Иммуноанализ

Существует несколько версий проведения иммуноанализа. Наиболее очевидным является применение прямого количественного иммуноанализа, при котором анализируемое вещество должно практически полностью перейти в комплекс. [c.257]

Чрезвычайно чувствительный и избирательный иммуноанализ используется при определении концентраций молекул, к которым могут быть получены антитела. Иммобилизация исследуемого вещества или антитела приводит к значительному упрощению иммуноанализа (радиоиммуноанализ, ферментативный иммуноанализ и метод флуоресцентных антител). [c.380]

Маттиассон с сотрудниками предложили новый путь разделения компонентов при проведении иммуноанализа, не сопровождающийся изменением агрегатного состояния системы. Суть метода [c.112]

Иммуноглобулины из-за своей поразительной специфичности стали исключительно важным инструментом биохимического анализа. Методы, основанные на образовании комплексов антител с антигенами или гаптенами, называют иммуноанализом. Иммуноанализ используется либо для определения определенных антигенов с помощью специфических к этим антигенам антител, либо, наоборот, для детекции антител определенной специфичности с помощью соответствующих антигенов. И та, и другая задача имеет широкий спектр применений в фундаментальных биохимических исследованиях, в биотехнологии, в медицинской практике и для оценки состояния окружающей среды. [c.256]

Чрезвычайно широкий спектр применений имеет иммуноанализ для определения как самого факта присутствия, так и измерения количества антигенов, в том числе гаптенов, т.е. низкомолекулярных соединений, к которым можно получить антитела, как правило, путем иммунизации животных конъюгатом гаптена с высокомолекулярным носителем, способным вызывать иммунный ответ. Иммуноанализ нашел широкое применение для анализа содержания различных гормонов, что имеет огромное значение для оценки состояния эндокринной системы человека и животных. Важное значение для оценки состояния окружающей среды, в первую очередь качества питьевой воды и пищевых продуктов, приобретает иммуноанализ содержания пестицидов. В связи с интенсивным развитием гибри-домной техники для анализа определенных антигенов всё более широкое применение находят моноклональные антитела. [c.257]

Метод гомогенного ИФА без использования твердой фазы основан на различии каталитических свойств ферментной метки в свободном виде и в иммунном комплексе. В настоящее время тер >ган гомогенный иммуноанализ применяют к любой системе иммуноанализа, в которой специфическая реакция взаимодействия антигена с антителом и регистрация глубины ее протекания осуществляются в гомогенном растворе. [c.115]

Рассмотренные выше методы гетерогенного иммуноанализа основаны на использовании ковалентных конъюгатов фермента с антителами или антигенами. В настоящее время этот [c.102]

Полученные результаты сравнивают с калибровочной кривой и по ней определяют концентрацию исследуемого лиганда. В зависимости от типа используемых центров связывания конкурентные методы анализа могут быть подразделены на отдельные виды иммуноанализ (центры связывания — антитела), рецепторный анализ (центры связывания — растворимые и мембранные рецепторы), [c.258]

В последние годы интенсивное развитие получили методы люминесцентного иммуноанализа (ЛИА), основанные на использовании в качестве меток антигенов и антител компонентов реакций хеми- и биолюминесценции (в том числе ферментативных), протекающих с излучением света. Интенсивность испускаемого света может быть зарегистрирована с высокой сте- [c.123]

Высокая специфичность взаимодействий антиген — антитело легла в основу иммуноанализа — полуколичественного метода определения содержания веществ, присутствующих в очень низких концентрациях. Из мно- [c.487]

Все указанные достоинства люминесцентных систем позволили рассматривать их как эффективную систему детекции в иммунохимическом анализе. Соединение люминесцентного анализа с методами иммуноферментного анализа обеспечило быстрое развитие нового направления — люминесцентного иммуноанализа (ЛИА). [c.125]

Ферменты как метки в иммуноанализе [c.55]

Анализ имеющейся литературы по данному направлению по казывает, что подавляющее большинство представителей этого класса соединений обладают р-адреноблокирующей активностью, и они предложены для лечения гипертонии, головной боли, сердеч ной аритмии, стенокардии, состояния страха, системы кровообра щения, глаукомы и т, д. [325-336]. Некоторые амины пропандио ла-1,2 обладают противоаллергическим действием [337], противо воспалительной и антигельминтной активностью [338]. Ряд анало гичных соединений нашел применение в иммуноанализе [339] или в качестве бактерицидных средств [340]. [c.80]

В последние годы распространение получают электрохимические способы определения активности ферментов, используемых в качестве меток в иммуноанализе. Такие датчики позволяют проводить определение скорости ферментативных реакций в мутных средах и удобны для создания проточных иммуноферментных ячеек. [c.61]

В последние годы разработаны новые варианты иммуноанализа, используемые при массовых обследованиях населения для установления факта злоупотребления наркотическими препаратами. В основе этих методов лежит принцип иммунохроматографии. Все реагенты, необходимые, адя проведения анализа, нанесены в сухом виде на специальную полоску -стрип, с помощью которой при контакте с исследуемой пробой можно сразу на месте в считанные минуты увидеть результат определения. Вот почему именно эти способы анализа наиболее удобно использовать для экспресс-диагностики при скрининговых обследованиях населения. Иммуноанализ на полосках отличается простотой исполнения, не требует дорогостоящего оборудования, специально обученного персонала, время анализа составляет 5-8 минут, позволяет без какой-либо обработки анализируемого образца получать предварительные результаты, свидетел1.ствую-щие о наличии или отсутствии наркотического препарата в биологической жидкости человека. [c.199]

Величина этого параметра определяет возможность применения тех или других антител. Иммуноанализ и гистохимические методы требуют антител с высоким сродством (/Ссв=Ю-э—чтобы комплексы антигена с антителами были очень прочными С другой стороны, имму-ноаффинная очистка лучше осуществляется с низкоаффинными антителами Ксв=10- —10- ), поскольку в этих условиях адсорбция и освобождение антитела проходят при относительно мягких условиях без повреждения антигена и антител и колонка может использоваться повторно. Анализ взаимодействия антител с антигеном проводят по методу Скэтчарда (см. с. 343) с использованием радиоиммунного анализа. [c.324]

Следует заметить, что иммуноанализ с регистрацией аналитического сигнала амперометрическим методом предложен сравнительно недавно. Наиболее многообещающие результаты достигнуты в тех случаях, когда датчики разрабатывались с учетом специфических требований электрохимического детектирования, а не приспосабливались к существующим методикам. В частности, большие надежды возлагаются на амперометрические зонды для диагностики генетических заболеваний (ДНК-зонды). Разработана конструкция датчика, состоящего из стеклоуглеродного электрода, поверхность которого модифицирована ковалентно пришитой односпиральной ДНК. После ее гибридизации с ДНК-мишенью регистрируют концентрацию дипиридильного комплекса Со(Ш), который взаимодействует с двойной спиралью ДНК. При генетических нарушениях односпиральная ДНК не способна гибридизоваться с ДНК, взятой у больного человека. [c.508]

Иммуноанализ проводят следующим образом. Полистирольные пробирки (80X11 мм) покрываются антителами при обработке 1 мл раствора антител. Растворы антител разбавляют ОД М N a-карбонатного буфера (pH 9,8) или фосфатным (солевым) буфером. Пробирки с этими растворами оставляют на 3 ч при 37 °С для хранения раствор оставляют в пробирках на холоду. Перед определением необходимое число пробирок промывают 0,9%-ным хлоридом натрия, содержащим 0,05% твина 20. В каждую пробирку помещают 0,5 мл одного из следующих растворов 1) стандартный раствор иммуноглобулина G, 2) неизвестный образец, 3) буферный раствор. После этого добавляют 0,1 мл разбавленного конъюгата щелочной фосфатазы и иммуноглобулина G (приготовленного с помощью сщивапия глутаровым альдегидом). Для разбавления используют фосфатный (солевой) буферный раствор, содержащий 1% сывороточного альбумина человека и 0,02% азида натрия. Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) на роторной мешалке так, чтобы поверхность, покрытая антителами, покрывалась 0,6 мл раствора, находящегося в каждой пробирке. Затем пробирки промывают три раза раствором Na l-твин. Количество фермента, присоединенного к иммуноглобулину G, связанному стенками пробирок, покрытых антителами, определяют, добавляя 1 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера (pH 9,8), содержащего 1 мг/мл п-нитрофенилфосфата и 1 ммоль/л хлорида. магния. Через 30 мин реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М ХаОН. Измеряют оптическую плотность при 400 нм и строят стандартный график зави-си.мости ферментативной активности (изменение оптической плотности в единицу времени) индивидуальных образцов от содержания в них иммуноглобулина G. [c.382]

Как и в иммуноанализе, в гибридизационном анализе в настоящее время интенсивно развиваются подходы к нерадиохимической детекции, в первую очередь на основе использования ферментов. С этой целью можно либо использовать зонды, содержащие ковалентно присоединенный фермент, либо ввести в зонд какие-либо группы, способные взаимодействовать с вспомогательным белком, конъюгированным с ферментом. [c.261]

Классический иммуноанализ, описанный Ялоу и Берсоном [1299], основан на способности немеченного антигена конкурировать с антигеном, меченным радиоактивным изотопом, при сорбции на связывающих центрах антитела, число которых ограниченно. [c.380]

Например, два лиганда Lj и La реагируют с центром связывания Qi, а с центром связывания Q2 реагирует только лиганд Li, в этом случае кривые разведения не будут параллельными. Поэтому при наличии нескольких центров связывания данные кривых разведения более информативны и достоверны (Ekins, Newman, 1970) и иммуноанализ, в котором обычно присутствует несколько типов центров связывания, дает более надежные результаты по сравнению с методами, основанньгми на одном типе центров связывания рецепторными, на основе специфических связывающих белков. [c.270]

Процесс переноса электрофоретически разделенных белков на иитроцеллюлозную подложку известен под названием блот-тинг [49]. Методы обнаружения основаны на применении амидочерного, индийских чернил и окрашивании комплексом серебра. Специфический иммуноанализ реактивных антигенов на нитроцеллюлозе впервые описан в 1979 г. [368] (см. также разд. 8.20.3). [c.311]

В 1972 г. Рубенштейн с сотр. (К. Е. Rubenstein et al., 1972) разработали новый подход, заключающийся, в проведении всего анализа без использования твердой фазы. Метод получил название гомогенного ИФА и был основан на учете различий каталитических свойств ферментной метки в свободном виде и в имму-нохимическом комплексе. В дальнейшем термин гомогенный иммуноанализ стал применим к любой системе иммуноанализа, в которой специфическая реакция взаимодействия антигена с антителом и определение глубины ее протекания осуществляются в гомогенном растворе. [c.7]

Определение констант скоростей комплексообразования с использованием меченых реагентов. Этот метод, нашел большое применение в связи с развитием высокочувствительных методов иммуноанализа, основанных на использовании меченых реагентов радиоим-мунологического, иммуноферментного и других -методов. Кинетические закономерности простейшей схемы (3.38) взаимодействия антиген — антитело (моноклональные антитела — одновалентный антиген) описывает система дифференциальных уравнений [c.52]

Отметим, что эти дв кофермента нашли также самостоятельное использование в качестве меток в иммуноанализе (иммуноко-факторный анализ). [c.57]

При крайне низких концентрациях компонентов образование простого бинарного комплекса антиген-антитело не может быть за регистрировано ни визуально, ни простыми инструментальным методами, что вызывает необходимость усложнения аналитическо системы. Одним из путей визуализации образования комплекс является использование меченых соединений, в которых метка мо ет легко детектироваться в концентрациях, сопоставимых с опре деляемой концентрацией анализируемого соединения. Как правило от типа метки зависит название анализа — радиоиммунологически анализ, флуоресцентный иммуноанализ, иммунокофакторный ана ЛИЗ, иммуноферментный анализ и т. д. [c.78]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология