Электрофорез тонкослойный

Вопрос о природе связи аминокислотных производных с другими нефтяными компонентами (порфиринами, асфальтенами) пока не решен. Ряд экспериментальных результатов косвенно свидетельствует о возможности их взаимосвязывания или ассоциирования. Известно, что порфррины не удается отделить от аминокислот с помощью электрофореза [761]. После гидролиза заметно меняются характеристики порфириновых компонентов концентрата .несколько увеличивается удельный объем их удерживания при г ель-хроматографии [390], меняются подвижность при тонкослойной хроматографии и И К спектры. Однако убедительных прямых подтверждений наличия химической связи между аминокислотами (пептидными) и порфириновыми молекулами не получено. [c.135]

Фиг. 63. Идентификация ДНС-аминокислот тонкослойным электрофорезом при pH 4,5 в смеси пиридин—уксусная кислота.

Радиохимическая чистота может быть исследована различными методами, но наиболее важными из них являются бумажная хроматография и тонкослойная хроматография (см. с. 92—97). После завершения разделения на хроматограмме определяют распределение радиоактивности. Количество вещества, наносимого на хроматограмму, часто крайне мало (вследствие высокой чувствительности обнаружения радиоактивности), и поэтому надо быть особенно осторожным в интерпретации результатов в связи с возможностью возникновения артефактов. Кроме хроматографии, для разделения может быть использован электрофорез (см. с. 114—118). Как упоминалось выше, иногда может оказаться полезным добавление к самому радиофармацевтическому соединению или к ожидаемым примесям носителей, т. е. соответствующих нерадиоактивных соединений. Существует, однако, опасность, что прибавленный неактивный носитель радиоактивного фармацевтического вещества может взаимодействовать с радиохимической примесью, что в свою очередь может привести к заниженной оценке этих примесей. Другой подходящий метод— наблюдение за биологическим распределением инъецированного радиофармацевтического вещества в испытании на животных. [c.83]

Хроматография — колоночная, тонкослойная, бумажная. Электрофорез на бумаге. Г ель-фильтрация [c.230]

Тонкослойный электрофорез (ТСЭ). Аналогично ТСХ, ТСЭ проводят на тонких слоях высокодисперсных сорбентов. Преимуществом метода ТСЭ является возможность использования универсальных обнаруживающих реагентов, применяемых в ТСХ. [c.364]

Движение подвижной фазы в тонкослойной хроматографии может быть ступенчатым, прерывным или непрерывным. Тонкослойную хроматографию можно комбинировать с тонкослойным электрофорезом, тонкослойным изоэлектрическим фокусированием, тонкослойной гель-фильтрацией и т. д. [c.6]

Смесь пептидов, образующихся в результате использования различны> методов расщепления, сначала должна быть разделена, и каждый из пептидов очищен. Целевой компонент перед анализом последовательности должен быть гомогенен по данным как минимум четырех различных методов разделения ионообменной хроматографии, электрофореза, бумажной или тонкослойной хроматографии и противоточного распределения. [c.366]

Метод пептидных карт представляет собой сочетание бумажной и тонкослойной хроматографии с высоковольтным электрофорезом. В качестве носителей используют силикагель или порошок целлюлозы. Вначале проводят хроматографию, для чего пробу наносят в точку вблизи одной стороны бумаги или пластинки, а затем под углом 90° проводят высоковольтный электрофорез. Метод применяют для разделения смеси низкомолекулярных соединений. [c.149]

Тонкослойная хроматография (ТСХ английское TL ) и предшествовавший ей метод хродгатографии на бумаге до середины 70-х годов занимали центральное место в исследованиях структуры белков и нуклеиновых кислот. В последнее десятилетие эти методы были явно оттеснены электрофорезом и высокоэффективной жидкостной колоночной хроматографией при высоком давлении. Оба метода превосходят ТСХ но разрешающей способности, а второй из них — и по скорости анализа. Кроме того, в результате ЖХВД экспериментатор получает уже разделенные жидкие фракции исходного препарата, в то время как после ТСХ ему надо еш,е локализовать пятна на пластинке, а в случае необходимости дальнейшего анализа — выполнить длительные операции элюции из них веш,ества. Точное и проводимое в ходе самого фракционирования определение микроколичеств вещества во фракциях прп ЖХВД, которое позволяют осуществить высокочувствительные детекторы и интегрирующие устройства современных жидкостных хроматографов, оставляет далеко позади соответствующие возможности ТСХ — ввиду плохой воспроизводимости процессов элюции из пятен и высокого уровня фона или самопоглощения в слое носителя при использовании оптических, флюоресцентных и радиоактивных методов оценки количества вещества в пятнах на пластинке без его элюции. Наконец, в препаративном варианте фракционирования количественные возможности ТСХ на несколько порядков меньше, чем у обычной колоночной хроматографии и даже у электрофореза. [c.457]

Весьма ценной разновидностью обычной тонкослойной или бумажной хроматографии является диагональная хроматография. Сначала нанесенный материал хроматографируют в одном направлении, затем в тонком слое на пластинке или бумаге проводят определенную химическую реакцию, после чего осуществляют разделение в другом направлении. Немодифицированные соединения располагаются по диагонали пластинки, тогда как продукты реакции оказываются смещенными по отношению к ней. Этим методом исследовали фотохимические [149] и другие [147] реакции флавинов. Аналогичный диагональный электрофорез применялся для идентификации пар —8Н-групп, образующих в белках дисульфидные мостики [150]. Пептидные фрагменты, содержащие 8—8-мостики, разделяли с помощью электрофореза на бумаге, затем обрабатывали бумагу парами надмуравьиной кислоты, разрывающей мостики [уравнение (2-20)], и после электрофореза в перпендикулярном направлении опрыскивали бумагу нингидрином. Пятна, расположенные вне диагонали, соответствовали фрагментам, которые участвовали в образовании 8—8-мостиков. По положению пятен подбирали [c.180]

В этой последовательности и будут разобраны конкретные примеры, но сначала следует рассмотреть имеющ ийся в продаже ассортимент носителей для ТСХ и тонкослойного электрофореза, новейшую аппаратуру и вкратце изложить технические аспекты постановки экспериментов. [c.460]

Распределительная хроматография. Более разработаны и практически оправданы методы тонкослойной хроматографии (ТСХ), позволяющие разделять сложные смеси серусодержащих ионов. Методы бумажной хроматографии и электрофореза на бумаге по сравнению с другими хроматографическими методами не получили широкого распространения. [c.58]

Фракционирование олигомеров осуш ествляют, используя методы скоростной седиментации в ультрацентрифуге и турбидиметрического титрования, а также хроматографические методы (электрофорез, тонкослойная и гель-проникаюш,ая хроматография и др.). [c.130]

Подобно хроматографии на бумаге, при тонкослойной хромато графии также проводят разделение в двух направлениях под пря мым углом друг к другу. В одном направлении, как правило проводят электрофорез в электрофоретической камере с малым объемом для испарения контакт между слоем адсорбента и электрод ными отсеками в этих камерах обеспечивают фитили из фильтровальной бумаги. Из-за низкой теплопроводности стекла и связанным с этим слабым тепловым рассеянием может возникать проблема охлаждения хроматографической пластинки. Для снижения образования тепла рекомендуется работать на стеклянных пластинках минимальной толщины и применять буферные растворы по возможности минимальной ионной силы. [c.234]

ДНС-аминокислоты могут быть идентифицированы с помощью электрофореза на бумаге или в тонком слое, а также с помощью тонкослойной хроматографии. [c.275]

Для анализа фракций элюата можно использовать любые достаточно чувствительные аналитические методы, пригодные для серийной работы. В основном с этой целью в настоящее время используют колориметрию в видимой и ультрафиолетовой областях, измерение радиоактивности, хроматографию на бумаге или электрофорез, тонкослойную хроматографию и биологические испытания. Одним из наиболее быстрых способов анализа фракций является отбор аликвотов (5—20 мкл), которые наносят на бумагу и затем обнаруживают соответствующим реактивом (см., например, [85]). [c.563]

Комбинированное использование тонкослойной гель-фильтрации с электрофорезом или иммунодиффузией до настоящего времени представляет собой один из наиболее тонких методов микроанализа белков. Хансон и др. [10] разработали метод двумерного разделения, используемый для анализа белков. На первом этапе белки подвергают гель-фильтрации в тонком слое сефадекса G-200 или G-100, а на втором — электрофорезу. Они предложили прибор, в котором хроматографическую пластинку можно закреплять под углом для гель-фильтрации и горизонтально для электрофореза. В описанных экспериментах использовали стеклянные пластинки размером 30 x 30 см и толщиной 1 мм, на которые наносили слой геля сефадекса толщиной 0,5 мм. Для набухания сефадекс оставляли в 0,05 М вероналовом буферном растворе pH 8,6. Сначала проводили гель-фильтрацию, а затем в направлении, перпендикулярном первому, в течение 3 ч вели электрофорез при градиенте напряжения 10 В/см. Этот метод весьма успешно был применен для анализа сывороток крови человека, спинномозговой жидкости и гормона роста. [c.240]

Фракционирование О. осуществляют, используя методы, применяемые для разделения на фракции высокомолекулярных соединений (см. Фракционирование), а также хроматографич. методы (электрофорез, тонкослойная и гель-нроникающая хроматографии и др.— см. Хроматография). Последние позволяют разделить смеси О. не только на узкие фракции, но и получать О.-гомологи в виде индивидуальных соединений. Электрофорез на бумаге используют для разделения О. с кислотными или основными группами. Тонкослойную хроматографию и хроматографию на бумаге применяют для разделения и идентификации О. различных классов (олигоэфиров, олигоамидов, олигофениленов, феноло-формальдегидных смол и др.). Благодаря своей универсальности получила широкое распространение гель-нроникающая хроматография, позволяющая не только разделить О.-гомологи, но одновременно оценить молекулярно-массовое распределение смесей. [c.230]

II тонкослойных пластинках), уступившему было своп позиции электрофорезу в гелях и ЖХВД. Наиболее интересные результаты достигаются при сочетании такого электрофореза с ТСХ в виде двумерного фракционпрования. Аналогичное сочетание с использованием электрофореза в геле возможно, но затруднительно ввиду сложности количественного переноса вещества с геля на пластинку. Впрочем, впечатляющее развитие в последнее время методов переноса веществ из гелей на фильтры ( блоттинга ) может привести к пересмотру этого утверждения. Ниже мы рассмотрим целый ряд примеров использования двумерного фракционирования с участием электрофореза, не фиксируя внимания на общих закономерностях последнего, поскольку он был подробно рассмотрен нами (для гелей) в одной из предыдущих книг серии, а отмечая лпшь те особенности, которые характерны именно для электрофореза на твердых носителях. [c.458]

Следует привести еще несколько примеров успешного применения гель-фильтрации в тонком слое. Линк [36] показал, что фракционирование в тонком слое можно проводить в присутствии 8М мочевины или 6,5 М хлоргидрата гуанидина. В этих условиях он сопоставил скорости миграции нативного и модифицированного (восстановленного и алкилированного) р-белка из спинномозговой жидкости. Совпадение скорост-ей миграции обоих образцов указывало на отсутствие в белке субъединиц с различным молекулярным весом. В сочетании с электрофорезом тонкослойную гель-фильтрацию применяли как удоб1у>1й метод контроля при выделении аминоацил-т-РНК-синтетаз [37]. При сопоставлении результатов анализа путем тонкослойной гель-фильтрации на G-200 двух фракций с валил-т-РНК-синтетазной активностью, но несколько различавшихся в функциональном отношении, оказалось, что обе фракции довольно близки по размерам молекул [38]. Радола [67] использовал тонкослойную гель-фильтрацию для решения ряда задач к ним относится анализ сывороточных белков животных и человека, растворимых белков культуры клеток млекопитающих in vitro, растворимых белков из листьев шпината. [c.266]

Выделение алкалоидов состоит в обработке измельченных частей растений или их водных вытялсек щелочами. При этом из солей освобождаются свободные основания, дальнейшее выделение которых возможно с помощью экстракции органическими растворителями или перегонкой с водяным паром. Довольно часто алкалоиды осаждают из водных растворов в виде пикратов, фосфовольфраматов или рейнекатов. В настоящее время для выделения алкалоидов пользуются также методами противоточного распределения, электрофорезом и различными видами хроматографии, например колоночной, бумажной или тонкослойной хроматографией. [c.669]

Электрофорез, тонкослойная хроматография и высокоэффективная тонкослойная хроматография нашли широкое применение главным образом при исследованиях реакций координационных комплексов. На рис. 14.26 показано прекрасно проведенное разделение серии тиоцианат-цианокомплексов хрома (П1) методом электрофореза [43], а рис. 14.27 демонстрирует результаты разделения хлоробромо- и бромоиодокомплексов осмия (IV) при помощи электрофореза на бумаге [3]. [c.334]

Электрофорез проводят в обычных приборах для горизонтального электрофореза на бумаге и тонкослойных пластинках (обязательно в закрытой во избежание подсыхания пленки камере), например фирмы AMAG (модели 67701 или 61000 последняя — для длинных полосок и высокого напряжения) или фирмы Savant (США). [c.461]

Исследуемое вещество (пептид, аминокислота, аминоуглевод) вводят в реакцию с различными количествами ДНФБ (например, на 1 эквивалент исследуемого соединения берут 1/4, 1/2, 1 и 2 эквивалента ДНФБ). В результате реакции образуются продукты различной степени замещения по аминогруппам, которые легко могут быть разделены методами электрофореза и бумажной или тонкослойной хроматографии, По числу ДНФ-производных судят о числе свободных ННг-групп в исследуемом соединении. [c.147]

Для идентификации ДНС-аминокислот используют методы высоко- и средневольтного электрофореза на бумаге, тонкослойной хро- [c.149]

Особенно легко и быстро удается разделить смесь аминокисаот с помощью комбинации двумерного разделения, например тонкослойного электрофореза на целлюлозе и хроматографии (метод отпечатков пальцев ). Сначала проводят электрофорез (низковольтный электрофорез без охлаждения, 20 В/см, муравьиная кислота), а затем хроматографируют во втором направлении, например с элюентом состава /Г Ре/п-бутанол метанол пиридин муравьиная кислота вода (33 43 9,6 0,4 20). В слу- [c.58]

Тонкослойный электрофорез впервые был использован в 1946 году Конеденом для разделения аминокислот и пептидов. Преимуществами метода являются более эффективная система охлаждения, высокая чувствительность, [c.101]

Одно ИЗ преимуществ дансилирования по сравнению с динитро-фенилированием состоит в том, что после кислотного гидролиза ДНС-белка аминокислоты могут быть идентифицированы электрофоретически или хроматографически сразу после расщепления белка без экстракции гидролизата. Другим преимуществом является очень высокая чувствительность. Максимум возбуждения флуоресценции ДНС-аминокислот находится около 550 нм, их флуоресценция настолько интенсивна, что с помощью электрофореза на бумаге легко можно определить 1—5, а с помощью тонкослойной хроматографии 0,2—1,0 нмоль ДНС-производного. [c.275]

В книге не обсуждаются вопросы ионообменной хроматографии, гель-проникающей хроматографии, разделений в слое методом электрофореза. Ссылки на бумажную хроматографию даются только тогда, когда прослеживаются интересные параллели с классической тонкослойной хроматографией. В любом случае основное влияние уделено адсорбционной хроматографии. Я умьшшенно пошел на такое ограничение, чтобы иметь возможность проверять обсуждаемые вопросы экспериментально (поскольку это моя специальность) и тем самым оказать максимальную помощь читателю. [c.19]

В качестве носителя рекомендуется использовать силикагель марки кизельгель 5 (фирма Ma herey-Nagel, ФРГ). Перед опытом слой силикагеля в течение 30 мин прогревают при 110° С и после первого разделения прогревание повторяют. Чаще всего тонкослойную хроматографию комбинируют с электрофорезом. [c.237]

ДНС-аминокислоты быстро и надежно могут быть идентифицированы с помощью электрофореза в тонком слое. В настоящее время в продаже имеются готовые для употребления тонкослойные пластинки для электрофореза (например, MN-полиграм, Sil N-HR, фирма Ma herey-Nagel Со, ФРГ). [c.277]

Электрофорез на бумаге используют для разделения олигомеров с кислотными и основными группами. Тонкослойную хроматографию и хроматографию на бумаге применяют для разделения олигомеров различного класса (олигоэфиров, олигоамидов, олигофениленов, фенолоформальдегидных олигомеров и др.). Благодаря своей универсальности получила широкое распространение гель-проникающая хроматография, позволяющая не только разделить олигомеры, но и одновременно оценить молекулярно-массовое распределение смесей. [c.130]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология