Иммунные сыворотки

Рис. 4.4. Реакция преципитации антиген-антитело Аг — раствор антигена Ат — антитела иммунной сыворотки или одного из препаратов IgG, содержащего антитела Б — буферный раствор.

Реакции взаимодействия антигенов и антител осуществляются за счет слабых нековалентных взаимодействий. Эти реакции, происходящие в очень ограниченном пространстве, являются результатом структурной комплементарности антигенной детерминанты и участка антитела, причем сила взаимодействий зависит от комплементарности участков. Большая или меньшая сила взаимодействия выражается через сродство антитела к антигенной детерминанте. Когда речь идет об антителах иммунной сыворотки и антигенном белке, из-за присутствия в сыворотке специфических антител нескольких антигенных детерминантов разные [c.93]

А. ПОЛУЧЕНИЕ ИММУННОЙ СЫВОРОТКИ [c.116]

Рис. 4.2. Схематическое изображение антигенов (Аг), антител (Ат), антител к иммунной сыворотке (ИС) и реакции между антигеном и антителом.

В практическом отношении антитела преимущественно применялись для решения проблем идентификации и количественного определения веществ. Здесь имеется в виду использование белков как природных маркеров некоторых сырьевых материалов с целью распознавания их в продуктах питания для контроля качества. С этой целью изготовлены специфические иммунные сыворотки этих белков. Так, например, методы преципитации в геле послужили для обнаружения в пшеничной муке примесей ячменной муки [76] или в муке из твердой пшеницы примесей муки из мягкой пшеницы [90, 91]. Они могут быть использованы также для проверки отсутствия клейковины в кормовых рационах [7]. В такой стране, как ФРГ, где законодательство разрешает использовать в производстве пива только солод из ячменя и хмель, исключая особенно зерно риса и кукурузы как более дешевые источники крахмала, для контроля поступающего в продажу пива применили метод иммунохимической идентификации [98]. Иммунохимический подход (метод преципитации и RIA) также использовали для контроля запрещаемых законом в некоторых странах добавок в пиво препаратов протеаз как средства стабилизации [32]. В этих двух последних случаях проблема распознавания сложна, поскольку изготовление пива предусматривает вспенивание сусла при перемешивании, пастеризацию при стерилизации, т. е. происходит в условиях денатурации белков. Задача распознавания денатурированных бел- [c.112]

Титр антител — наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще наблюдается реакция антител с антигеном. [c.307]

Большая или меньшая часть антител иммунной сыворотки может реагировать с другим белком, отличающимся от белка, использованного как иммуноген. В этом случае речь идет о перекрестной реакции (схематически изображенной на рисунке 4.2 Б). Эта реакция выявляет присутствие большего или меньшего числа идентичных либо очень похожих антигенных детерминантов у этих двух белков. Антитела, участвующие в перекрестной реакции, могут не иметь одинакового сродства к этим признанным сходным эпитопам. [c.95]

При иммунохимическом исследовании вирусов растений успешно использовались иммунизированные цыплята и яичный желток как источник антител, а не иммунная сыворотка. Этот метод позволяет в короткое время получать значительное количе--ство антител он облегчает очистку иммуноглобулинов IgG позволяет избежать кровопускание у животных [108]. [c.97]

Когда примеси, вызвавшие образование неспецифических антител, легче очистить, чем исследуемый антиген, то другой способ избавиться от неспецифических антител фракции IgG иммунной сыворотки состоит в иммобилизации на носителе этих очищенных примесей. Тогда первая элюированная фракция содержит все белки раствора IgG (включая и нужные антитела), за исключением неспецифических антител, если хроматография проводится в условиях ненасыщения. В этом случае отсутствует проблема десорбции. [c.109]

Иммунная сыворотка — на рисунке изображены антитела, специфичные к разным антигенным детерминантам, [c.94]

При этих методах используются две системы антиген — антитело с одной стороны, подлежащая изучению система антиген — антитело и, с другой — система красных кровяных телец барана и антиэритроцитарных антител барана. Метод состоит из двух этапов увеличивающееся количество антигена добавляют к одному и тому же количеству антисыворотки против этого антигена (ее предварительно освобождают от комплемента нагреванием до 56 °С), к которому прибавляют определенное количество комплемента морской свинки. Контролем является только иммунная сыворотка, антигены испытывают параллельно. В ходе этой реакции (24 ч при 4 °С) какая-то часть комплемента морской свинки свяжется с иммунными комплексами по мере завершения в каждом образце реакции антиген — антитело. Несвязанную часть комплемента количественно определяют на втором этапе [c.103]

Агглютинация остается видимой до некоторого разбавления антисыворотки, которое называется пределом разбавления иммунной сыворотки. [c.98]

Если раствор антигена (например, раствор белка) в адекватных пропорциях смешать с сывороткой, содержащей специфические антитела иммунной сывороткой), то в результате реакции образуется преципитат, образованный молекулами антигена и антител. Наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще происходит реакция преципитации с антигеном, присутствующим в постоянной концентрации, называют титром данной сыворотки. Титр отражает ее активность например, сыворотка с титром 1 25 ООО считается в пять раз активнее сыворотки, имеющей титр 1 5000. [c.16]

A. Антитела, специфичные к изучаемому антигену (обычно фракция иммуноглобулина G иммунной сыворотки), связываются на дне пробирок нлн в микрокюветах, встроенных в пластиковые планшеты. [c.107]

А. Иммуноэлектрофоретический анализ (ИЭА) [41], Антигены вначале разделяют путем электрофореза в агарозном геле, Верхняя часть рисунка демонстрирует классическое расположение ИЭА нижняя часть ИЭА называется тандемной стрелки показывают положение лунок, в которые заливают перед электрофорезом растворы антигенов. После электрофореза в геле параллельно направлению электрофоретической миграции прорезается канавка, которая заполняется иммунной сывороткой. Антитела и антигены диффундируют в гель, встречаются и образуют дуги преципитации, [c.102]

Образование преципитата зависит от ряда факторов. Наиболее существенными из них являются титр иммунной сыворотки, соотношение концентраций антигена и антител, а также видовая принадлежность иммунной сыворотки. [c.17]

Для приготовления полужидкого геля используют ряд веществ. Их наиболее важным свойством должна быть инертность по отношению к исследуемым белкам и иммунной сыворотке. Эти вещества не должны вступать с ними в какие-либо реакции. К таким веществам можно отнести агар, крахмал, желатину, пектин и т. д. В настоящее время наиболее широко применяется агар, который оказался наилучшей средой при повседневной постановке реакций иммунодиффузии. При нагревании агар легко растворяется в воде и растворах солей и образует плотный гель при комнатной температуре. Прозрачность агара позволяет ясно различать возникающие в геле линии преципитации и окрашивать их соответствующими красителями. [c.18]

Если по окончании электрофоретического разделения белков в агаровом геле навстречу им диффундирует специфическая иммунная сыворотка, то в местах встречи антигена и антител образуются дугообразные полосы преципитации, каждая из которых соответ- [c.20]

Ввиду поливалентности белковых антигенов, бивалентности антител и присутствия в иммунной сыворотке популяции антител, специфичных к разным антигенным детерминантам, реакция взаимодействия между антигеном и антителом создает комплекс, образование решетки которого зависит от соотношения количеств антигена и антител. На рисунке 4.2 Л показаны три экстремальные ситуации. Эта характерная особенность реакции антигена и антитела очень важна для принципов нескольких иммунохимических методов. [c.95]

Если курс иммунизации животного-продуцента не закончился тотальным кровопусканием, то через некоторое время ему можно сделать повторную напоминающую инъекцию антигена в той же дозе и тем же способом, а через 7—9 дней можно взять кровь и получить иммунную сыворотку. [c.119]

Иммунная сыворотка, используемая в реакциях преципитации, должна иметь титр антител не менее 1 10 ООО. [c.119]

В серии пробирок увеличивающиеся количества антигена добавляют к одному и тому же количеству иммунной сыворотки. Пробы выравнивают по об1.ему добавлением буферного раствора. После инкубирования при температуре 4 °С, а затем выдерживания в течение. 30 мин при 37 С можно наблюлать обра кование преципитата. Растворы центрифугируют, осадки промывают и определяют их количество путем измерения содержания белка. Максимальное количество полученного преципитата соответствует зоне эквивалентности [27]. [c.100]

Принцип метода. При смешивании растворимого белкового антигена со специфической иммунной сывороткой наблюдается образование преципитата. [c.119]

В. Для получения кроличьей антисыворотки к белкам сыворотки человека рекомендуется описанный ниже метод иммунизации, позволяющий приготовить, по-видимому, наилучшую иммунную сыворотку для выявления многих белковых компонентов, в том числе иммуноглобулинов. В этом методе совмещены две схемы иммунизации по Мильгрому и по Проому. [c.117]

Б — перекрестная реак11ия— антитела иммунной сыворотки реагируют с другим белком, отличающимся от иммуногена, который несет эпитоп, сходный с одним из эпитопов имму-иогена, [c.94]

Примечание. Метол хорон]о приспособлен для анализа сложных смесей с полис пециф и чески ми иммунными сыворотками. Он позволяет проводить антигенное сравнение компонентов в различных сме- сях с полисгсецифическими иммунными [c.102]

Б. В Иммуноэлектродиффузия или ракетный иммуноэлектрофорез [66], Гель агарозы содержит равномерно распределенную иммунную сыворотку. В лунки внесены антигенные растворы разных концентрации. Электрофоре. проводится при pH, при котооом антитела не мигрируют либо мигрируют очень мало. Антигены под действием электрического поля мигрируют в геле, содержащем антитела. Комплексы при избытке антигенов вначале растворимы, продолжают мигрировать в ходе электрофореза, а также посредством диффузии, обогащаются антителами, н, когда соотношение антигенов и антител достигает точки эквивалентности, они осаждаются в форме ииков. [c.102]

Хорошо известная трудность в получении иммунных сывороток состоит в изменчивости иммунного ответа не только у отдельно взятых особей одного и того же вида, но также у одной и той же особи в ходе иммунизации [89]. Так, пробы иммунных сывороток, взятые у нескольких животных или у одного и того же животного в процессе иммунизации, представляют собой гетерогенный набор молекул с разными антигенсвязывающими центрами и различной аффинностью к антигену. Это относится даже к антителам, специфическим к отдельному эпитопу. Практически, чтобы получить достаточный запас однородной иммунной сыворотки, приходится делать смеси сывороток, полученных разными отборами их у иммунизированных животных. [c.96]

Рис. 4.7. Результаты, полученные методом связывания комплемента, с одной стороны, и методом двойной диффузии, с другой стороны, для сравнения антиген ности р-амилаз, экстрагируемых из непроросшего и пророс него зерна ячменя. В двух упомянутых методах использована одна н та же моноспецифическая иммунная сыворотка р-амилазы ячменя. Оба экстракта подвергли диализу и разбавили >1.0 получения одинаковой их активности.

В сущности все методы иммунодиффузии основаны на явлении, которое наблюдал Бекхольд взаимодействии антиген — антитело в геле. Растворимый белковый антиген и иммунная сыворотка диффундируют в геле навстречу друг другу. В месте встречи обоих реагентов возникает полоса преципитации, которую можно легко наблюдать и регистрировать. [c.18]

Теория дает возможность обосновать тактику лечения инфекционного заболевания. Иммунную сыворотку, т. е. специфические АТ целесообразно вводить в момент максимального количества собственных АТ. Наибольший эффект от применения апти-биотиков возможен, если начинать их введение в тот момент. [c.582]

Реакция преципитации происходит вскоре после смешивания растворов антигена и иммунной сыворотки. Ее предварительный результат, как правило, можно учитывать через 30—60 мин инкубации полученной смеси при 37° С. Преципитация обычно завершается через 24 ч инкубации в холодильнике. При постановке реакции иммунодиффузии, когда соединение реагентов происходит лишь после их диффундирования в поддерживающей среде (например, в агаре), время образования преципитата, помимо прочих моментов, зависит от скорости диффузии. [c.17]

Некоторые методы требуют использования моноспецифических иммунных сывороток. Основной момент при этом — контроль моноспецифичности препаратов антител, который достигается методом специфической преципитации в геле между иммунной сывороткой и экстрактом, из которого иммуноген был очищен. Наличие более одной линии преципитации показывает, что сыворотка неспецифична. Трудность контроля нередко заключается в том, что моноспецифичность иммуносыворотки проверяется методами, имеющими определенный порог чувствительности (например, методом двойной диффузии), тогда как иммунная сыворотка используется при методах с намного более высокой [c.113]

Наиболее простой способ исследования растворимых антигенов в реакции преципитации заключается в том, что исследуемый раствор смешивают со специфической иммунной сывороткой, а затем наблюдают образование преципитата. Эта реакция применяется главным образом для определения титров. Только в том случае, когда реакция ставится с иммунной сывороткой, специфичной к данному белку, величина титра может служить характеристикой белкового препарата. Действительно широкое применение имму-нохимического подхода к анализу белков началось только после того, как появились иммунодиффузионные методы исследования. [c.18]

Число линий преципитации на электрофореграмме зависит от используемой иммунной сыворотки. Например, хорошо себя зарекомендовавшая кроличья антисыворотка к белкам сыворотки человека фирмы Behringwerke (ФРГ) и аналогичная лошадиная антисыворотка института Human (Венгерская Народная Республика) позволяют идентифицировать примерно 20 белковых фракций сыворотки. Принципиальная возможность приготовления антисыворотки практически к любому белку значительно увеличивает применимость иммуноэлектрофореза. Кроме того, приготовив антисыворотки, специфичные к какому-либо одному-единственному белку (или небольшому числу белков), можно в смеси белков исследовать составляющие ее отдельные компоненты. Иммунные сыворотки, предназначенные для иммунохимического анализа отдельных белков плазмы человека, уже имеются в продаже. [c.21]

После того как в ходе иммунизации активность сыворотки, которую измеряют, отбирая пробы, достигнет нужной величины, животным-продуцентам делают кровопускание для получения максимального количества сыворотки. Если иммунная сыворотка получена в нестерильных условиях, в нее рекомендуется добавить мертиолат в соотношении I 5000. При хранении в холодильнике (по возможности в замороженном состоянии) активность полученных антисывороток может сохраняться в течение нескольких лет. [c.119]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология