Получение гибридов

Таким образом, перспективы развития биотехнологии на основе растительных клеток представляются весьма многообещающими. Будет налажено производство новых лекарственных препаратов, подсластителей, средств защиты растений, веществ для-косметической и парфюмерной промышленности. Возможности этой быстро развивающейся технологии будут еще более расширены в результате дальнейшей разработки способов получения гибридов путем слияния протопластов. [c.174]

Гибридизация (скрещивание)—получение гибридов (помесей) половым путем. Метод половой гибридизации предложил Косиков. Известны случаи получения гибридов скрещиванием спор при помощи микроманипулятора. Гибриды обладают расшатанной наследственностью, которая делает микроорганизмы более пластичными. Поэтому гибриды легче поддаются направленному воспитанию. Но гибридизация в микробиологии ограничена, так как половой процесс встречается только у некоторых микроорганизмов. У большинства дрожжей и дрожжеподобных грибков, используемых в гидролизной промышленности, половой процесс размножения отсутствует и к ним метод половой гибридизации не применим. [c.507]

К сожалению, после слияния полученные гибриды часто делятся на исходные клетки. Однако в будущем такой подход обещает быть весьма перспективным в связи с простотой введения в клетку нового генетического материала [1]. [c.102]

Т аблица 60. Линии некоторых миеломных клеток, рекомендованные для получения гибридом [c.572]

Мендель работал главным образом с различными сортами гороха. При разведении эти сорта оказывались устойчивыми, но различались по отдельным хорошо заметным признакам. Некоторые сорта имели желтые семена, а другие — зеленые семена могли быть гладкими или морщинистыми цветки — белыми или окрашенными бобы — желтыми или зелеными и т. д. Менделю удалось подобрать такие пары контрастирующих признаков, которые, как это было установлено позже, определяются аллельными генами. Изучая результаты скрещиваний, он обнаружил, что гибриды по своему характеру не являются промежуточными между двумя родительскими формами, а в большинстве случаев соответствуют одной из них. На этом основании он ввел уже знакомые нам термины доминантный признак и рецессивный признак. От экспериментально полученных гибридов (поколение ) Мендель получил потомство уже путем самоопыления и обнаружил, что эти потомки (поколение Рг) никоим образом не являются одинаковыми и устойчивыми. Напротив, некоторые растения обладали доминантным признаком, другие—рецессивным. Мендель подсчитал число растений с доминантным и рецессивным признаком и установил, что в среднем растений второго поколения обладают доминантным признаком, а А — рецессивным. Когда он продолжил опыт и получил еще одно поколение (Рз), то оказалось, что растения Рг с рецессивным признаком дали потомство, в котором все растения несли этот рецессивный признак. Из растений Рг, несших доминантный признак, при дальнейшем разведении некоторые остались неизменными, тогда как другие дали такое же расщепление, как и растения Р), т. е. среди их потомства было особей с доминантным признаком и Л — с рецессивным. Мендель обнаружил, что в среднем 7з растений Рг с доминантным признаком дали неизменное потомство, а /з растений расщепились в отношении 3 1. [c.48]

В отношении всех остальных межвидовых гибридов, в какой-то степени стерильных из-за различий между исходными видами по генному составу, а также по числу или структуре хромосом, есть основания полагать, что эта стерильность развивалась постепенно. Вначале, вероятно, где-нибудь на границе ареала небольшая часть популяции оказалась изолированной от основной массы вида. Накопление мутаций у этой изолированной популяции постепенно несколько изменило ее генотипическую конституцию последнее могло бы произойти также вследствие того, что не все гены первоначальной популяции имелись у ее изолированной части. Постепенно путем рекомбинаций новая генотипическая конституция совершенствовалась. Если позже эта отделившаяся популяция вступала в контакт с первоначальной, то в зоне контакта возникали гибриды. Ввиду происшедшей генетической дифференциации эти гибриды были частично стерильными. Постепенно стерильность могла возрасти настолько, что в конце концов гибриды становились совершенно бесплодными. Возможно, что следующей ступенью этого процесса явилась бы полная невозможность получения гибридов. [c.307]

Такой полимер можно сравнить с плодовым деревом, к которому привит другой сорт плодового дерева. В результате такой прививки получают плоды, сочетающие в себе наиболее ценные качества обоих сортов. В привитом сополимере один полимер привит к стволу другого полимера. Полученный гибрид обладает свойствами исходных веществ. Таким образом удается получать полимеры, сочетающие, [c.230]

В целях получения гибридом используют разные линии миеломных клеток (таблица 60), из которой видно, что более приемлемыми линиями являются 8226AR/NI Р4-1 и Sp 2/0, не продуцирующие Ig. Следует иметь в виду и тот факт, что гибридомы легче получаются при использовании клеток от одного вида животного (гомокариотические гибриды). Межвидовые гибридизации (гетерокариотические гибриды) всегда мало удачны, так как один из [c.571]

Такой полимер можно сравнить с плодовым деревом, к которому привит другой сорт плодового дерева. В результате подобной прививки получают плоды, сочетающие в себе наиболее ценные качества обоих сортов. В привитом сополимере один полимер привит к стволу другого полимера. Полученный гибрид обладает свойствами исходных веществ. Таким образом удается получать полимеры, сочетающие, например, высокие электроизоляционные свойства с огнестойкостью и устойчивостью к бензину и маслам. [c.227]

I. ПОЛУЧЕНИЕ ГИБРИДОВ /1. Гибридизация а растворе [c.148]

Создание восстановителей фертильности на стерильной основе. Работу по этой схеме начинают с получения простого гибрида от скрещивания восстановителя фертильности В со стерильной формой С. Затем фертильные растения полученного гибрида опыляют пыльцой линии Л — 9 ( В) А. [c.24]

В ряде случаев для определения частоты соматического мутагенеза необходимо исследовать огромное число клеток, экспрессирующих один и тот же V-ren. Практический подход для идентификации такой группы состоит в характеристике иммуноглобулинов, получаемых от серии клеточных линий, осуществляющих иммунный ответ на одинаковый антиген. (Используемые для этой цели антигены представляют собой маленькие молекулы, имеющие дискретную структуру, которая, по-видимому, обусловливает стойкий иммунный ответ. Они отличаются от больших белков, отдельные части которых могут стимулировать образование разных антител. Эти маленькие молекулы получили название гаптенов. Для того чтобы придать им свойства антигена, их соединяют с инертным белковым носителем. Иммунизируя таким антигеном мышь, получают реактивные лимфоциты, которые соединяют путем слияния с миеломными клетками для получения гибридом. Такие гибридные клетки продолжают независимый синтез желаемого антитела.) [c.515]

Антитела составляют фракцию гамма-глобулинов сыворотки крови, называемую еще иммуноглобулинами. Известно 5 типов иммуноглобулинов. Получение чистых антител из иммуноглобулиновой фракции до недавнего времени было труднодоступно. Однако в 1975 г. Мнльштейн и Коллер сделали важное открытие, установив, что В-клетки, продуцирующие только один вид антител, могут сливаться с клетками миеломы. В то время как В-клетки не могут быть выращены в виде культуры, клетки миеломы в культуре растут и размножаются. Среди образующихся в результате слияния гибридных клеток, называемых гибридомами, обнаруживаются клетки, сохранившие способность образовывать те же самые антитела, что и В-клетки, использовавшиеся для получения гибридом. В то же время эти гибрид омы сохраняют бессмертный характер миеломных клеток. Таким образом, было осуществлено клонирование гибридомных клеток, полученных на основе В-клеток, способных синтезировать определенный вид антител, что дало возможность получать неограниченное количество таких антител. [c.315]

Большинство антигенов вызывает в организме образование целого набора антител, но каждый отдельно взятый лимфоцит продуцирует лишь одно из них. Миеломы — это злокачественные новообразования иммунной системы они развиваются в результате неконтролируемой пролиферации одной линии лимфоцитов. При этом в больших количествах синтезируется один тип белков-антител. Иными словами, миеломы являются природными продуцентами моноклональных антител. По методу Миль-штейна проводят слияние нормальных (неопухолевых) лимфоцитов и клеток миеломы. Вначале полученные гибриды синтезируют смесь антител, включающую два типа антител родительских клеток, а также гибридные их формы, образующиеся путем ассоциации тяжелых и легких цепей антител двух родительских форм. Впоследств ии в результате элиминации хромосом образуются клетки, способные к синтезу антител лишь одного типа. Это могут быть либо антитела, закодированные в геноме лимфоцита, либо антитела, характерные для клеток миеломы. Скрининг и обнаружение клона, синтезирующего искомое антитело, ведут при помощи биохимических и иммунохими-ческих методов. Схема этого метода дана на рис. 7.5. [c.313]

Синтезировано большое число других подобных производных пиридазона [474—481], но практическое применение получили лишь немногие. Отмечено, что некоторые 1-арил-1,4-дигид-ро-4-гидроксипиридазины проявляют гаметоцидное действие и могут стерилизовать мужскую пыльцу хлебных злаков, что необходимо для получения гибридов [482]. [c.583]

Весьма эффективным методом уточнения топографии мембранных белков, прежде всего точной локализации внемембранных участков, является использование моноклональных антител. Для получения гибридом использовались фрагменты бактериородопсина, полученные путем его расщепления протеолитическими ферментами. Наиболее ценными в этом случае оказались синтетические фрагменты коррелируя величину синтетического пептида и эффективность связывания соответствующего антитела, можно с высокой степенью достоверности зондировать выступающие из мембраны полипептидные петли. Ниже показана локализация различных антигенных детерминант молекулы бaктepиopoдoпtинa в пурпурной мембране (Г. Корана, И. Г. Абдулаев). [c.609]

Потенциальная контаминация названных выше продуктов возможна из рааллчных источников от лиц, чьи клетки используются в биотехнологических процессах, от миеломных клеток, применяемых для получения гибридов, из питательных сред для культивирования клеток млекопитающих, из реагентов, используемых для очистки белковых продуктов, например, моноклональные антитела, наконец, несоблюдение требований GMP [c.256]

Ае Иорз здиаггоза (т. е. форм, имеющих соответственно 28 и 14 хромосом) был сначала получен гибрид с 21 хромосомой, [c.337]

Получение гибридов между РНК и денатурированной (одноцепочечной) ДНК из различных источников широко иснользуется как тест на комплемеитарпостъ между этими двумя классами пуклеиновых кислот. [c.147]

Двумерный электрофорез в полиакриламидном геле может быть также использован для локализации участков ДНК, отвечающих 5 - и З -концевым последовательностям и точкам внут-)имолекулярного переплетения ядерной или вирусной РНК 116]. С этой целью продукт гибридизации РНК и ДНК обрабатывают эндонуклеазой S1, специфичной по отношению к одноцепочечным нуклеиновым кислотам, и полученные гибриды комплементарных фрагментов ДНК и РНК разделяют в соответствии с их размерами с помощью гель-электрофореза. Затем в денатурирующих условиях проводят электрофорез во втором направлении, с тем чтобы определить размер образующихся одноцепочечных фрагментов ДНК. Специфические последовательности обнаруживают с помощью блоттинга по Саузерну и последующей молекулярной гибридизации [116]. Одноцепочечные фрагменты ДНК можно легко разделить с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в щелочной среде. Денатурированные образцы подвергают гель-электрофорезу в буфере, содержащем 30 мМ NaOH и 2 мМ ЭДТА [117]. По своему поведению в этих условиях электрофореза такие фрагменты похожи на одноцепочечные фрагменты РНК (разд. 10.5.2). [c.187]

Следует помнить, что р2 (второе поколение от самоопыления гибридного растения в Р ) соответствует 1, Рз = Ь, Ра = 1зя т. д. Обычно символом 1п обозначают инбредную линию, где п — число поколений самоопыления. Поскольку популяции самоопыляющихся растений состоят из гомозиготных растений, то линия у самоопылителей — это потомство одного растения, размножающееся далее изолированно от потомств других растений. Ин-бредные линии, используемые селекционерами для получения гибридов, должны обладать высокой степенью гомозиготности, то есть в результате длительного инбридинга большинство генов у таких линий должны перейти в гомозиготное состояние. Видимого расщепления внутри обычно не наблюдается уже после [c.8]

Отбор гамет. Метод предложен Стадлером (1955) и основан на признании гипотезы сверхдоминирования. Пыльцой инбред-ной линии опыляют отдельные растения, выделенные из сорта. Последующее испытание полученных гибридов дает возможность оценить вклад женских гамет, так как мужские гаметы (пыльца линии) тождественны. [c.14]

Метод посредника состоит в том, чтобы преодолеть нескре-ш,иваемость двух видов с помощью третьего. Если виды Л и не скрещиваются между собой, то вид А скрещивают с близким видом С, а полученный гибрид — с видом В. В результате в гибриде могут быть совмещены хромосомы и признаки трех видов. [c.140]

Молекулы нативной и денатурированной ДНК связываются с гидроксиапатитом при низкой концентрации фосфата (0,01 — 0,03 М натрий-фосфатный буфер, pH 6—8). При 0,12—0,14 и 0,4—0,5 М концентрации указанного буфера элюируются соответственно одно- и двухцепочечные формы ДНК [101—104]. Присутствие других однозарядных анионов, по-видимому, не имеет значения, однако добавление в элюент мочевины и (или) детергентов, например додецилсульфата натрия, приводит к увеличению выхода высокомолекулярной ДНК. Концентрация ионов фосфата, при которой с колонки с гидроксиапатитом элюируются молекулы нативной или денатурированной ДНК, не зависит от температуры. Поэтому при фракционировании на таких колонках можно использовать как процессы денатурации ДНК (т. е. разделять комплементарные цепи ДНК, денатурированной непосредственно на колонке под действием температуры или денатурирующих агентов типа формамида), так и реассоциации ДНК (образования двойной спирали из отдельных цепей ДНК). Реассоциация главным образом зависит от концентрации комплементарных цепей и, следовательно, от частоты их повторов в рассматриваемой последовательности [105]. С помощью контролируемой реассоциации ДНК генома с оли-гонуклеотидными зондами (фрагментами РНК или ДНК) и последующего разделения полученных гибридов на колонках с гидроксиапатитом можно определить число повторяющихся или уникальных последовательностей этой ДНК [105]. [c.183]

С/аг ш —группа растений, произрастающих на западе США, в частности в Калифорнии. В течение последних 20 лет систематику этой группы усиленно изучали калифорнийский эволюционист Харлан Льюис (Harlan Lewis) и его ученики. В процессе своих исследований они проводили межвидовые скрещивания между большинством видов этого растения. Цитологический анализ полученных гибридов показал, что многие виды резко различаются по [c.299]

В совершенно ппом направлении развивается анализ хромосом человеческого организма. Ряд исследователей в разных странах разработал методику получения гибридов соматических (то есть не половых, а принадлежащих разным тканям) клеток совершенно различных существ, в том числе, например, клеток человека и клеток мыши или хомячка. В нашей стране эксперименты этого рода развернуты в лаборатории Н. Шапиро, в Институте атомной энергии имени Курчатова. [c.169]

Разработаны приемы освобождения растительных клеток от твердых клеточных оболочек для получения культуры изолированных протопластов, отграниченных от окружающей среды одной только плазмалеммой. Изолированные протопласты получают в результате комбинированного действия ряда ферментов (пектиназы и целлулазы), которые гидролизуют клеточные оболочки. В результате возникает возможность более детального изучения внутреннего строения клетки. Культивирование протопластов приводит в дальнейшем к ресинтезу клеточных стенок и образованию обычной культуры клеток, из которой затем можно вновь регенерировать целое растение. Изолированные протопласты представляют также большой научный и практический интерес, поскольку, изменяя соответствующим образом состав питательной среды, можно стимулировать их слияние друг с другом, осуществляя таким образом процесс так называемой соматической (неполовой) гибридизации растительных клеток. Культивируемые затем в определенных условиях гибридные протопласты могут дать начало новому растению с признаками, унаследованными от обоих родителей. Соматическая гибридизация может применяться во всех случаях, когда получение гибридов обычным (половым) путем невозможно из-за ряда физиологических или цитогенетических барьеров между растениями, например при отдаленной гибридизации. [c.10]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология