Антитела применение

Наибольшее распространение получили методы введения ферментной метки, основанные на образовании ковалентной связи между молекулами антитела и фермента. Наибольшее практическое применение нашел метод получения иммунопероксидазных конъюгатов окислением углеводного компонента фермента перйодатом натрия. В случае использования щелочной фосфатазы в качестве фермента-маркера применяют глутаровый альдегид, взаимодействующий с е-аминогруп-пами белковых молекул. [c.317]

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Возможности синтетической химии в последние годы разительно изменились. В некоторых областях благодаря развитию эффективных регио- и стереоселективных методов достигнута селективность на уровне ферментативных реакций, столь восхищающих химиков. При этом химические методы зачастую имеют то преимущество, что они в меньщей степени селективны по отнощению к субстрату и тем самым имеют больщую область применения. И тем не менее мы все еще далеки от синтетических достижений природы [3]. Следовательно, при проведении любого синтеза нужно проверить, не дает ли преимущество замена какой-либо стадии синтеза ее ферментативным вариантом [4а]. Новым аспектом является использование моноклональных антител в качестве катализаторов, осуществляющих химические превращения через стабильные аналоги переходных состояний [46]. [c.492]

Один метод локализации со специфической физиологической активностью был позаимствован нз ПЭМ. Этот метод меток поверхности клетки, который, будучи применен к образцам для РЭМ, приводит к образованию на поверхности клетки морфологически различаемых или аналитически идентифицируемых структур. Такие методики в сочетании с растровой электронной микроскопией высокого разрешения позволяют изучать природу, распределение и динамические свойства антигенных и рецепторных состояний на поверхности клеткн. Методы нанесения меток на поверхность клетки в общем случае достаточно сложны и включают процедуры иммунохимической и биохимической очистки. Подробные ссылки на них можно найти в работах [359—361], но сущность методик состоит в следующем. Для крепления антител в определенных антигенных состояниях на поверхности клетки используются стандартные иммунологические процедуры. Хитрость состоит в том, чтобы модифицировать антитела таким образом, чтобы они также несли морфологически различимую метку, такую, как латексные шарики или сферы из двуокиси кремния, распознаваемый вирус, как, например, вирус табачной мозаики, или один из Т-четных фагов, как показано на рис. 11.18, илн белковая молекула известных размеров, как ферритин или гемоцианин. В работе [362] (рис. 11.19) использовались гранулы золота, которые имеют большой коэффициент вторичной электронной эмиссии. Одна часть антитела имеет средство для специфичного антигенного закрепления на поверхности клетки, в то время как другая часть несет морфологически различимые структуры. В настоящее время иммунологические методы достигли такого уровня, когда они не могут быть использованы для изучения как качественных, так и количественных характеристик поверхности клетки [363, 364]. [c.244]

Успехи в развитии И. позволили создать в 1975 принципиально новую биотехнологию произ-ва высокооднородных в хим и иммунологич. отношениях антител (С. Мильщтейн, Г. Келер), названных моноклональными. Углубленное изучение строения антигенов послужило основой для создания синтетич. аналогов антигенных детерминант и их использования для разработки биотехнологии синтетич. вакцин. Применение моноклональных антител и синтетич. антигенов позволяет создавать эффективные методы иммунодиагностики, напр, таких массовых инфекц. заболеваний, как СПИД Широкое применение получили моноклональные антитела (в виде т наз. иммуносорбентов) для извлечения [c.218]

По-видимому, предела чувствительности метода электропереноса с последующим ИФА достигнуть еще не удалось. Весьма вероятно, что доступную на сегодняшний день чувствительность в ближайшем будущем удастся заметно повысить за счет улучшения качества конъюгатов и использования более чувствительных субстратов. Применение нашей методики позволяет в системе [БСА — антитела против БСА] регистрировать антитела при их концентрации в растворе 10 нг/мл, а антиген-—в количестве 10 нг на 0,5-сантиметровую полоску. При этом мы используем кроличьи поликлональные антитела. Применение моноклональных антител для обнаружения антигенов патогенных паразитов позволяет повысить чувствительность обнаружения до 50 пкг. Полагают, что предел чувствительности обнаружения антигенов на блоте с помощью ИФА может достигать 10—20 пкг. Не исключено, что применение более чувствительной системы фермент—субстрат позволит выйти за рамки названных ограничений чувствительности метода. [c.351]

Важным применением иммобилизованных ферментов и ингибиторов ферментов, а также иммобилизованных антител и антигенов [c.342]

Другие применения ПТ для определения ионов, а также газов, ферментов и антител, указаны в табл. 7.7-4. В принципе, любые слои, применяемые в ИСЭ, можно также перенести в микроэлектронные сенсорные устройства. [c.502]

Метод агглютинации используется также для изучения растворимых антигенов. Они связываются химическим путем с эритроцитами или частицами латекса, образуя таким образом частицы, называемые сенсибилизированными. Антитела противо-растворимых антигенов, добавляемые в суспензию таких частиц, косвенным образом провоцируют агглютинацию сенсибилизированных частиц. Этот способ называется пассивной, или косвенной, агглютинацией [9, 72, 109]. Принцип его схематически представлен на рисунке 4.3. Указанная методика позволяет также использовать антитела вместо антигенов для получения сенсибилизированных частиц. Применение моноспецифических антител позволяет в первую очередь количественно определять содержание отдельного белка в смеси белков. Если антисыворотка не является строго специфичной, то для определения количества содержащегося белка необходимо, чтобы используемые для сенсибилизации частиц антигены были очищены от примесей, которые могут реагировать с неспецифическими антителами в сыворотке. [c.98]

Последовательность используемых реагентов такова раствор, содержащий тестируемый белок (этап 2), затем антитела кролика, специфичные к белку (этап 3), наконец, меченые специфические антитела против IgG кролика (этап 4). Таким образом, меченые антитела будут реагировать только со специфическими к белку антителами, добавленными на этапе 5, а не с антителами, сорбированными пластиком. Эти высокочувствительные методы, не требующие больших расходов антител и весьма хорошо приспособленные для количественного определения большого числа образцов, находят все большее применение. [c.108]

Особое распространение получили методы, основанные на использовании антигенов и антител, меченных ферментами, — так называемый иммунофермеитный анализ. Они используются для изучения широкого круга соединений — антител, пептидных и стероидных гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, различных белков и ферментов. Существуют гетерогенные (твердофазные) и гомогенные методы иммуноферментного анализа, принципиально различающиеся способом разделения компонентов иммунохимической реакции. Твердофазные методы основаны на применении антител или антигенов, иммобилизованных на нерастворимых носителях. [c.306]

Ввиду широкого применения антител необходимо сделать ряд общих замечаний, [c.113]

В некоторых видах иммуноферментного анализа в качестве одного из реагентов используют гаптен, меченный ферментом. Если связывание в таком конъюгате аналогично способу пришивки в конъюгате гаптена с белком-иосителем для получения антител, то говорят, что в анализе используют гомологичные антитела. Если же структура ножки и способ пришивки гаптена в обоих случаях различны, то говорят о гетерологичных антителах. Применение того или иного вида антител или конъюгатов в нммунофер- [c.16]

Для определения концентрации веществ в большинстве иммунохимических методов к анализируемому раствору, содержащему определяемое соединение и его меченый аналог, добавляют реагент в количестве, намного меньшем необходимого по уравнению (7.12). Как немеченые, так и меченые соединения взаимодействуют с реагентом практически одана-ково, поэтому отношение их концентраций будет одним и тем же в растворе и в связанном состоянии. При этом возможность применения метода во многом определяется доступностью меченого антигена и соответствующих антител. Для введения метки используют различные реагенты радионуклиды, ферменты, красящие вещества, флуоресцентные и хеми-люминесцентные зонды, ионы металлов. До последнего времени в качестве маркеров антител применяли радиоактивные изотопы этот метод назьшается радиоиммунохимическим анализом (РИА). При этом степень [c.298]

К насыщенному раствору (NH4)2S04 добавляют 2 н. NaOH и доводят pH до 7,8. При постоянном перемешивании медленно, по каплям к 50 мл сыворотки кролика добавляют 80 мл насыщенного раствора сульфата аммония (pH 7,8) и перемешивают в течение 2—3 ч. Центрифугируют суспензию при комнатной температуре 30 мин при 1500 g. Первый осадок содержит все -у-глобулины, другие глобулины и следы альбумина. Растворяют осадок в дистиллированной воде до начального объема сыворотки (50 мл). Очищают фракцию у-глобули-нов вторым и третьим осаждениями. После третьего осаждения растворяют осадок в боратном буфере (pH 8,45) до конечного объема 20— 25 мл. Удаляют сульфат аммония диализом при 4°С против боратного буфера в течение 2—3 дней со сменой буфера утром и вечером. Полученный после диализа препарат иммуноглобулинов обычно содержит небольшой осадок денатурированного белка и слегка опалесцирует. Центрифугируют при 4° С в течение 30 мин при 1400 s. В полученном препарате проверяют содержание белка и титров антител. Определяют белковый состав методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (с. 119). Если полученный препарат у-глобулинов не отвечает требованиям эксперимента по стоте, проводят дальнейшую очистку с применением ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.308]

Величина этого параметра определяет возможность применения тех или других антител. Иммуноанализ и гистохимические методы требуют антител с высоким сродством (/Ссв=Ю-э—чтобы комплексы антигена с антителами были очень прочными С другой стороны, имму-ноаффинная очистка лучше осуществляется с низкоаффинными антителами Ксв=10- —10- ), поскольку в этих условиях адсорбция и освобождение антитела проходят при относительно мягких условиях без повреждения антигена и антител и колонка может использоваться повторно. Анализ взаимодействия антител с антигеном проводят по методу Скэтчарда (см. с. 343) с использованием радиоиммунного анализа. [c.324]

Одним из методических достижений, обеспечивших быстрый прогресс в изучении механизма действия гормонов, явилось применение специфических антител к гормонам или гор-мон-белковым комплексам. Благодаря использованию меченных радиоактивным изотопом гормонов метод радиоиммунологии позволяет определять исследуемое вещество в чрезвычайно низких концентрациях порядка фемтомолей (т. е. то количество вещества, которое содержится в 1 мл раствора общей концентрации М) . В настоящее время разрабо- [c.318]

Для исследования спектра И. используют ионообменную хроматографию, гель-фильтрацию, электрофорез и изоэлектрофокусирование, а также иммунохим. методы с использованием антител. Наиб, широко используется диск-электрофорез в полиакриламидном геле. Однако применение только этого метода для поиска И. недостаточно, т. к. он не позволяет выявить генетически разл. формы ферментов, не различающиеся по заряду. В связи с этим для более полной характеристики спектра И. необходимо применять иммунохим. аиализ и сравнивать спектры И. мутантов. При выявлении И. необходимо избегать условий выделения, при к-рых возможно возникновение артефактных форм. Так, для предотвращения частичного протеолиза в процессе выделения и хранения работу часто проводят в присут. ингибиторов протеаз. При разделении мембранных ферментов необходимо максимально снижать концентрацию детергента, что позволяет избежать появления новых форм в результате образования мицелл с разным содержанием искомого мембранного фермента. Процедура выделения И. должна быть максимально сокращена по времени. [c.202]

Установление структуры генов, кодирующих антитела и рецепторы Т-лимфоцнтов Создание и применение новых противоопухолевых и противовирусных препаратов [c.781]

Электроды такого типа использовали в аналитических целях, однако возможности создания селективных и чувствительных электродов почти не изучены. Область применения ХМЭ довольно широка, от определения очень низких концентраций катионов [159а], до обнаружения таких биологических веществ, как антигены и антитела [1596]. [c.191]

Разделение связанной и свободной фракций можно провести различными способами. В жидкофазном анализе растворов используют осаждение, центрифугирование и декантацию, но они дают весьма непостоянные результаты и поэтому не нашли широкого применения. Первый большой успех в этом направлении сделали Майлс и Хейлс (1968), которые предложили удалять несвязанные меченые антитела, вводя большой избыток антигена в твердой фазе (рис. 7.9-7). [c.574]

Пористое стекло (диаметр пор 5 — 250 нм), как и наиболее широко применяемые носители иа основе агарозы, отличается низкой неспецифической сорбцией и высокой емкостью. Аффинная хроматография нашла широкое применение при разделении ферментов, полнпептидных и белковых гормонов, антител, антигенов, а также транспортных и рецепторных белков. [c.354]

Эффективность применения хелепина Д у 330 больных в возрасте от 7 до 63 лет с аденовирусной инфекцией глаз (в том числе у 129 больных с АВК и у 101 больного с ЭКК) изучали в сравнении с бонафтоном. Этиология заболевания в 36% случаев подтверждена методом флюоресцирующих антител в соскобе с конъюнктивы, типичным анамнезом и клиническим течением. [c.365]

Реакция специфической преципитации между антигенами и антителами в жидкой или гелеобразной среде использовалась уже свыше полувека в самых разных методах. Пионерами методов, основанных на преципитации в геле, были Оудин [87], Ухтерлони [85], Грабарь и Уильямс [41]. Эти методы имеют множество модификаций с самым разнообразным их применением. [c.99]

Эти методы всегда широко используются, однако методы ELISA, отличающиеся простотой применения, причем без радиоактивных элементов, но обеспечивающие ту же степень чувствительности, имеют перспективу вытеснить методы RIA. Для анализа антигена в сходных белковых смесях всеми этими способами необходимо применение строго моноспецифических антител. [c.108]

Методы аффинной хроматографии, основанные на реакциях антиген — антитело, открыли новое направление и новые возможности применения иммуноадсорбции. Принципы и условия использования иммунной аффинной хроматографии при иммобилизации антител или антигенов описаны в литературе [70, 75]. Два варианта применения иммуноаффииной хроматографии схематически представлены на рисунке 4.10. [c.109]

В начале текущего столетия систематики первыми использовали информацию, получаемую при исследовании растений серологическими методами [77, 116]. Интенсивное применение этих методов до 50-х годов могло показаться довольно бесперспективным, так как иногда получали необъяснимые результаты из-за методического несовершенства, поскольку могли тогда учитывать (с помощью реакций преципитаций, оцениваемых турби-диметрией мутных сред) только крупномасштабные, глобальные явления, отражаемые реакциями между системами — комплексами антигенов и антител. В то время иммуноадсорбция явилась ценным подспорьем в этих исследованиях [82]. Применение антител для изучения растений вновь вызвало интерес после разработки методов осаждения в геле благодаря прогрессу в очистке белков и открывающейся возможности производить и контролировать полиспецифические и моноспецифические сы- [c.111]

Некоторые производные полисахаридов находят применение в промышленности так, например, ксантогенат целлюлозы применяется для производства искусственного шелка, а нитрат целлюлозы— для производства взрывчатых веществ. В связи с появлением водонерастворимых реагентов для приготовления иммуноадсорбентов и перевода ферментов и антител в нерастворимое состояние был синтезирован ряд новых модифицированных полисахаридов. Сведения о таких производных включены во многие обзоры, посвященные полисахаридам, например целлюлозе [222,223], крахмалу [224, 225] и другим [226] см, также [65, 227]. Чтобы облегчить поиск ссылок на методы их получения, эти производные классифицированы ниже по типу содержащихся в их молекулах заместителей, а не по природе исходного полисахарида. [c.273]

Антитела, иммобилизованные на полисахаридных носителях, используют для очистки антигенов обычно с помощью колоночной хроматографии (иммуноадсорбция), при которой раствор неочищенного антигена пропускают через носитель с закрепленными на нем антителами. Специфический антиген адсорбируется антителами, тогда как примеси вымываются из колонки. Далее антиген может быть десорбирован в чистом виде [250]. Опубликован очень подробный обзор [227] с описанием подобных нерастворимых продуктов и способов их применения. [c.275]

Смотреть страницы где упоминается термин Антитела применение: [c.238] [c.246] [c.288] [c.301] [c.304] [c.241] [c.670] [c.219] [c.318] [c.81] [c.546] [c.365] [c.399] [c.401] [c.80] [c.95] [c.106] [c.113] [c.114] [c.116] [c.266]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология