременно с подачей напряжения на электроды от источника постоянного тока обеспечивают движение вдоль бумаги подвижного растворителя. Такой процесс значительно сокращает время разделения, однако выполнение его связано с некоторыми техническими трудностями. Поэтому целесообразнее проводить оба процесса последовательно. [c.119]

Смесь пептидов, образующихся в результате использования различны> методов расщепления, сначала должна быть разделена, и каждый из пептидов очищен. Целевой компонент перед анализом последовательности должен быть гомогенен по данным как минимум четырех различных методов разделения ионообменной хроматографии, электрофореза, бумажной или тонкослойной хроматографии и противоточного распределения. [c.366]

Окрашивание электрофореграммы. После окончания электрофореза бумажную полоску извлекают из прибора и фильтровальной бумагой удаляют избыток влаги с концов полоски. Для окрашивания электрофореграммы погружают на несколько секунд в раствор нингидрина, налитый в кювету надеть резиновые перчатки ). Затем электрофореграмму подвешивают на стеклянной рамке и подсушивают на воздухе в течение нескольких минут, после чего для проявления окраски полосу прогревают в темноте ) в сушильном шкафу или термостате при 60 °С в течение 15 мин. [c.151]

При одновременном проведении хроматографии и электрофореза бумажные листы пропитывают электролитом и закрепляют между разноименными электродами. Анализируемую смесь наносят на бумагу, электроды подключают к источнику постоянного тока и одновременно на бумагу подают подвижный растворитель в направлении, перпендикулярном направлению силовых линий электрического поля (рис. 28). [c.119]

Ввиду того, что различия в растворимостях полипептидов очень невелики, для выделения индивидуальных пептидов и.з смесей требуются специальные методы. К ним относятся фракционный диализ, распределительная хроматография (например, на колонке из бумажного порошка или листе бумаги), адсорбционная хроматография, ионнообменная хроматография, электрофорез и противоточное распределение по Крэйгу (т. е. распределение между двумя ограниченно смешивающимися жидкостями). Для характеристики выделенных пептидов и доказательства их однородности применяют противоточное распределение, количественный анализ аминокислотного состава и определение концевых групп полипептидной цепи. [c.383]

Метод электрофореза на носителе во многом подобен методу хроматографии. Камера для электрофореза состоит из трех частей, двух электродных сосудов и расположенной выше подставки для носителя, например бумаги. Камеры должны быть плотно закрыты для предотвращения испарения растворителя. Носитель укладывают горизонтально, уровень растворителей в обеих электродных камерах должен быть одинаковым. Электроды, платиновый или графитовый, встроены в диафрагму. Вещество наносят на носитель в виде точек или полос. Место нанесения пробы зависит от предполагаемого направления движения. При движении разделяемых, веществ к аноду пробу наносят на катодную сторону, и наоборот. Для количественной и качественной оценки процесса разделения (проявление вещества и т. д.) применяют методы, используемые в бумажной хроматографии. [c.387]

Электрофорез с носителем практикуется чаще. В этом случае ионы мигрируют по бумажному носителю или по гелю, такому, как агар, полимер или силикагель. Носитель насыщен раствором буферного электролита и его концы опущены в буферный раствор с электродами (рис.5.5-1,б). К фильтровальной бумаге, пропитанной раствором электролита, прикладывается постоянное напряжение в несколько киловольт или больше. [c.303]

При одновременном проведении хроматографии и электрофореза [27, 28] бумажные листы пропитывают электролитом и закрепляют между разноименными электродами. Анализируемую смесь наносят на бумагу, электроды подключают к источнику постоянного тока и одновременно на бумагу подают подвижный растворитель в направлении, перпендикулярном направлению силовых линий электрического поля. Однако технические трудности в выполнении этого метода ограничивают его применение. [c.86]

Широкое распространение в настоящее время получил так называемый зональный электрофорез — электрофорез на твердом носителе (на бумажных полосах, агаре, крахмале, акриламиде), пропитанном буферным раствором с нужным значением pH. Положение белков на бумаге или геле определяют путем фиксации и последующего окрашивания их тем или иным красителем (обычно бромфеноловым синим, ами-довым черным или кумасси синим). Количество белка в каждой фракции можно ориентировочно определять по интенсивности окраски связанного красителя. Такое определение не дает строго количественного соотношения белковых фракций, так как количество красителя, связываемого различными белками, неодинаково. [c.89]

Различают свободный электрофорез и электрофорез в поддерживающих средах. При свободном электрофорезе изучаемую смесь белков помещают в буферный раствор, контактирующий с электродами. Установка для свободного электрофореза сложна она имеет фотооптическую систему для регистрации результатов разделения белковой смеси. Второй тип электрофореза предусматривает использование поддерживающих сред (специальной хроматографической бумаги, ацетатной целлюлозы, агарового или крахмального геля и т. п.), которые сначала пропитывают буферными растворами, а затем помещают на них исследуемую белковую смесь. Концы бумажных полос, агаровых или крахмальных блоков и т. п. контактируют обычно с буферным раствором, в который погружены электроды, соединенные с источником постоянного электрического тока (рис. 95 [c.218]

Разновидность метода — бумажный электрофорез, оформление которого значительно проще. В этом методе на полоску однородной непроклеенной бумаги, пропитанной буферным раствором, наносят каплю исследуемого раствора. Концы полоски погружают в сосуды с электродами, заполненные тем же буферным раствором. Под действием поля компоненты движутся с различными скоростями (пропорциональными ) и через некоторое время наступает пространственное их разделение и проявление в виде отдельных пятен после фиксации специальным проявителем. По интенсивности пятен и сдвигу их от начального уровня можно оценить состав и концентрации компонентов в исходном растворе. [c.199]

Метод пептидных карт представляет собой сочетание бумажной и тонкослойной хроматографии с высоковольтным электрофорезом. В качестве носителей используют силикагель или порошок целлюлозы. Вначале проводят хроматографию, для чего пробу наносят в точку вблизи одной стороны бумаги или пластинки, а затем под углом 90° проводят высоковольтный электрофорез. Метод применяют для разделения смеси низкомолекулярных соединений. [c.149]

В настоящее время разработано значительное число методов изучения электрофореза и определения с его помощью электрокинетического потенциала метод непосредственного изучения движения границы между дисперсной системой и свободной дисперсионной средой под действием внешней разности потенциалов (метод подвижной границы), метод микроэлектрофореза — наблюдение с помощью микроскопа или ультрамикроскопа за перемещением отдельных частиц,, электрофорез в гелях, бумажный электрофорез и др. Эти методы,, подробно описанные в практикумах по коллоидной химии широко применяются для изучения электрофореза как дисперсных систем, образованных низкомолекулярными веществами, так и дисперсий ВМС, особенно природного происхождения. Методы электрофореза позволяют анализировать и разделять смеси белков, что эффективно используется в исследовательской работе и лечебно-диагностической практике. [c.194]

Камера для электрофореза состоит из плексигласовой ванны с пригнанной к ней крышкой 0). В ванне имеются 2 электродных отсека (2), каждый из которых разделен продольной перегородкой (5) на два отделения, сообщающиеся между собой. Во внутренние отделения отсеков опускают электроды, а во внешние — концы бумажных полос (4), основную часть которых располагают на горизонтальной пластинке с шипами (5), находящейся в центральной части камеры. Между горизонтальной пластинкой и наружным отделением электродных отсеков имеются палочки (6), через которые перекидываются бумажные полоски и которые служат для их поддерживания. Под верхней крышкой камеры находится сделанная из плексигласа пластинка с большими круглыми отверстиями (7), на которую сверху кладутся смоченные в ди- [c.89]

Для приготовления агаровых пластинок используют предметные стекла. Предварительно их обезжиривают, тщательно промывают водой и высушивают. Стекла нумеруют, укладывают на строго горизонтальную поверхность и на каждое осторожно наливают пипеткой с широким концом 4 мл агара. Пузырьки воздуха в агаре необходимо вывести пипеткой на края стекла. Когда агар застынет и образуется твердый гель, в нем посередине вырезают лунку (щель) для нанесения исследуемого раствора. Приготовленные пластинки укладывают в электрофоретическую камеру. Агаровое плато соединяют с буферным раствором бумажными мостиками из фильтровальной бумаги. В щель каждой пластинки вводят сыворотку крови, предварительно разведенную буферным раствором. На электрофореграмму наносят около 100—300 мкг белка в объеме 0,01 мл. Прибор подключают к источнику тока. Медленно повышая напряжение, доводят силу тока до 20—25 мА (напряжение 200—300 В). Электрофорез проводят в течение 3—4 ч. [c.93]

Быстрому развитию науки в этой области способствовало широкое применение новейших методов анализа и разделения смеси веществ, основанных на использовании бумажной, колоночной и газожидкостной хроматографии, фракционного осаждения, инфракрасной спектроскопии, электрофореза, ионообменной хроматографии, гельфильтрации и др. Большое значение в этой области также имел накопленный опыт по синтезу специальных свидетелей для количественной хроматографии, особенно частично метилированных сахаров с известным расположением метоксильных групп. [c.6]

Весьма ценной разновидностью обычной тонкослойной или бумажной хроматографии является диагональная хроматография. Сначала нанесенный материал хроматографируют в одном направлении, затем в тонком слое на пластинке или бумаге проводят определенную химическую реакцию, после чего осуществляют разделение в другом направлении. Немодифицированные соединения располагаются по диагонали пластинки, тогда как продукты реакции оказываются смещенными по отношению к ней. Этим методом исследовали фотохимические [149] и другие [147] реакции флавинов. Аналогичный диагональный электрофорез применялся для идентификации пар —8Н-групп, образующих в белках дисульфидные мостики [150]. Пептидные фрагменты, содержащие 8—8-мостики, разделяли с помощью электрофореза на бумаге, затем обрабатывали бумагу парами надмуравьиной кислоты, разрывающей мостики [уравнение (2-20)], и после электрофореза в перпендикулярном направлении опрыскивали бумагу нингидрином. Пятна, расположенные вне диагонали, соответствовали фрагментам, которые участвовали в образовании 8—8-мостиков. По положению пятен подбирали [c.180]

Получение нитрила фенилуксусной-1-С кислоты и фенетил-амина-а-С этим методом при проведении реакции с количествами веществ порядка нескольких миллимолей описано Блоком [4]. Приведена схема прибора для микроперегонки и показано с помощью бумажной хроматографии и электрофореза на бумаге, что конечный продукт реакции (выход 15,4%) однороден. [c.597]

Радиохимическая чистота может быть исследована различными методами, но наиболее важными из них являются бумажная хроматография и тонкослойная хроматография (см. с. 92—97). После завершения разделения на хроматограмме определяют распределение радиоактивности. Количество вещества, наносимого на хроматограмму, часто крайне мало (вследствие высокой чувствительности обнаружения радиоактивности), и поэтому надо быть особенно осторожным в интерпретации результатов в связи с возможностью возникновения артефактов. Кроме хроматографии, для разделения может быть использован электрофорез (см. с. 114—118). Как упоминалось выше, иногда может оказаться полезным добавление к самому радиофармацевтическому соединению или к ожидаемым примесям носителей, т. е. соответствующих нерадиоактивных соединений. Существует, однако, опасность, что прибавленный неактивный носитель радиоактивного фармацевтического вещества может взаимодействовать с радиохимической примесью, что в свою очередь может привести к заниженной оценке этих примесей. Другой подходящий метод— наблюдение за биологическим распределением инъецированного радиофармацевтического вещества в испытании на животных. [c.83]

Распределительная хроматография. Более разработаны и практически оправданы методы тонкослойной хроматографии (ТСХ), позволяющие разделять сложные смеси серусодержащих ионов. Методы бумажной хроматографии и электрофореза на бумаге по сравнению с другими хроматографическими методами не получили широкого распространения. [c.58]

Контроль чистоты. Чистоту реагента устанавливают методами круговой бумажной хроматографии и электрофореза, как описано для арсеназо 1П (см. стр. 55). [c.39]

После электрофореза бумажные полоски высуц]ивают в течение 15 мин при 80°, погружают в нингидрин-кадмиевый реактив (Хайл-ман и др. [13]), высушивают на воздухе и оставляют на 18—20 час в сухой, свободной от аммиака атмосфере. Окрашенные в красный цвет пятна элюируют метиловым спиртом, не содержащим серы, и измеряют поглощение света при 500 ммк (325 ммк для пролина). Реактив Хайлмана приготовляют смешиванием (в указанной после- [c.51]

После электрофореза бумажная полоса высушивалась и разрезалась вдоль пополам. Одна половина секционировалась на сегменты в 2,5 см, которые элюировались водой и использовались для биологических испытаний. Вторая—обрабатывалась смесью ia—KJ—толидин, потому что содержащая токсин часть соответствовала области, дающей положительную реакцию именно с этим реагентом. [c.160]

Прибор для электрофореза (рис. 25.1) имеет камеру 1, изготовленную из стекла, герметично закрывающуюся крышкой 2. В камере расположены две электродные кюветы 4, разделенные внутри продольной перегородкой на два отделения. В наружных отделениях кювет находятся электроды 3. во внутренние опускают концы бумажных полос 5 (фореграмм). Оба отделения заполняют раствором электролита и для обеспечения электрической связи соединяют фитилями из фильтровальной бумаги. Влажные полоски хроматографической бумаги (фореграммы) во время опыта помещают на твердую опору 6 (перфорированную пластину или поперечные пластины). [c.231]

Зонный электрофорез на бумаге. Различают бумажный электрофорез низковольтный (при градиенте напряжения 20—30 В/см) и высоковольтный (с градиентом напряжения до 200 В/см). Высоковольтный электрофорез применяют для разделения низкомолекулярных соединений. Приборы оборудуют устройствами для отвода джоулевой теплоты, для чего используют инертные жидкости (тетрахлорид углерода, толуол), в которые помещают пропитанные буферным раствором бумажные полоски (фореграммы). Сама жидкость охлаждается с помощью погруженного в нее холодильника. [c.363]

Важнейшей областью применения электрофореза является анализ биоколлоидов, например анализ смесей белков в клиническом анализе. Белки, как амфотерные полиэлектролиты, обладают собственными зарядами, зависящим от pH среды. Регулируя значение pH, можно в широких пределах менять их подвижность и даже изменить направление движения в процессе электрофореза. Для каждого белка при определенном значении pH общее число положительных зарядов равно общему числу отрицательных зарядов. Эта иэоэлектрическая точка, при которой отсутствует движение частиц, является характерной величиной для определенного белка. Растворимость белка в этой точке минимальна. Подбирая соответствующие буферные растворы для установления определенной скорости движения и растворимости веществ, можно приспособить процессы электрофореза для решения разных проблем разделения веществ. Таким образом, электрофорез превосходит метод бумажной хроматографии. Кроме того, при помощи электрофореза, особенно при высоком напряжении, можно проводить разделение неионогенных веществ (например, сахар в виде боратного комплекса) [791. Методом электрофореза можно также определять изоэлектрические точки амфотерных веществ или заряды коллоидных частиц (по направлению движения). [c.387]

В камеру (прибор для горизонтального электрофореза типа 0Е-2а) помещают 10 бумажных полос размером 4X44 см, концы которых погружают в сосуды с раствором электролита. На бумажных полосках на расстоянии [c.127]

После окончания электрофореза полосы вынимают, натягивают на стеклянные рамки и помещают в сушильный шкаф на 15 мин при 105° С. Хроматограммы проявляют снне-черным красителем (0,2 г красителя растворяют в 100 мл концентрированной уксусной кислоты и 900 мл воды). Краситель сорбируется белками и дает соответствующую окраску. Время обработки хроматограммы 20 мин. Бумажные полосы погружают в раствор красителя, вынимают их и отмывают от избытка красителя раствором специального состава, повторяя промывание несколько раз. Раствор для промывания состоит из Ъ мл концентрированного раствора уксусной кислоты, 30 мл фенола и 1000 мл воды. Хроматограмму подсушивают на воздухе. [c.128]

Бацитрацин А, выделенный из В. subtilis, был охарактеризован Крейгом (1955) как сшитый циклопептид, состоящий из 12 аминокислотных остатков, идентифицированных после частичного гидролиза пептида и его динитрофенильного производного комбинацией противо-точного распределения, бумажной хроматографии, зонного электрофореза н полного химического анализа [c.703]

Подготовка камеры. Отсеки для электродов наполняют буферным раствором до одинакового уровня (во избежание перетекания буфера), примерно по 800 мл в каждый отсек. Во внутренние части электродных отсеков погружают электроды. На листе хроматографической бумаги (18X45 см) (при использовании тонких сортов бумаги образцы лучше наносить на отдельные полоски шириной 4—5 см) на расстоянии 15 см от одного из его узких сторон простым мягким карандашом (графит препятствует растеканию жидкости) очерчивают места для нанесения проб. Они представляют собой прямоугольники (2X0,3 см), большие < тороны которых располагают перпендикулярно длине бумажной полосы. Расстояние между стартовыми зонами и краями электрофореграм-мы — 2 см. Электрофореграмму пропитывают буфером, в котором будет проходить электрофорез. Для этого ее протягивают через кювету с буферным раствором. Концы бумажных полос (6—8 см) не смачивают. От избытка буфера освобождаются, промокая полосы между дву-мя-тремя лисгами фильтровальной бумаги. Влажную электрофореграмму помещают в камеру на центральную горизонтальную пластинку (5), а концы опускают в наружные отделения электродных отсеков Прибор плотно закрывают крышкой, под которой находятся смоченные водой листы фильтровальной бумаги. [c.91]

Проведение электрофореза. После того, как бумажные полосы полностью пропитаются буферным раствором, на отмечепнь е участки с помощью пипетки объемом 0,1 мл наносят пробы 0,01—0,02мл (1—2 мг белка) сыворотки. Камеру закрывают крышей и включают ток. Длительность электрофореза составляет 22—24 ч при напряжении 200— 300 В [c.91]

Образцы наносят на бумагу капилляром или микропипеткой, все время подсушивая зону нанесения. После нанесения образцов бумагу, начиная с краев, увлажняют буферным раствором. При этом следят за тем, чтобы бумага увлажнялась равномерно, а фронты буферного раствора, пропитывающего бумагу слева и справа от линии старта, сошлись бы точно на линии старта. Избыток буфера удаляют фильтровальной бумагой. Избыточное увлажнение бумаги ухудшает разделение Бумагу помещают в специальный полиэтиленовый пакет и кладут на охлажденную плиту прибора для электрофореза. Контакты электрофореграммы с электродными отсеками обеспечиваются с помощью бумажных фитилей, смоченных в буферном растворе. Сверху на электрофореграмму нai/лaдывaют подушку из поролона, которая специальной крышкой прижимает бумагу к охлаждающей плите и обеспечивает эффективное отведение тепла, выделяющегося при электрофорезе. Прибор закрывают крышкой из пластмассы и подключают к источнику тока. Электрофорез проводят в течение 1,5—2,5 ч при на- [c.138]

Исследуемое вещество (пептид, аминокислота, аминоуглевод) вводят в реакцию с различными количествами ДНФБ (например, на 1 эквивалент исследуемого соединения берут 1/4, 1/2, 1 и 2 эквивалента ДНФБ). В результате реакции образуются продукты различной степени замещения по аминогруппам, которые легко могут быть разделены методами электрофореза и бумажной или тонкослойной хроматографии, По числу ДНФ-производных судят о числе свободных ННг-групп в исследуемом соединении. [c.147]

Разделение проводят в камере для низковольтного электрофореза (с. 89). Кюветы заполняют цитратным буфером. Вырезают полосы хроматографической бумаги шириной 4—5 см и наносят на них тканевой экстракт и стандартные растворы нуклеотидов- свидетелей в количестве, соответствующем 0,1—0,15 мкмоль каждого нуклеотида Разделение проводят в течение 4—5 ч при градиенте напряжения 15— 20 В/см и силе тока 0,5 мА на 1 см поперечного сечения бумажной полосы. Местоположение нуклеотидов идентифицируют в ультрахемископе. [c.184]

Электрофоретическое разделение углеводов проводят на бумажных полосах, длина которых определяется рамкой прибора для электрофореза. При работе на приборе ЭФА-1 ленты (2,5X40 см) смачивают боратным буферным раствором с pH 9,2 и помещают на рамку прибора. Смесь углеводов наносят на полоски хроматографической бумаги (3X15 мм), которые помещают на ленты. Электрофорез проводят в боратном буферном растворе с pH 9,2. [c.86]

Большинство электрофоретических методов не являются истинно хроматографическими методами, поскольку в них отсутствует распределение определяемого вещества между подвижной и неподвижной фазами. При этом аппаратурное оформление классического бумажного электрофореза и современного электрофореза очень похоже на оформление плоскостных хроматографических методов и капиллярной колоночной хроматографии соответственно, поэтому имеющийся опьгг можно перенести на электрофоретические метсды. [c.302]

Метод с применением изотопа полезен и в определении ситостерина на бумажных хроматограммах [63], а также в идентификации и определении некоторых гидразоновых производных стероидов после их разделения методом электрофореза [64]. В анализе, описанном в работе [64], наблюдалась линейная зависимость максимума радиоактивности пятна от содержания в нем производного стероида. [c.232]

Определение ЗзОб , 840 , З5ОГ и ЗвО меченных радиоизотопом 3, на бумажных полосках после их разделения методом высоковольтного электрофореза проводят двумя методами. В первом случае вымывают вещество из электрофоретической зоны, превращают его в Ва304 и измеряют -радиоактивность осадка на торцевом счетчике во втором случае измеряют радиоактивность 3 непосредственно на участке электрофореграммы с помощью жидкостно-сцинтилляциопного спектрометра. Последний метод более простой и чувствительный, но его эффективность зависит от природы присутствующих в электролите ионов [616]. [c.60]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология