Пятна на хроматограмме поперечные

Обнаружение веществ на бумажных хроматограммах можно осуществить двумя способами. По первому способу хроматограмму после проявления разрезают на поперечные полосы и каждую из полос анализируют отдельно (см. стр. 477). По второму способу пятна веществ обнаруживают обработкой всей хроматограммы. Последний способ более употребителен. [c.462]

Обе хроматограммы характеризуются постепенным увеличением размеров зон по мере увеличения длины пробега по пластине. При этом на пластине с более крупным силикагелем пятна, находящиеся в средней части пластины, имеют вытянутую эллиптическую форму, которая постепенно переходит в круглую по мере приближения к верхнему краю пластины. На пластине с мелким силикагелем пятна на всем протяжении имеют круглую форму. Эти хроматограммы наглядно демонстрируют двойственный характер механизма размывания зон как за счет факторов, не зависящих от размера частиц сорбента и действующих в продольном и поперечном направлениях, так и за счет факторов, действующих только вдоль направления движения элюента и зависящих от размера частиц, причем сила действия их увеличивается от нижнего и верхнего краев пластины к середине. [c.339]

При использовании описанного выше способа нанесения образца для растворения веществ, как правило, используют полярные растворители. Преимущество применения полярных растворителей состоит в некотором размывании вещества в стартовом пятне, что препятствует чрезмерному концентрированию вещества в точке. Нанесение в точку следует избегать, так как в этом случае после проявления и обнаружения хроматограммы вещества детектируются в виде узких растянутых пятен. При этом компоненты смеси с близкой подвижностью не разделяются между собой. В случае закрепленных слоев диаметр стартового пятна должен быть равным 3—4 мм, у насыпных слоев — 6—8 мм. Конечно, нужно избегать и слишком широких стартовых пятен, поскольку в этом случае пятна на хроматограмме получаются слишком большими, имеющими диффузионный характер, и тоже сливаются с близкими по Яр соседними пятнами. Очень хорошее разделение достигается при нанесении растворов веществ в виде узких поперечных полосок [123]. Стартовые полоски должны быть длиной от Г до 4 см и как можно более узкими. Растворы наносят " с помощью капилляра в виде ряда точек или, лучше, в виде не- прерывной линии, образуемой при осторожном перемещении ка- [c.63]

Молекулы веществ проходят в направлении потока элюента различный путь. На хроматограмме образуется зона с максимальной концентрацией вещества в ее середине. Из-за поперечной диффузии зоны превращаются в пятна. Расширение пятен зависит от количества вещества и длительности хроматографического процесса. Положение пятен характеризуют величинами / /, так же, как и в бумажной хроматографии. В зависимости от направления поступления элюента на пластинку различают методы восходящей, нисходящей и горизонтальной хроматографии. Разделение веществ может осуществляться еще многократной двумерной, круговой или градиентной хроматографией. Самым распространенным является метод восходящей хроматографии в закрепленном слое сорбента. [c.308]

Отсюда следует, что не все молекулы вещества 3 пройдут в направлении Вотока одинаковый путь. Их совокулность образует на хроматограмме зону (которая называется также полосой) с максимальной концентрацией вещества в середине зоны или, при осложнениях , зону с несимметричным распределением вещества. Если имеется также возможность расширения в направлении, перпендикулярном потоку (хроматография на бумаге или хроматография в тонких слоях), то в результате дополнительной поперечной диффузии зоны превращаются в пятна . Возможность поперечной диффузии проявляется тем отчетливее, чем более длительное время осуществляется хро- [c.81]

Методика опыта. Навеску 3—5 г свежего растительного материала (ячменя, ржи, пшеницы, молодых листьев и т. д.) помещают невысоким рыхлым слоем в фарфоровую чашку и фиксируют паром, для чего чашку помещают в работающий стерилизатор Коха на 20 мин. После этого растительную массу растирают и переносят с 15—20 мл теплой воды в коническую колбу емкостью 50 мл и ставят в водяную баню (для экстракции) при температуре 60— 80° С на 30 мин. Полученную разваренную массу фильтруют вначале через стеклянную вату, а затем через стеклянный фильтр № 4, осадок промывают 3—4 мл дистиллированной воды. Фильтрат и промывные воды собирают в мерную колбу емкостью 25 мл и содержимое ее доводят водой до метки. Отбирают пипеткой Мора 10 мл экстракта и выпаривают в небольшой фарфоровой чашке досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл воды. На полоску хроматографической бумаги (длина 55—60 см, ширина 5—6 см), отпустив 5 см от нижнего края, наносят в виде поперечной полосы 0,01 мл полученного концентрата. Пятно высушивают на воздухе и конец бумаги опускают в растворитель (насыщенный водой фенол). Хроматографическое разделение ведут нисходящим способом. Влажной камерой служит плотно закрывающийся аквариум, в который налито немного воды. После прохождения по бумаге фронта растворителя на расстояние 400мм (за 24—30 ч) от места нанесения испытуемого раствора хроматограмму подсушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре, а затем в сушильном шкафу при 70—80° С. Сухую хроматограмму проявляют, опрыскивая ее из стеклянного пульверизатора аммиачным раствором А НОз. После опрыскивания хроматограмму снова сушат в сушильном шкафу при 100—105° С. Через 5 мин бумага приобретает светло-коричневый цвет, а в местах расположения редуцирующих сахаров появляются темно-коричневые пятна (рис. 34). Эта реакция основана на восстановлении серебра редуцирующими сахарами. Для получения более четкой хроматограммы рекомендуют [c.156]

Для определения радиоактивности применяются обычные методы (см. стр. 199) с помощью трубки Гейгера — Мюллера измеряют элюаты из пятен или хроматограммы, предварительно разрезанные на поперечные полосы или непосредственно перемещаемые перед щелью. При удалении минимум на 4 см можно иногда измерять все пятно сразу, что менее точно (Фосетт и Кирквуд). Количественно можно определять и почернение на авторадиограммах (Гросс [1.1). [c.452]

Гидролизат, содержащий метионин и цистин, предварительно окисляют надмуравьиной кислотой. На линию старта одномерной хроматограммы наносят 80—100 цг смеси в виде поперечной линии длиной 13 мм, на остальные места наносят стандартную смесь аминокислот, аналогичную по своему составу испытуемой смеси кроме того, наносят каплю тропеолина 00. Первое хроматографирование в системе / -бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 5) проводят с перетеканием до тех пор, пока пятно тропеолина достигнет нижнего края бумаги. После сушки хроматограмму хроматографируют в той же системе, повторяя эту операцию 5—8 раз, причем каждый раз до достижения растворителем нижнего края бумаги. Проявление проводят погружением хроматограммы в 0,7%-ный раствор нингидрина в безводном ацетоне, после чего хроматограмму выдерживают в течение 8—10 час при комнатной темнературе в полутьме, нричем в атмосфере не должно содержаться аммиака. Затем хроматограмму освещают минимум двумя источниками света с определенного расстояния и фотографируют на фотопленку. Отношение величины площадей пиков анализируемых образцов, полученных измерением на микрофотометре, сравнивают с площадями стандартных образцов и результаты выражают в виде части от общего содержания аминокислот. Метионинсульфон (располагающийся на хроматограммах вместе с гликоколом и серином), тирозин и триптофан этим способом пе определяются, изолейцин и лейцин определяются совместно. [c.776]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология