Антитела определение

Наиболее простым и чувствительным способом выявления антител, способных одновременно связываться с антигеном, является тест на аддитивность связывания. Предварительная очистка и введение метки в моноклональные тела в этом случае не нужны. В основе метода лежит оцеНка числа антигенных центров, одновременно доступных для пары антител. Определение осуществляется методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. Основным условием при этом является полное насыщение антигена обоими типами антител. Поэтому на первой стадии Эксперимента необходимо получить кривые насыщения антигена аСцитиой или культуральной жидкостью, содержащей анализируемые антитела, и затем определить максимальную оптическую плотность в иммуноферментном тесте, достигаемую при насыщении. [c.174]

А. взаимодействуют с рецепторами лимфоцитов и с антителами, определенными участками своей молекулы, т. наз. антигенными детерминантами, к-рыми собственно и определяется специфичность А. Впервые это было показано К. Ландштейнером, использовавшим в кач-ве А. белки с присоединенными к ним хим. группировками (т. наз. гаптенами). Животное в ответ на введение такого антигена образует антитела, специфичные не только к белку-носителю, но и к гаптену, к-рый является, т. обр., одной из антигенных детерминант использованного сложного А. [c.174]

Иммуноглобулины из-за своей поразительной специфичности стали исключительно важным инструментом биохимического анализа. Методы, основанные на образовании комплексов антител с антигенами или гаптенами, называют иммуноанализом. Иммуноанализ используется либо для определения определенных антигенов с помощью специфических к этим антигенам антител, либо, наоборот, для детекции антител определенной специфичности с помощью соответствующих антигенов. И та, и другая задача имеет широкий спектр применений в фундаментальных биохимических исследованиях, в биотехнологии, в медицинской практике и для оценки состояния окружающей среды. [c.256]

Изоэлектрическая фокусировка Белки, пептиды, гликопротеины, моноклональные антитела определение изоэлектрической точки [c.364]

При анализе содержания в образце антител определенной специфичности можно использовать так называемый белок А из стафилококка, который обладает специфическим сродством к константной части антител в комплексе с их антигенами или гаптенами. Образование комплекса антиген — антитело регистрируется после удаления избытка антитела по взаимодействию конъюгата белка А с детектируемой меткой, например пероксидазой. [c.258]

Один иэ центральных вопросов иммунологии — каким образом организм включает биосинтез антител определенной специфичности, комплементарных введенному антигену,— был решен Ф. Бернетом. разработавшим так называемую теорию клональной селекции. Согласно этой теории, существует множество клонов лимфоцитов, каждый из которых несет на своей поверхности рецептор уникальной специфичности. Попадающий в организм антиген связывается с комплементарным ему рецептором, в результате чего клеточный клон размножается и начинает секретировать антитела той специфичности, которую имел рецептор. [c.209]

Кроме процессов узнавания в системе антиген—антитело определенный порядок чередования положительно и отри- [c.52]

Количество связавшихся антител, определенное с 1-мечены-ми антителами, должно составлять 1 мкг/мл геля. [c.257]

Специфическая очистка антител. Антитела могут быть извлечены из смеси других белков только с помощью антигена. При этом антитело определенной специфичности может быть отделено также от других по специфичности антител с теми же физико-химическими свойствами. Процедура состоит из двух частей получения комплекса антиген-антитело и его диссоциации с последующим разделением антигена и антитела. Рассмотрим основные методические приемы, используемые для очистки антител. [c.241]

Сыворотку, содержащую антитела определенной специфичности, часто называют антисывороткой, подчеркивая- этим, что речь идет о сыворотке крови животного, успевшего выработать иммунный ответ на введение в его организм определенного антигена. Иногда в наименование антисыворотки, помимо вида иммунизированного животного, включают еще и название стимулировавшего эту антисыворотку антигена, а также указание на то, какой организм служил источником антигенов. Наименование получается довольно громоздким, но зато несет в себе полную инфор ацию, исключающую недоразумения. [c.84]

Необходимость быстрого включения массированной выработки антител определенной специфичности в ответ на вторжение соответствующего антигена обусловила создание механизма узнавания чужеродных агентов (антигенов) с целью включения специфической трансформации В-лимфоцитов. Как уже указывалось, это узнавание тоже осуществляют иммуноглобулины, точнее их активные фрагменты (рецепторы), находящиеся на поверхности Т- и В-лимфоцитов. Они относятся к иному классу иммуноглобулинов — классу 1дМ. [c.90]

Клетки миеломы находят широкое применение для получения гибридом - линий клеток, производящих моноклональные антитела определенной специфичности. Поскольку эти клетки осуществляют эффективную секрецию рекомбинантных белков, они хорошо изучены в отношении экспрессии в них соответствующих рекомбинантных генов, введенных с помощью трансфекции. Кроме того, такие клетки способны расти в суспензионной культуре (без прикрепления к поверхности субстрата), что облегчает их культивирование при необходимости крупномасштабной наработки. [c.178]

Основное преимущество метода гибридом определяется возможностью получения моноклональных антител против неочищенных молекул, содержащихся в сложной смеси в качестве минорного компонента. Это преимущество обеспечивается реальностью выбора индивидуальных гибридом, образующих антитела определенного вида, из сложной смеси различных гибридных клеток, продуцирующих множество разных антител. Таким образом в принципе можно получить моноклональные антитела против любого белка, содержащегося в клетке. Каждый тип антител можно затем использовать в качестве специфического зонда как для локализации белков с помощью цитологических методов, так и для очистки белков. Получив белки в чистом виде, мы можем исследовать их структуру и функцию. К настоящему времени выделено не более 5% из 1000 или более различных белков, которые, судя по имеющимся данным, содержатся в типичной клетке млекопитающих. Использование моноклональных антител и технологии клонирования генов (см. ниже) снимает многие сложности в идентификации и определении новых белков и генов. Проблемой для исследователей остается определение их функций. [c.227]

Первые успехи в изучении строения иммуноглобулинов были связаны с изучением иммуноглобулинов, полученных от больных миеломой (см. 1.4). Как уже говорилось, у таких больных в результате присутствия одного злокачественно разросшегося клона В-лимфоцитов вырабатывается огромное количество индивидуального иммуноглобулина, который сравнительно леп о отделить от всех остальных. Дальнейшие успехи в получении индивидуальных антител связаны с достижениями клеточной биологии, позволившими осуществлять слияние клеток миеломы как носителей способности к неограниченному размножению с нормальными В-лимфоцитами как носителями программы для выработки антител определенной, задаваемой экспериментатором специфичности. Получающиеся клетки, гибридоми сохраняют способность к неограниченному размножению и вырабатывают индивидуальные антитела. Так как в этом случае гибридомы происходят от одной исходной слитной клетки, то они представляют собой единый клон получающиеся из них антитела называют поэтому моноклональными антителами. [c.39]

Помимо нарушений гемопоэтической активности селезенки, развивающихся в результате описанных выше повреждений, при нейтронном облучении изменяется и ее иммунная функция, что проявляется в снижении продукции гуморальных антител при иммунизации мышей эритроцитами барана. При количественной оценке такого угнетения антителогенеза учитывалось образование антител определенным числом облученных клеток селезенки, которые вводили смертельно облученной мыши той же генетической линии, что и донор ОБЭ нейтронов деления по этому показателю составила 4—5 (Gottlieb, Gengozian, 1970). По данным, полученным с помощью другой методики, — по оценке выработки антител клетками селезенки в культуре, — ОБЭ нейтронов близкой энергии оказалась существенно люньше — 2.3+0.2. Однако и эта [c.96]

С другой стороны, антигенсвязывающий центр молекулы антитела определенной специфичности обладает способностью связывать антигены, отличные по структуре от основного. Можно представить себе, что в таком случае в связывании принимают участие как часть общих аминокислотных остатков в антигенсвязывающих центрах, так и отличающихся по своей локализации и природе. [c.34]

На первой стадии иммобилизованные антивидовые антитела связывают из раствора все антитела соответствующего вида. Наличие антител определенной специфичности в образовавшихся иммунохимических комплексах выявляют титрованием антигенсвязывающих центров конъюгатом соответствующего антигена с ферментом. Метод основан на выявлении из множества связавшихся с иммуносорбентом антител молекул только одной специфичности, поэтому возможность его эффективного применения снижается при способности меченого антигена к неспецифическому связыванию с иммобилизованными на носителе белками или адсорбировавшимися на них после первой инкубаций иммуноглобулинами. [c.92]

К гипервариабельным участкам также можно получить антитела. Совокупность гипервариабельных участков, характерных для антитела определенной специфичности, обозначают как идиотип, а направленные к ним антитела называют антиидиоти-пическими. Существуют прямые экспериментальные доказательства в пользу того, что антиидиотипические антитела способны распознавать гипервариабельные участки вариабельных районов иммуноглобулинов (С. Kohler et al., 1985 A. Я. Кульберг, 1986). [c.50]

Экспериментальные данные, свидететьствующие о существовании антирецепторов, и уже имеющиеся сведения об их биологической функции открывают новые перспективы для понимания взаимосвязей клетки (организма) с внешним миром в условиях нормы и патологии. Рассматривая проблему антиидиотипических антител, видный иммунолог Н. Ерне и его последователи сформулировали представление, согласно которому антиидиотипическое антитело определенной специфичности несет в своей структуре внутренний образ антигена. Однако до тех пор, пока за этим понятием стояли лишь иммунологические феномены (функция лишь одной системы организма — иммунной системы), речь практически шла о существовании у человека и высших животных внутреннего образа веществ, наделенных функцией антигенов. Антиген, как чужеродный, так и собственный для данного организма, как бы проникает в иммунную систему, которая имеет свою собственную внутреннюю жизнь . С обнаружением антирецепторов "(имитаторов лигандов), производимых клетками, которые не обладают свой- [c.95]

Для оценки идиотипической специфичности антител кролика использовали гетерологичные и гомологичные антисыворотки. Последние получали, вводя повторна кроликам-реципиентам очищенные антитела определенной специфичности от индлгвидуальных доноров. Подбирали доноров и реципиентов таким образом, чтобы они совпадали по основным аллотипам иммуног 7обулинов (последнее желательно, чтобы избежать процедуры адсорбции антисыворотки нормальными иммуноглобулинами донора). Показано, что антитела одной и той же специфичности, но от разных доноров различаются строением идиотипических детерминант. [c.88]

Существует несколько, хорошо зарекомендовавших себя методов выявления Рс-рецепторов. Антитела определенного класса можно использовать для сенсибилизации такого корпускулярного антпгена, как ксеногенные эритроциты. После смешивания избытка сенсибилизированных антителами эритроцитов с лимфоцитами образуются так называемые розетки лимфоциты, окруженные эритроцитами (рис. 50). Число лимфоцитов, образующих розетки, соответствует числу лимфоцитов с Рс-рецепторами к иммуноглобулинам того класса, которые использовали для сенсибилизации эритроцитов. Если пометить иммуноглобулины с помощью флуорохрома, то лимфоциты с Рс-рецепторами можно увидеть по краевому свече- [c.203]

Иммунизация животных эритроцитами барана позволяет лродемонстрировать в учебных целях кинетику и клеточные основы образования IgG и IgM, а также получить практические навыки в постановке реакций агглютинации, обратного гемолиза и титрования гемолизинов. Кроме того, использование эритроцитов, нагруженных антиэритроцитарными антителами определенного изоти па, аллотипа и т. д., лежит в основе реакций гемагглютинации для выявления антиглобулинов как одного из методов специфического тестирования и титрования антиглобулиновых антисывороток. [c.88]

Изотип хотя у кроликов и овец при иммунизации с применением ПАФ образуются антитела определенного изотипа (I G )> У других видов животных (крыс, мышей, морских свинок) ответ также может быть рестриктирован по подклассам IgG. Если антитела выявляются с помощью меченого антиглобулина, то необходимо определить их изотип, чтобы использовать аитиглобулин требуемой специфичности. [c.113]

Биотин и авидин являются нефлуоресцирующими молекулами, которые обладают высоким сродством друг к другу. Они легко присоединяются к антителам и многим флуорохромам. Чаще всего биотин конъюгируют с антителами, а авидин — с флуорохромами. Обычно клетки сначала инкубируют с био-тинилированными антителами, а затем с конъюгатом флуоро-хром-авидин (как это делают при непрямом способе детектирования). С помощью этого метода можно выявлять антитела по флуоресценции разного цвета в зависимости от используемого для конъюгации с авидином флуорохрома. Более важным, однако, является то, что система авидин — биотин часто позволяет решить проблему мечения антител определенными флуорохромами. Поскольку биотин относительно легко конъюгирует с антителами, а авидин — с большинством флуорохромов, даже в тех случаях, когда не удается непосредственно присоединить флуорохром к антителам, их можно выявлять непрямым способом. [c.334]

Определению аффинности антител, специфичных к одной и той же детерминанте, сильно препятствует их гетерогенность (см., например, Fazekas de St, Groth, 1979). Изучая гетерогенную популяцию антител, можно определить лишь их среднюю аффинность. Эта величина для разных аитисывороток против одного и того же антигена обычно варьирует, Однако все эти трудности резко уменьшаются, если есть возможность получить к данному специфическому антигену моиоклоиальиые антитела. Определение точных характеристик связывания представляет особый интерес тогда, когда антитело специфично по отношению к какому-то клеточному (точнее, поверхностному) антигену, поскольку в этом случае реакция может иметь важное функциональное значение. Кроме того, эги данные могут быть полезны для понимания химических реакций, происходящих на поверхности клеток. [c.12]

Другим способом получения индивидуальных антител определенной специфичности служит гибридомная технология — создание иммортали-зованной (бессмертной) линии клеток, продуцирующих антитела только одной специфичности, Т. е. моноклональные (рис. 29.16). В такой культуре можно поддерживать антителообразование неопределенно долгое время. Моноклональные антитела несравнимо лучше соответствуют целям иммуноанализа, чем гетерогенные сыворотки, получаемые от иммунных животных, и поэтому нашли широкое применение в различных областях биологии в качестве высокоспецифичных зондов. [c.537]

Залогом успеха в этом случае является однородность иммуногена. Этому требованию удовлетворяют бактериальные стенки, несущие на своей поверхности монотонно повторяющиеся цепи полисахаридов как известно, они могут вызывать образование антител определенного клонотипа. Доминирование какого-либо одного клона при иммунизации совершенно разными эпитопами на одинаковых носителях отражает иерархию среди иммуноцитов разной специфичности и представляет собой иммунорегулятор-ный феномен (Braun et al, 1976). [c.355]

Вариант a-ELISA был разработан нами в ходе решения проблем, возникших при попытках использования традиционного метода для количественной регистрации антител определенного субизотипа (Sloan, 1975). В первую очередь мы стреми- [c.210]

Патогенез рассматриваемых хронических паразитарных заболеваний связан с иммунопатологией. Так, симптомы болезни Чагаса, вызываемой Trypanosoma ruzi, большей частью обусловлены функцией иммунной системы, а именно аутоимунными реакциями. Среди бактериальных инфекций аналогичным примером служит проказа, при которой ряд симптомов вызван, предположительно, чрезмерной реактивностью Тх1-или Тх2-клеток. Вакцина же, стимулируя специфический иммунитет в организме, не освобожденном от возбудителя, способна усилить иммунопатологию. Другой пример функции иммунной системы с отрицательным эффектом наблюдается в патогенезе лихорадки денге, при которой антитела определенного изотипа усиливают инфекцию, позволяя вирусам проникать в клетки посредством взаимодействия с их F -рецепторами. Появление антител, потенцирующих инфекцию, обнаружено также на экспериментальной модели при изучении иммуногенности малярийной вакцины, блокирующей передачу инфекции . [c.371]

Иммуноанализ антител. 1. Антиген в солевом растворе инкубируют на пластиковой подложке или в пробирках, в результате чего небольшое его количество адсорбируется на поверхности пластика. 2. Свободный антиген удаляют путем отмывания. (Подложку затем можно обработать избытком постороннего белка, чтобы предотвратить последующее неспецифическое связывание белков.) 3. Добавляют исследуемые антитела, которые связываются с антигеном. 4. Несвя-завшиеся белки удаляют отмыванием. 5. Антитела определяют при помощи меченого лиганда. Лигандом может служить, например, стафилококковый белок А, который связывается с F -областью IgG чаще используют другие антитела, специфичные по отношению к исследуемым антителам. Применяя лиганд, который связывается с антителами определенного класса или подкласса, можно дифференцировать изотипы антител. 6. Несвязанные антитела удаляют отмыванием. 7. Определяют связавшуюся метку. Типичная кривая титрования представлена внизу. С повышением количества антител интенсивность сигнала возрастает линейно от фонового значения до уровня плато. Титр антител можно определить правильно лишь в линейной области. Уровень плато, как правило, в 20-100 раз выше фонового. Чувствительность метода обычно составляет приблизительно 1-50 нг специфических антител в 1 мл. Специфичность метода можно проверить, добавив свободный тест-антиген в повышающихся концентрациях к исследуемым антителам на зтапе (3). Антиген связывается с антителами и блокирует их соединение с антигеном, фиксированным на подложке. Добавление возрастающих количеств свободного антигена снижает интенсивность сигнала. [c.534]

Проблему гетерогенности антисыворотки удалось преодолеть в 1976 г. после разработки нового метода, который произвел революцию в исследовании внутриклеточных процессов с помощью антител. Этот метод включает клонирование В-лимфоцитов, секретирующих только один определенный тип антител, что обеспечивает получение однородных антител в большом количестве. Время жизни В-лимф оцитов в культуре обычно весьма ограничено. Поэтому от иммунизированных мышей получают В-лимфоциты, секретирующие отдельные виды антител, и осуществляют их слияние с бессмертными клетками из опухоли В-лимфоцитарного происхождения. В результате образуется гетерогенная смесь гибридных клеток, из которых отбирают гибриды, способные размножаться в культуре и синтезировать антитела определенного вида. Эти так называемые гибридомы клонируют по отдельности и получают клоны, каждый из которых является постоянным источником моноклональных антител одного типа (рис. 4-59). [c.226]

Поскольку объединение генов при транспозиции имеет случайный характер, в разных лимфоцитах образуются разные сочетания генов У, В, J и С в полном гене иммуноглобулиновой цепи, т. е. происходит дифференциация лимфоцитов и образование клонов, различающихся генотипически. Соответственно, они различаются и фенотипически — по способности синтезировать антитела определенной специфичности. [c.479]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология