Определение стафилококков

Серологическое исследование. Для подтверждения стафилококковой инфекции серодиагностика имеет вспомогательное значение. Определение стафилококкового антитоксина в сыворотке крови при диагностике хронических стафилококковых инфекций (остеомиелит, септикопиемия и др.) имеет большее значение, так как бактериологические исследования, проводимые на фоне массивной антибиотикотерапии, как правило, остаются безрезультатными. Можно использовать РНГА с эритроцитарным стафилококковым диагностикум ом (эритроциты нагружены а-токсином стафилококка). [c.108]

В основе другой реакции лежит метод подавления гемолитической активности стафилококкового токсина антитоксином сыворотки больного. Для этого к определенной дозе стафилококкового токсина прибавляют сыворотку больного, разведенную 1 5, 1 10, 1 15, 1 20 и т.д., тщательно перемешивают и к смеси добавляют 0,05 мл эритроцитов кролика. Результаты реакции учитывают после инкубирования пробирок в течение 1 ч при температуре 37 °С и такого же периода при комнатной температуре. [c.108]

Исследование крови. Посев крови в сахарный бульон или специальную среду для выделения гемокультур стафилококков производят так же, как при стафилококковых заболеваниях. При наличии стрептококка на дне флакона появляется хлопьевидный придонный осадок. В мазках обнаруживаются длинные цепочки стрептококков. Микроскопия позволяет дать предварительный ответ о наличии или отсутствии стрептококка. Для вьщеления чистой культуры и определения характера гемолиза делают пересев в чашку с кровяным агаром. Через сутки (3-й день исследования) появляются типичные мелкие колонии, окруженные зоной гемолиза. Дальнейшие этапы исследования описаны выше. [c.112]

Стафилококковые энтеротоксины представляют собой простые токсины, молекула которых состоит из одной полипептидной цепи. Известно несколько серологически различных типов стафилококковых энтеротоксинов, обозначенных соответственно буквами латинского алфавита от А до F. Все стафилококковые энтеротоксины независимо от типа, обладают сходным биологическим действием, что свидетельствует об общности отдельных участков их структуры, хотя полная идентичность их молекулярного строения отсутствует. Молекулярная масса стафилококковых энтеротоксинов в пределах 30000 дальтон и зависит от метода выделения и очистки, а так се способов определения молекулярной массы. [c.361]

Определение энтеротоксина стафилококков. Штаммы стафилококков, выделенные при пищевых отравлениях, испытывают на наличие энтеротоксина следующим образом. Одну петлю суточной агаровой культуры стафилококка вносят в колбу, содержащую 50 мл питательной среды, предназначен- ной специально для накопления стафилококкового энтеротоксина (рец. 64). Колбу помещают в эксикатор, в котором воздух замещен 20% углекислотой. Для этого на дно сосуда емкостью 2 л насыпают 2 г двууглекислой соды. Крышку эксикатора смещают по ранту, смазанному смесью вазелина с ланолином в отношении 1 1 так, чтобы осталась небольшая щель, через которую можно ввести пипетку и влить в соду 17 мл 10% серной кислоты. После этого крышку плотно притирают к эксикатору. Посевы инкубируют в термостате при 37°С, ежедневно насыщая среду эксикатора новой порцией углекислоты. На 4-й день колбу с засеянной средой вынимают из термостата и содержимое ее фильтруют через мембранные фильтры № 3 или 4 (см. с. 24). Полученный фильтрат в количестве 10—15 мл смешивают с равным количеством теплого молока и скармливают котятам 4—8-недельного возраста с массой тела 350—600 г. [c.171]

Суперантигены могут вызывать клональную делецию Т-клеток, экспрессирующих определенные /р-цепи. Абсолютное число Т-клеток, ТкР которых содержит ту или иную /р-цепь, неодинаково у мышей разных линий, однако феномен Т-клеточной делеции под влиянием суперантигенов проявляется во всех случаях. В таблице приведена количественная характеристика клональной делеции у мышей некоторых линий. (5ЕВ - стафилококковый энтеротоксин В.) [c.251]

Определение стафилококкового антитоксина в сыворотке -крови. Многие заболевания стафилококковой этиологии, особенно с глубокой локализацией патологического очага (остеомиелиты, септикопиемические процессы), сопровождаются постоянным поступлением больших количеств стафилококкового антигена в русло крови, стимулируя тем самым формирование специфических антител, одним из которых является стафилококковый антитоксин, нейтрализующий гемолитические свойства стафилококкового токсина. У здоровых людей, так же как у лиц, перенесших стафилококковую инфекцию кожных покровов или гнойное хирургическое заболевание, титр стафилококкового антитоксина не превышает 2 АЕ. [c.171]

Определение стафилококкового антитоксина в сыворотке крови приобретает большое значение при диагностике септи-копиемических процессов, когда жизнь больного находится в опасности, а бактериологические исследования, проводимые на фоне массивной антибиотикотерапии, как правило, остаются безрезультатными. [c.172]

Определение фаговаров бактерий. Оно проводится для эпидемиологического анализа и установления источников инфекции при кишечных, стафилококковых, дифтерийной и других инфекциях. [c.39]

Определение фаговара культур имеет важное эпидемиологическое значение для выявления источника инфекции и путей заражения. Основной международный набор стафилококковых фагов состоит из 21 типа, разделенных на 4 группы. Наибольшее значение при внутрибольничных стафилококковых инфекциях имеют представители фаговаров 77 и 80. Вместе с тем довольно часто (до 40 % случаев) встречаются нетипируемые штаммы стафилококков. [c.107]

М-стафилококковый бульон для определения стафилококков методом мембранных фильтро з на питательных подкладках. (Стандартные методы США, 1975). Триптона или пол)шептона 10 г, дрожжевого экстракта 2,5 г, лактозы 2 г, маннита 10 г, фосфата калия двуосновного 5 г, хлорида натрия 75 г, дистиллированной воды 1000 мл. Стерилизовать при 112°С 15 мин, pH 7,0 после стерилизации. [c.243]

В 1972 г. Д. Сачс и соавт. [114] разработали иммунологический метод, который был использован для изучения процесса ренатурации белков, не содержащих дисульфидных связей. Метод основан на предположении о двухфазном механизме свертывания и идентификации конформационных состояний фрагментов нативной трехмерной структуры белка с помощью специально подобранных антител. Далее выявляются зависимости между константой равновесия предельных состояний (D и N) и константами связывания антител с белковыми фрагментами. Д. Сачс и соавт. [115] применили метод для определения константы равновесия N D стафилококковой нуклеазы, а Дж. Харрел и соавт. [116] и Б. Фурье и соавт. [117] — для изучения конформаций промежуточных состояний миоглобина. О характере получаемой при исследовании иммунохимического метода информации можно судить по результатам рассмотренной в разд. 9.4. работы Л. Чавеца и Г. Шераги [86], применивших его в исследовании ренатурации рибонуклеазы А. [c.385]

Схема разделения и очистки пептидов, описываемая ниже (включающая гельфильтрацию, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе или дауэксе-50, высоковольтный электрофорез и хроматографию на бумаге), применима к белкам средней молекуляр-1ЮЙ массы (до 40 000). Крупные фрагмеггты, плохо разделяющиеся на бумаге и элюирующиеся с нее, первоначально отделяют гель-фильтрацией, а основную часть пептидов после фракцио- шрования на ионообменнике очищают окончательно хроматографией на бумаге. Однако эта схема применима далеко ие ко всем типам гидролизатов белков. Например, мембран11ые белки плохо расщепляются ферментами с высокой специфичностью, такими, как трипсин или стафилококковая протеаза гидрофобные пептиды склонны к образованию агрегатов при гель-фильтрации, осаждаются на ионообменных колонках и экстрагируются в охлаждающую среду при высоковольтном электрофорезе на бумаге и в органическую фазу при промывках в реакции Эдмана. Оптимальная схема анализа структуры мембранных белков включает их фрагментацию с помощью химических методов на небольшое число крупных пептидов, разделение в денатурирующих условиях на полиакриламидных гелях и определение аминокислотной последовательности автоматическим методом после присоединения пептида к твердой матрице. Альтернативный вариант основан на использовании протеаз с низкой специфичностью (таких, как пепсин или эластаза). При этом образуется значительное число коротких пептидов, которые [c.352]

Определение антистафилолизина в сыворотках, содержащих менее 1 АЕ в 1 мл. Для титрования сывороток, содержащих в 1 мл крови менее 1 АЕ, используют метод нейтрализации гемолитических свойств стафилококкового токсина — Lh (Limes haemolyti us). [c.172]

Для определения Lh в ряд пробирок разливают стафилококковый токсин в дозах 0,08 0,1 0,12 0,15 0,18 0,2 0,22 0,24 0,26 0,28 0,3 0,32 0,35 доводят общий объем до 1 мл изотоническим раствором, затем в каждую пробирку добавляют стандартную антистафилококковую сыворотку по 1 АБ в 1 мл и после тщательного перемешивания смеси вносят по капле (0,05 мл) кроличьих эритроцитов, разведенных из расчета 1 мл отмытых эритроцитов+ 2 мл изотонического раствора хлорида натрия. [c.172]

Иммуноанализ антител. 1. Антиген в солевом растворе инкубируют на пластиковой подложке или в пробирках, в результате чего небольшое его количество адсорбируется на поверхности пластика. 2. Свободный антиген удаляют путем отмывания. (Подложку затем можно обработать избытком постороннего белка, чтобы предотвратить последующее неспецифическое связывание белков.) 3. Добавляют исследуемые антитела, которые связываются с антигеном. 4. Несвя-завшиеся белки удаляют отмыванием. 5. Антитела определяют при помощи меченого лиганда. Лигандом может служить, например, стафилококковый белок А, который связывается с F -областью IgG чаще используют другие антитела, специфичные по отношению к исследуемым антителам. Применяя лиганд, который связывается с антителами определенного класса или подкласса, можно дифференцировать изотипы антител. 6. Несвязанные антитела удаляют отмыванием. 7. Определяют связавшуюся метку. Типичная кривая титрования представлена внизу. С повышением количества антител интенсивность сигнала возрастает линейно от фонового значения до уровня плато. Титр антител можно определить правильно лишь в линейной области. Уровень плато, как правило, в 20-100 раз выше фонового. Чувствительность метода обычно составляет приблизительно 1-50 нг специфических антител в 1 мл. Специфичность метода можно проверить, добавив свободный тест-антиген в повышающихся концентрациях к исследуемым антителам на зтапе (3). Антиген связывается с антителами и блокирует их соединение с антигеном, фиксированным на подложке. Добавление возрастающих количеств свободного антигена снижает интенсивность сигнала. [c.534]

Фермент имеет мол. вес 16 900 и образован единственной поли-пептидной цепью, содержащей 149 аминокислотных остатков. Структура стафилококковой нуклеазы и его комплекса с тими-дин-3, 5 -дифосфатом была установлена с разрешением 2,0 А [181, 182], и, несмотря на это, механизм действия фермента не известен. Вспомнив об успехах, достигнутых при исследовании рибонуклеазы, и имея в виду все вышесказанное о стафилококковой нуклеазе, можно сделать вывод, что определение структуры фермента не означает, что мы автоматически устанавливаем механизм его действия. И тем не менее данные о кристаллической структуре послужили основой при выяснении механизма действия рассматриваемого фермента. [c.394]

Возбудителем стафилококковых инфекций чаще бывает S. aureus, несколько реже — S. epidermidis, очень редко — S. saprophyti us. Стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры человеческого тела, поэтому микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций не может ограничиться выделением и идентификацией возбудителей необходимы количественные методы исследования, т. е. определение числа микроорганизмов в пробе. [c.305]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология