Гель-фильтрация в агаре

Иммунодиффузию в агаре можно проводить по методу Хансона [14]. После гель-фильтрации на пластинках 10-20 см гель сефадекса удаляют механическим путем, оставляя только полоску шириной 3—5 см, содержащую разделяемые белки. Затем пластинку заливают расплавленным агаром (охлажденным до 50 °С), который при застывании образует гель толщиной 1 мм. При аккуратном выполнении этой операции агар покрывает полоску сефадекса, не нарушая слоя. Таким путем удается получить хорошие зоны преципитации, однако следует заметить, что эта методика требует большого экспериментального навыка. Иммунодиффузию в геле агара можно также выполнять после переноса белков на ацетилцеллюлозные мембраны [57] или полоски фильтровальной бумаги [13]. Полоски помещают на агаровый гель, где осуществляют иммунодиффузию. [c.271]

Электрофорез используется для выделения и разделения ферментов на конечных стадиях очистки, а также для препаративных и аналитических целей. Для препаративного выделения и очистки ферментов проводят зонный электрофорез па бумаге и в блоках или на колонках с различными наполнителями (целлюлозным порошком, крахмалом и другими), а также электрофорез в гелях — агар-агаровом, крахмальном, полиакриламидном. Электрофорез в гелях отличается от электрофореза на порошкообразных или пористых носителях. Здесь сочетаются два метода разделения ферментов — электрофоретический и метод, основанный на гель-фильтрации. Фракционирование ферментов на основе различной электрофоретической подвижности оказывается одним из самых эффективных методов. [c.201]

С помощью гель-фильтрации на сефадексе, агаре или агарозе из раствора вируса удаляют примеси небольших молекул. Экстракт наслаивается иа вершину колонки гранулированного геля, уравновешенного соответствующей средой. Частицы вируса, не проникая внутрь гранул геля, будут двигаться через колонку быстрее, чем низкомолекулярные вещества, которые могут проникать в гранулы. Гель-фильтрацию обычно используют ка последнем этапе очистки вируса. Этот метод удобен также для некоторых вирусов, которые должны быть быстро удалены из первичного осветленного экстракта, так как обеспечивает замену растворителя, в котором находится вирус. Колонка с сефадексом 0-100 диаметром 5 см и длиной 50 ом обладает достаточной емкостью для нанесения 200 мл осветленного экстракта [1671]. [c.43]

Гель-фильтрация в агаре [c.46]

В качестве матрицы в аффинной хроматографии наиболее широко используется агароза. Это очиш,енный линейный содержащий галактозу (рис. 1) аэрогель-ксерогелевый коллоид, выделяемый или из агара или непосредственно из содержащих агар морских водорослей. Агароза характеризуется хорошей гелеобразующей способностью она относительно биологически инертна и поэтому удобна в качестве носителей не только для аффинной хроматографии, но также и для гель-фильтрации. Агар и агароза — не синонимы, и различные агарозные препараты также могут значительно отличаться друг от друга по своим физико-химическим свойствам. Некоторые агарсодержащие морские водоросли приведены в табл. 1. [c.11]

Другой тип электрофореза осуществляется в поддерживающих средах, например в гелях (крахмал, агар-агар, полиакриламид), что значительно повышает разрешающую силу электрофоретического анализа и позволяет работать с малыми количествами веществ. В качестве примера можно привести разделение препарата фетуина в геле. По данным ультрацентрифугирования и иммуноэлектрофореза этот препарат гомогенен, однако при электрофорезе на поливинилхлориде при pH 8 он разделяется на несколько фракций, отличающихся содержанием сиаловых кислот. Такое же тонкое разделение этого препарата удалось достичь на ДЭАЭ-сефадексе. Следует отметить, что хроматография на колонках и гель-фильтрация дают достаточно полное представление о гомогенности и широко применяются в практике. [c.74]

Возможность выполнения этих требований ограничивается возрастанием сопротивления при фильтрации жидкости. В колонку приливают 1.5—3 мл раствора веществ, имеющих различный молекулярный вес. При быстром наступлении равновесного распределения фильтруемых веществ между свободным растворителем Уо и иммобильным растворителем геля в верхнем слое колонки каждая фракция распределяется в грануле в соответствии с величиной своего молекулярного веса, а следовательно, и своей скорости диффузии в набухших гранулах. Проницаемость геля может иметь несколько уровней в зависимости от его строения и степени набухания. Вблизи поперечных связей между продольными цепями полимерной сетки гель ироницаем только для фракций с наиболее низким молекулярным весом. Скорость диффузии каждой фракции в грануле набухшего геля прямо пропорциональна диаметру гранул и степени их набухания и обратно пропорциональна размеру молекул вещества, составляющего данную фракцию. Примером может служить следующее исследование скорости диффузии белков из водного раствора в набухший гидрофильный гель из агара в зависимости от молекулярного веса фракции I ] [c.31]

Разделение путем гель-фильтрации на колонках с агаром или сефадек-сом [47] дает наилучпше результаты, если величина пор геля выбрана так, что гликопротеин движется со скоростью, средней между скоростью материала, совершенно не проникающего в гель, и скоростью материала, легко диффундирующего в гель. Ионообменная целлюлоза дает наилучшее разделение при медленно изменяющемся градиенте pH и (или) ионной силы [48, 49]. В обоих случаях важно удостовериться, что практически весь нанесенный на колонку материал вышел с элюатом. Нужно тщательно подобрать условия, чтобы быть уверенным, что pH, ионная сила и размеры колонки являются нодходящилш, В лаборатории автора для анализа образцов, содержащих 0,5—50 мг материала, используют колонки размером 75 X 2,5 см, элюат из которых собирают фракциями объемом 3 мл. [c.50]

Гель-хроматографию (гель-фильтрацию) также можно отнести к колоночной хроматографии, однако область ее применения несколько специфична [22—24]. Неподвижной фазой в стеклянной колонке служит набухшее веп1,ество со структурой геля (декстран, агар-агар, полиакриламид, полистирол и т. д.) предпочтительно с поперечносшитой полимерной структурой, вследствие этого обладающее ограниченным набуханием. Растворителем для подвижной фазы служит то же самое вещество, в котором происходит набухание геля, главным образом вода или смесь воды и спирта. Пустоты между шариками геля заполнены раствором. Во время хроматографирования растворенное вещество распределяется между гелем и жидкостью, и этот процесс в основном зависит от размера частиц растворенного вещества. В идеальном случае распределение небольших ионов и молекул между двумя фазами проходит совершенно одинаково, в то время как большие молекулы ограниченно проникают в гелевую фазу. Согласно экспериментальным данным, связь молекулярной массой химически сходных веп1,еств и коэффициентом распределения подчиняется уравнению [c.285]

Сальватор и др. [117] сделали критический обзор методов очистки тиреоглобулина и предложили улучшенные методы получения практически гомогенного тиреоглобулина с выходом 60—70%. Эти авторы рекомендуют одноэтапный процесс очистки с использованием или фильтрации на геле (агара или декстрана) или ультрацентрифугирования в градиенте плотности. Первый метод целесообразно использовать для получения больших количеств белка. [c.230]

Физические и химические свойства агарозы. Агар, т. е, агар-агар, согласно Араки [168, 169], состоит из двух компонентов агаропектина и агарозы. Агаропектин — это полисахарид, содержащий 6% сульфатных групп, виноградную и глюкуроновую кислоты. Агаропектин образует гель при концентрации 1,1%, Содержащиеся сульфатные группы в агаропектине придают агару ионообменные свойства. Поэтому, чтобы исключить нежелательные побочные эффекты при гелевой фильтрации, агаропектин должен быть [c.141]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология