Фаговые РНК

Видно, что промотор фаговой РНК-полимеразы не имеет никаких черт сходства с промотором РНК-полимеразы хозяина. [c.185]

При гидролизе РНК вируса табачной мозаики действием гуанил-РНК-азы удалось выделить три длинных олигонуклеотида уникальной последовательности для локализации их положения в молекуле РНК использован прием частичной депротеинизации РНК фага. Известно, что депротеинизация фаговой РНК под действием додецилсульфата происходит последовательно, начиная с 5 -конца цепи PHK s. Прерывая процесс депротеинизации в разные моменты времени и расщепляя освободившуюся РНК, можно определить относительное расположение различных фрагментов. [c.81]

На основании фенотипов, наблюдавшихся при росте в ограничивающих условиях, эти мутанты были разбиты натри группы. Мутанты группы I неспособны синтезировать минус -цепи и, следовательно, не могут образовывать ни РФ, ни РП. Такие фаги, вероятно, содержат мутацию в гене, определяющем первичную структуру фаговой РНК-репликазы. В отличие от них мутанты группы II не только характеризуются нормальной репликацией РНК в ограничивающих условиях, но и образуют внешне нормальные, хотя и не инфекционные частицы потомства. [c.475]

ПРИМЕНЕНИЕ ПЛАЗМИД, СОДЕРЖАЩИХ ПРОМОТОРЫ, СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ДЛЯ ФАГОВЫХ РНК-ПОЛИМЕРАЗ [c.12]

Следует отметить, что хроматография в системе ХОФ-5 является мягким способом фракционирования и очистки, по крайней мере в случае РНК. Известно, например, что нативная РНК фага MS-2, кодируюш,ая только три белка (оболочки фага, репликазу и белок А) в опытах in vitro ведет инициацию их синтеза в пропорции 70 25 5. После мягкой тепловой денатурации РНК эти синтезы инициируются уже с одинаковой скоростью, что можно объяснить утратой специфической третичной организации молекулы фаговой РНК. Оказалось, что после очистки в хроматографической системе ХОФ-5 РНК фага MS-2 полностью сохраняла нативные пропорции инициации указанныз выше синтезов. То же самое было показано и для РНК фага QP [ ampbell et al., 1980]. [c.173]

Из трех терминирующих кодонов самым слабым является UGA. Он чаще всего может проскакиваться транслирующей рибосомой, по-видимому, за счет его узнавания триптофановой тРНК. В некоторых случаях этот терминирующий кодон специально используется в природе для того, чтобы в дополнение к основному белковому продукту, синтез которого завершается на этом кодоне, происходило образование небольших количеств другого физиологически важного белка из удлиненного полипептида. Такая ситуация наблюдается при трансляции РНК фага Q цистрон белка оболочки фага заканчивается терминаторным кодоном UGA, который время от времени проскакивается рибосомами, что приводит к синтезу небольших количеств значительно более длинного, чем белок оболочки, полипептида последний является необходимым продуктом трансляции фаговой РНК, так как требуется для сборки полноценной (инфекционной) фаговой частицы. [c.266]

Благодаря этой особенности, а также благодаря тому, что репликаза Qp в присутствии хозяйского фактора распознает как (+)нить, так и (—)нить фаговой РНК, добавление этой РНК к ферменту запускает множественные повторные полные циклы репликации вирусного генома на ( )матрицах синтезируются (—)нити, которые в свою очередь используются для синтеза (—)РНК- Соотношение между синтезом (-г) и (—)цепей in vitro будет определугться концентрацией хозяйского фактора , который, как известно, нужен для образования (—)цепей при его недостатке предпочтительно идет синтез (—)нитей. Очищенная система, состоящая из репликазы Qp, некоторого количества хозяйского фактора , нуклеозидтрифосфатов и солей, способна синтезировать инфекционную фаговую РНК в количествах, многократно превышающих количество фаговой РНК, первоначально внесенное в систему в качестве матрицы. [c.320]

Потом наступила очередь второго. Когда кишечная палочка заражается бактериофагом Т7, то сначала часть генов фаговой ДНК считывается хозяйской РНК-полимеразой. Но потом появляется совсем другая, фаговая РНК-полимераза, которая начинает считывать остальные, так называемые поздние , гены фаговой ДНК. Так в зараженной клетке происходит процесс перехода власти от законного хозяина, ДНК Е. oli, к вторгшемуся паразиту — фаговой ДНК. Заметим, между прочим, что факт переключения синтеза молекул РНК с ранних на поздние при фаговой инфекции был открыт нашим соотечественником Р. Б. Хесиным и его сотрудниками на рубеже 50-х и 60-х годов. [c.51]

ТОЧНЫХ РНК (включая рибосомную РНК) полностью подавлен актиномици-ном D. В отдельных случаях фаговая РНК оказывается способной индуцировать синтез фагоспецифичных белков даже in vitro. В определенных условиях удается выделить пг-РНК, образованную после введения трансформирующей ДНК и дублирующую функцию этой последней. [c.504]

Заражение бактериальной клетки РНК-содержащим фагом, например f2 (или родственным фагом MS2) или фагом QP, индуцирует образование FHK-зависимых РНК-полимераз. Эти ферменты ответственны за воспроизведение фаговой РНК в клетке-хозяине. Было показано, что РНК-полимеразы, индуцируемые фагами MS2 и Q 3, в отличие от других полимераз используют в качестве затравки только РНК из того же вида фага. Другими словами, фермент фага QP не способен использовать в качестве затравки РНК из фага MS2, и наоборот. РНК из других источников также не могут служить затравкой для этих ферментов. Такая специфичность весьма существенна для размножения фага, так как подавляющее большинство молекул внутриклеточной РНК — это РНК клетки-хозяина. С помощью фермента из фага QP Снигелману удалось синтезировать in vitro биологически активную, т. е. инфекционную, РНК этого фага. Заметим, что и в этом случае [c.514]

Нуклеиновая кислота, о которой здесь идет речь,— это РНК, и притом фаговая РНК. Спигелман работал с РНК фага Q , который заражает штамм Hfr Es heri hia oli Q13 (теперь все эти обозначения уже кое-что говорят читателю в крайнем случае он может снова заглянуть в гл. 2, с тем чтобы вспомнить все, что мы говорили о бактериофагах и о штаммах Hfr). Эту РНК удалось при помощи весьма сложных методов выделить и очистить. Таким образом, в руках исследователей оказался полный геном фага (а не отдельные гены ). [c.396]

Если эту очищенную РНК ввести в культуру клеток Es heri hia oli Q13 Hfr на поверхности агара, то на нем образуются уже известные нам стерильные пятна это означает, что фаговая РНК заражает бактерии (предварительно пришлось удалить прочные оболочки бактериальных клеток — в противном случае голая РНК не смогла бы проникнуть внутрь ведь целые фаговые частицы содержат специальный фермент, который растворяет оболочку). [c.396]

Так как наша полимераза увеличивает количество фаговой РНК, то ее называют также репликазой, что приблизительно можно перевести как фермент размножения или фермент удвоения . Его очистка связана со значительными трудностями. Труднее всего оказалось очистить фермент от рибонуклеазы, которая имеет пренеприятное свойство загрязнять почти любой ферментный экстракт. Даже незначительная примесь рибонуклеазы немедленно привела бы к распаду либо собственной фаговой, либо новообразованной РНК. [c.397]

Итак, полимераза синтезирует фаговую РНК в пробирке, причем копирование происходит с такой точностью, что новообразованная РНК оказывается инфекционной в той же степени, что и исходная, экстрагированная из клеток Es heri hia oli, точнее из бактериофагов, РНК-мат-рица. [c.397]

Все это кажется совершенно несбыточным. Попробуем придумать что-нибудь более реальное. Мы можем, к примеру, вместо фаговой РНК использовать в описанной системе искусственный геном — геном, созданный согласно нашим планам. В пробирке этот опыт не удается. Система настроена только на РНК фага Qp. Если мы вместо этой РНК возьмем РНК фага MS-2, то наша полимераза отказывается работать, хотя и этот фаг также способен заражать Es heri hia oli Q13 Hfr. Живая клетка действует гораздо более гибко . Если мы предложим ей искусственную РНК, то она либо вообще откажется принимать ее, либо примет ее, но распознает в ней чужую, неподходящую и немедленно разрушит ее при помощи рибонуклеазы. Однако чужая РНК может быть принята клеткой как своя. В этом случае чужая РНК нарушает внутриклеточную гармонию и клетка погибает, как это происходит, например, при ее поражении лизирующим фагом. Лишь в одном-единственном случае можно было бы ожидать какого-то положительного эффекта, а именно когда чужой геном лишь незначительно отличается от нормального и потому все же может подойти клетке. Здесь открывается возможность для выявления и экспериментального изучения случаев уживчивости генома , а также взаимоотношений между геномом и другими частями клетки. [c.399]

Вырожден ли генетический код Да, по крайней мере в случае фаговой РНК (Adams et aU, 1969). [c.13]

Ранее было показано, что клетки Е. соИ, у которых проницаемость стенок повышали путем частичного гидролиза лизоцимом, могут быть заражены молекулами ДНК, выделенными из частиц бактериофага 0X174. Оказалось, что такие клетки можно также заразить изолированными молекулами 1 НК бактериофага f2. Когда в такие проницаемые клетки попадает очищенная фаговая РНК, происходит образование нормального количества зрелых частиц потомства. PIT К фага f2, проникающая в клетку-хозяина таким путем, может также индуцировать развитие фага в женских Р"-клетках, которые обычно устойчивы к фагу f2. Это означает, что специфичность фага f2 к мужским штаммам связана исключительно с ролью F-пилей в процессе проникновения фага в клетку. Иными словами, присутствие полового фактора F не требуется для внутриклеточного развития фага. [c.470]

Для того чтобы выяснить, не участвует ли в процессе репликации РНК, изображенном на фиг. 233, какая-нибудь особая ферментативная система, была проверена способность экстрактов клеток Е. vli, зараженных фагом 2, осуществлять синтез фаговой РНК in vitro. Оказалось, что [c.472]

Прямое доказательство способности плюс -цепи РНК фага f2 служить матрицей для трансляции было получено в опыте Циндера и сотрудников, которые добавили РНК, выделенную из зрелых фаговых частиц, в бесклеточную систе.му синтеза белка, подобную той, которую использовал Ниренберг для расшифровки генетического кода (гл. XVHl). Оказалось, что фаговая РНК стимулирует полимеризацию радиоактивных аминокислот. Более того, было установлено, что значительная часть образующихся при этом полипептидных цепей имеет такую же первичную структуру, что и белок оболочки фага 2. Этот эксперимент, проведенный спустя год после открытия Ниренбергом кодирующих свойств синтетических полирибонуклеотидов, был первым случаем синтеза in vitro природного белка на природной РНК-матрице. В последующей работе было показано, что по своей третичной структуре синтезированные таким способом искусственные полипептиды, вероятно, подобны белку оболочки фага [2, так как они обладают способностью связываться с присутствующей в реакционной смеси фаговой РНК. [c.474]

Демонстрация инфекционности РНК ВТМ Определение аминокислотной последовательности белка ВТМ Трансляция фаговой РНК in vitro с образованием фагового белка Репликация фаговой РНК in vitro [c.13]

При изучении вирусов бактерий выясняется, что многие бактерии, в том числе и наиболее широко используемые в качестве клетки-хозяина Е. соИ, не могут инфицироваться фаговыми РНК или ДНК Вероятно, это объясняется прочностью клеточной стенки грамотрицательных бактерий Однако сферонласты и протопласты чувствительны как к РНК, так и к ДНК мелких фагов (фаги групп f2, Q , X174, fd и т. д.) [461]. Сферопласты и протопласты представляют собой сферические частицы, обрп- [c.173]

Кроме описанного комплекса, было обнаружено образование специфического комплекса белка оболочки с репликативной промежуточной формой (РПФ) фаговой РНК. Таким образом, можно думать, что главную роль в механизмах регуляции играет изменение относительной интенсивности процессов репликации и трансляции. Однако результаты последних опытов Сугимы, проведенных как in vivo, так и in vitro, показали, что белок оболочки непосредственно регулирует процесс трансляции. Механизм взаимодействия белка со специфическим участком РНК неизвестен, но внешне явление это напоминает взаимодействие ДНК фага X и репрессора XGi (см. гл. ХИ). Вопрос этот требует дальнейшего изучения. [c.248]

В табл. 11.2 приведено несколько примеров последовательности нуклеотидов фаговых РНК, которые играют роль мРНК (указано также начало цистронов). Особенно тщательно исследованы относительно простые РНК мелких фагов R17, Q , MS2 и т. д. их мРНК содержит только три цистрона (ДНК высших организмов содержат тысячи цистронов), кодирующих А-белок, белок оболочки и РНК-репликазу (в указанном порядке). Последовательность нуклеотидов прецистронных участков известна только частично, но установлено, что эти участки расположены слева от цистрона. Известно, например, что цис-трон А-белка фага Q начинается с 61-го нуклеотида от 5 -кон- [c.24]

На рис. 9.2 изображена структура полицистронной мРНК. Межцистронные области, располагающиеся между разными кодирующими участками, значительно различаются по размеру. В случае фаговых РНК они могут быть достаточно протяженными, достигая примерно 100 оснований. В некоторых бактериальных мРНК они состоят из нескольких (до 30) нуклеотидов, но возможно существование еще более коротких последовательно- [c.117]

Явление той же природы обычно обнаруживается при трансляции фаговых РНК, цистроны которых всегда экспрессируются в определенной последовательности. Причина состоит в том, что фаговая РНК обладает вторичной структурой, позволяющей только одной инициирующей последовательности взаимодействовать с рибосомой. Рибосомы не могут присоединиться к остальным инициирующим последовательностям, так как те образуют пары с другими участками РНК. Однако в процессе трансляции первого цистрона происходит разрушение вторичной структуры, что позволяет рибосомам присоединиться к инициирующему кодону следующего цистрона. Таким образом, в этой мРНК вторичная структура контролирует способность определенных цистронов транслироваться. [c.119]

Фаговые РНК-полимеразы во многих отношениях отличаются от полимераз клетки-хозяина. Они обычно имеют небольшую молекулярную массу (90—100 000 дальтон), представляют собой мапомеры и предъявляют весьма ограниченные, но тем не менее высокоспецифические требования к промотору. В противоположность этому РНК-полимераза Е. соИ представляет собой большую гетеромультимерную молекулу, способную инициировать синтез РНК с большого числа промоторных и подобных промоторным последовательностей [3]. На практике такие различия дают возможность использовать фаговые РНК-поли- [c.12]

Первым ферментом, широко использовавшимся для синтеза РНК-зондов, стала РНК-полимераза фага SP6 [4]. Это в основном было обусловлено исключительно высокой стабильностью фермента и возможностью получать его в больших количествах с помощью простых методов — в отличие от ферментов фагов Т7 и ТЗ. Однако генетическая организация фагов Т7 и ТЗ исследована достаточно полно, что дало возможность получить их ферменты путем экспрессии клонированных генов, и сейчас они легко доступны. Принцип использования фаговых РНК-полимераз идентичен для всех трех ферментов (рис. 1.1). Обычно полимеразы применяются для транскрипции линейных матриц, но существует и другой подход, основанный на таком природном свойстве этих ферментов, как преждевременная тер-минацня цепи в присутствии низкой концентрации нуклеозид-трифосфатов. Достоинство этого подхода состоит в том, что он не требует линейной матрицы, однако получаемые при этом молекулы-зонды имеют разную длину, что делает их непригодными для работы при использовании приводимых здесь методик. [c.13]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология