Хроматография градиентная

Наиболее распространен элюентный режим хроматографирования, позволяющий получать в чистом виде все компоненты пробы. В жидкостной хроматографии применяют также изократический и градиентный режимы подачи элюента. В изократическом режиме состав элюента в течение анализа не изменяется, в градиентном режиме состав элюента меняется по определенной программе. [c.582]

Наибольшим достоинством жидкостной хроматографии является градиентное элюирование — изменение состава элюента во времени, позволяющее разделять смеси различной полярности за счет изменения коэффициента распределения. Градиентное элюирование можно рассматривать как аналог программирования температуры в газовой хроматографии. [c.204]

Обработку нефтей водными растворами реагентов проводили по следующей методике 50 мл отбензиненной нефти и 50 мл водного раствора реагента перемешивали в течение 24 ч при комнатной температуре. Затем воду отделяли и определяли групповой химический состав нефтей методом жидкостной адсорбционной хроматографии с градиентны.м элюированием [102]. Этот метод позволяет определять групповой химический состав тяжелых нефтепродуктов с одновременным определением асфальтенов. Полученные экспериментальные данные приведены в табл.34-35. [c.129]

При введении в подвижную фазу веществ, обладающих различной адсорбционной активностью, вымывание компонентов анализируемой смеси происходит в зависимости от активности как вымывающих, так и вымываемых веществ. В идеальном случае можно получить градиентную хроматографию, т. е. метод, при котором состав подаваемой в колонку подвижной фазы непрерывно изменяется, причем так, что ее вытесняющая способность возрастает. Здесь подвижная фаза, выполняя присущие ей обычные функции, оказывает еще влияние и на селективность колонки. [c.79]

Для ступенчатого градиентного элюирования хроматографических групп была использована возможность разделения смеси элюентов по способу фронтальной хроматографии [3, 5], согласно которому разделение элюентов должно идти по схеме, представленной на рис. 1. При разделении смеси, например, из трёх растворителей различной адсорбционной активности в предварительной колонке (см. рис. 1, а) первым из колонки выйдет некоторое количество наиболее слабо адсорбирующегося растворителя А в чистом виде, затем смесь растворителя А с более сильно адсорбирующимся растворителем В и, наконец, исходная смесь растворителей А, В и С. Поступая в разделительную колонку, растворитель А вытесняет с силикагеля слабо адсорбирующуюся часть образца (компонент а) и движется вместе с ним к выходу из колонки. Затем по этой же схеме десорбируются компоненты Ь и с. [c.6]

В газовой хроматографии градиентная элюция осуществляется в результате непрерывного изменения температуры в колонке, что осуществляется в результате перемещения кольцевой печки вдоль колонки. Решающую роль градиентная элюция играет в хроматографическом разделении полимеров [5]. Правда, количественные закономерности этого процесса иные, так как он основан на сочетании градиентного изменения состава раствора и наличия градиента температуры в колонке. Подобный процесс относится к особому типу хроматографии — к осадочной хроматографии. Смесь полимеров, находящаяся в верхней части колонки в виде осадка, растворяется в результате введения хорошего растворителя и переносится вниз по колонке, где снова выпадает в осадок, попадая в более холодную часть колонки. Многократное повторение, актов растворения и осаждения является лучшим методом хроматографического разделения гидрофобных высоко-полимеров. Вместе с тем этот метод применим и для разделения смеси пептидов. [c.115]

Однако наиболее часто применяют ион-парную хроматографию на обращенной фазе, при которой в качестве подвижной фазы используют водный буферный раствор и органический растворитель, смешивающийся с водой, обычно метанол или ацетонитрил. В подвижную фазу добавляют противоион, заряд которого противоположен заряду молекулы, а в качестве сорбента используют силикагель с химически привитой фазой, обычно Се или i8. Иногда разделение осуществляют с применением несмешиваемой с водой механически удерживаемой фазы, например, бутанола. При разделении на обращенной фазе более стабильной, чем механически удерживаемая фаза, водные образцы могут непосредственно вводиться в колонку, что особенно важно для анализа биологических образцов. При этом нет необходимости в предварительной очистке, так как гидрофильные компоненты мгновенно вызываются из колонки. Градиентное элюирование проводят, изменяя концентрацию противоиона в подвижной фазе или меняя полярность растворителя. При изменении концентрации противоиона, который остается в неподвижной фазе, изменяется сила растворителя, а при изменении pH подвижной фазы изменяется селективность разделения. [c.75]

Градиентная хроматография, градиентное элюирование. Перемещение компонентов смеси происходит при одновременном воздействии потока элюента и движущейся концентрационной волны вытеснителя. Например, к азоту при проявлении углеводородов добавляют диоксид углерода, концентрация которого непрерывно или скачкообразно возрастает во времени. Этим достигается более эффективное разделение [219—221]. [c.93]

Для достижения более полного разделения пользуются градиентной тонкослойной хроматографией (градиентное элюирование) — применение элюирующей системы с меняющейся концентрацией солей (градиент концентрации), меняющимся отношением полярных и неполярных растворителей (градиент полярности), меняющимся значением pH (градиент pH) [221,238]. [c.102]

В колоночной хроматографии проводят разделение макроколичеств веществ, при этом пробу в виде раствора отмеряют обычной мерной посудой. Подвижную фазу вводят в верхний конец колонки из резервуара, используя способ нисходящей хроматографии, при которой подвижная фаза движется под действием поля земного притяжения. При небольшой скорости передвижения жидкости в колонке продолжительность анализа сокращают, повышая давление. Обычно непродолжительным считают разделение со скоростью 1—20 мм мин- или 1—10 мл-мин . При проведении градиентного элюирования или при проявлении хроматограммы (см. стр. 344) применяют простую установку, приведенную на рис. 7.9. Она состоит из двух склянок с тубусами. В сосуд А вводят чистый растворитель Ьд, в сосуд Б — растворитель Ьб- При переходе растворителя Ьд в сосуд Б с одновременным переходом подвижной фазы из сосуда Б в разделительную колонку концентрация вещества А в подвижной фазе постоянно возрастает. [c.352]

Спектрометрические детекторы применяются в градиентной хроматографии, так как обычно используемые в ней растворители обладают небольшими коэффициентами поглощения при рабочих длинах волн, поэтому градиентная подача растворителя не вызывает [c.92]

Весьма перспективно применение градиентной хроматографии. Метод может заключаться в постепенном изменении состава растворителя, концентрации его составля Ощих, полярности, значения pH или же в изменении состава сорбента — его активности, структуры неподвижной жидкой фазы, а также вследствие введения в сорбент импрегнирующего вещества. Возможно градиентное изменение среды, например температуры опыта, летучести растворителя, толщины слоя сорбента. Наконец, можно создавать чередующиеся слои сорбентов, нанося их на пластинку в виде полос, плотно прилегающих друг к другу. [c.127]

В любом из вариантов градиентной хроматографии достигается лучшее разделение многокомпонентных смесей, чем при хроматографировании одним растворителем. Возможно разделение смеси очень близких по свойствам и структуре соединений. Понятно, что градиентная хроматография требует более сложной аппаратуры и большей продолжительности анализа. [c.127]

В тонкослойной хроматографии можно получать также и двумерные или круговые хроматограммы. Для градиентного элюирования применяют специальные камеры, в которых пластины помещаются на сетки. Выше сетки имеется отвод для смеси растворителей, снизу подается второй растворитель. [c.360]

Очевидно, движение бензола осуществляется за счет его элюирования изооктаном. Концентрационная кривая бензола (кривая 3) также имеет максимум, переднему фронту которого соответствует максимум на кривой массового распределения анализируемого образца. Это говорит о том, что бензол, элюируясь изооктаном, вытесняет с адсорбента группу компонентов нефтепродукта, сродство которых с адсорбентом ниже сродства адсорбента с бензолом. Из вышесказанного следует, что описан-,ный вариант хроматографического разделения высококипящих нефтепродуктов может быть с уверенностью отнесен к ступенчатой градиентно-вытеснительной хроматографии. [c.15]

Денситометры, флюориметры и коллекторы фракций были описаны в гл. 3. Так как в случае ионообменной хроматографии объем препарата, особенно при градиентной элюции, может быть значительным, принято сбор и нумерацию фракций начинать с момента внесения препарата на колонку. [c.295]

Вода представляет собой важнейший растворитель в обращенно-фазной и ионообменной хроматографии. Основными примесями в воде, которые мешают проведению хроматографического процесса, являются различные соли и микропримеси углеводородов и других органических соединений. Присутствие солей недопустимо в ионообменной хроматографии, а примеси органических соединений вызывают существенные затруднения в обращенно-фазной хроматографии (особенно в градиентном элюировании) при использовании флюоресцентного и УФ-детекторов. [c.134]

В ионообменной хроматографии градиентное элюирование осуществляют с помощью градиента концентрации (концентрация элюирующего раствора непрерывно изменяется) или градиента pH (pH элюирующего раствора непрерывно изменяется). [c.61]

Благодаря высокой чувствительности детекторов, применяемых в современных жидкостных хроматографах, для анализа достаточно нескольких микролитров вещества. Разделение осуществляется в короткие промежутки времени за счет использования колонок малых размеров и высоких скоростей элюирования (давления на входе в колонку до нескольких сотен атмосфер). При применении некоторых типов детекторов (спектрофотометрических, транспортных и др.) можно управлять ходом разделения путем регулируемого изменения температуры, давления или состава элюента в ходе анализа. Программируемое изменение состава элюента (градиентное элюирование) плодотворно реализовано, например, в уже отмечавшейся методике ЛЭАХ [123, 124] (см. рис. 1.1). На применении транспортного детектора и смеси трех растворителей в качестве подвижной фазы основан способ [c.33]

Исследования по нзаимодействню полифункциональных pea-генгов с нефтью проводились методами газожидкостной хроматографии (ГЖХ), жидкостной адсорбционной хроматографии с градиентным. члюированием, а также методами ЭПР-, ЯМР И -, ИК-спектроскопии и диэлектрической спектроскопии [99,101,105]. [c.129]

Перечисленные варианты ТСХ следует оценивать прежде всего с точки зрения целесообразности их применения для решения той или иной задачи. Если разделение смеси возможно несколькими методами, то следует выбрать тот из них, который позволит провести эксперимент наиболее быстро и с применением более простой аппаратуры. Для прицелочных опытов наиболее целесообразно применять круговую хроматографию, для решения сравнительно простых задач — восходящую хроматографию. И только в случае трудноразделяемых или многокомпонентных смесей применяют более сложную методику, в том числе градиентную хроматографию. [c.128]

Принцип градиентно-элюентного варианта заложил Цвет. Он для ускорения вымывания из колонки зеленых, наиболее сильно сорбирующихся пигментов к проявляющему растворителю — петро-лейному эфиру — добавлял, этиловый спирт. Этим приемом до сих пор пользуются многие исследователи (в основном биологи), причем в процессе опыта часто добавляют к проявляющему растворителю не одно сильно сорбирующееся вещество, а несколько в последовательности, соответствующей увеличению их полярности. Такая последовательность определяется так называемым элюотроп-ным рядом. Усовершенствовали градиентно-элюентный вариант шведские ученые Тизелиус и его сотрудники в начале пятидесятых годов. Но теория не была разработана. Жуховицкий и Туркельтауб в 1954 г. предложили назвать этот вариант адсорбционным спектральным анализом и сделали попытку разработать теорию применительно к газовой хроматографий. Однако практического применения в газовой хроматографии в отличие от жидкофазной хроматографии этот вариант не получил. Основными препятствиями здесь являются трудности, возникающие при детектировании разделяемых компонентов, поскольку одновременно детектируется переменная концентрация вытеснителя, а также возникает необходимость менять или регенерировать адсорбент после каждого опыта. Это смещает нулевую линию на выходной кривой и вызывает потерю времени на замену и регенерацию адсорбента. [c.20]

Адсорбция из растворов олигомеров — полимеров со сравнительно небольшой молекулярной массой (от 300 до 5000) —происходит в соответствии с их химическим строением. На рис. 18.4 показано разделение олигобутадиенов и их моно- и диоксипроизвод-ных со средней молекулярной массой около 1200 на колонне с широкопористым силикагелем при градиентном элюировании с постепенным увеличением содержания полярного компонента метилэтилкетона в н-гептане. Первым из такой колонны при элюировании чистым н-гептаном выходит олигобутадиен, вторым при добавлении в н-гексан 5% метилэтилкетона выходит монооксиолигобутадиен и третьим, при содержании в н-гептане 15% метилэтилкетона, — диоксиолигобутадиен. Этот пример показывает, что методом адсорбционной хроматографии можно разделять синтетические олигомеры по типу и числу функциональных групп в их макромолекулах. [c.337]

При осуществлении элюентной хроматографии в верхнюю часть хроматографической колонки, наполненной, например, катионитом в водородной форме (Н-ф9рме), вводится смесь разделяемых ионов. Для получения компонентов в чистом виде элюирование проводят раствором кислоты или другим элюентом при постепенно возрастающей его концентрации (градиентное элюирование). Если исследуют смесь элементов разных групп периодической системы, то разделение при помощи элюирования растворами электролитов облегчается тем, что элементы разной валентности обладают различным сродством к иониту. Сорбируемость ионов возрастает от одновалентных к двух- и трехвалентным. Приблизительную закономерность сорбируемости ионов с одинаковой валентностью MOHiHO представить в виде сорбционных рядов [c.285]

Типичные системы см. [1]. В большинстве алриянтоп колоночной хроматографии используют одну и ту и е подвижную фазу, иэменяи ее состав (соотношение компонентой) в ходе хроматографирования (градиентное элюнропание). [c.394]

ХРОМАТЕРМОГРАФИЯ, газовая хроматография, в к-рой разделение осуществляют в хроматографич. колонке в условиях движущегося градиентного температурного поля. Неподвижной фазой являются, как правило, твердые сорбенты (см. Газоадсорбционная хроматография). Наиб, широко использ. т. н. стационарная X., в к-рой направления движения поля и газа-носителя совпадают, причем т-ра уменьшается в направлении движения газа-носителя (отрицат. температурный градиент). [c.667]

Термин распределительная жидкостная колоночная хроматография , строго говоря, предполагает наличие двух жидких фаз, неподвижной и подвижной, при том, что неподвижность одной из них обусловлена ее связью с твердой матрицей, заполняющей хроматографическую колонку. Этот вид хроматографии базируется па явлении растворимости. По самой сути хроматографического процесса компоненты фракционируемой смеси веществ должны быть лучше растворимы в неподвижной фазе, чем в подвижной К > 1). Если при этом неподвижная фаза водная, а подвижная фаза представлена органическим растворителем или водно-органической смесью, вещества в целом гидрофильны и разделение идет по степени этой гидро-фильности, то распределительную хроматографию принято называть нормальнофазовой (НФХ). Движение хроматографических зон по колонке и элюция пиков подвижной фазой происходят в направлении от "менее гидрофильных к более гидрофильным компонентам смеси. При изократической элюции последние лишь понемногу и с трудом диффундируют от неподвижной водной фазы в подвижную. Для ускорения их элюции можно постепенно (градиентно) увеличивать полярность подвижной фазы, например уменьшая в ней содерн апио органического растворителя в пользу воды. [c.168]

В начале 1982 г. было опубликовано исследование, посвященное сопоставлению возможностей использования RP-8-, RP-18- и феппл-силикагелей для фракционирования трипсиновых пептидов в двух вариантах линейной градиентной элюции обычного градиента концентрации пропанола при pH 4 и ион-парной хроматографии с градиентом концентрации ацетопитрила. Были выбраны следующие комбинации растворителей при элюции пропанолом раствор А — 0,25 М пиридин в 0,9 М СН3СООН (pH 4) раствор В — 60%-ный раствор пропанола в растворе А. При ион-парной хроматографии использовали следующие комбинации раствор А — 0,09 %-ный водный раствор ТФУ раствор В — смесь ТФУ, воды и ацетопитрила в пропорции 0,09 9,91 90. В обоих случаях использовали линейный градиент (О—70%) раствора В в смеси с раствором А. [c.206]

Для разделения близких по своим хроматографическим свойствам веществ используют изократическую элюцию — раствором неизменного состава. Этот вариант элюции дает наилучшее разрешение пиков, однако нередко — за счет увеличения длительности хроматографии и объема разделяемых фракций по сравнению с градиентными методами элюции. Объем препарата при изократической элюции не должен превышать 1—5% объема колонки, так как вещество в этом случае, сорбируясь пе слишком прочно, не будет существепно концентрироваться в верхней части колонки во время сорбции. [c.289]

Элюцию ступенчатым или непрерывным градиентом осуществляют чаще всего за счет изменения концентрации соли в буфере неизменного состава. Изменение pH буфера используют, как правило, для ступенчатого градиента с целью нейтрализации, а иногда и изменения знака заряда компонентов фракционируемой смеси или нейтрализации самого обменника. Условия посадки препарата на колонку при градиентной элюции обычно бывают таковы, что он концентрируется в верхней части колонки (начальные значения коэффициентов распределения велики). В силу этого объем препарата роли не играет и может быть значительным. Загрузка не должна превышать 5—10% от фактической емкости колонки для данного вещества. Исходя из этого можно рассчитать необходимое количество набухшего сорбента. В случае ступенчатого градиента загрузка может быть вьпле, приближаясь к 100% при переходе к статическому варианту хроматографии. [c.289]

При ионообменной хроматографии смесь белков сорбируется в верхней части колонки и затем вытесняется веществами, уменьшающими их сорбцию на ионите. Понижение сорбции осуществляют повышением ионной силы раствора и (или) изменением его pH. Изменение pH и ионной силы элюирующего буферного раствора можно проводить путем создания ступенчатой или градиентной элюции (с. 104). [c.109]

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе рН-градиентная элюция. На колонку размером 1,2X27 см, заполненную ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером (реактив Л Ь 2), наносят раствор белка. Элюцию проводят в градиенте pH, используя 150 мл буфера (реактив № 2) в смешивающем сосуде, и 150 мл буфера (реактив № 4) во втором сосуде. На колонку можно нанести примерно 10 мг белка. Скорость элюции — 20 мл/ч. Собирают фракции по 4 мл. В процессе хроматографии pH изменяется от 7,0 до 5,0. Первым (после выхода из колонки примерно 100 мл раствора) выходит изозим I и вслед за ним — белок, соответствующий изозиму П. [c.219]

Недостатки распределительной хроматографии с нанесенными фазами следующие. Невозможно использовать градиентную ВЭЖХ из-за уноса фазы. Невозможно работать в препаративном режиме, так как собранные фракции, естественно, будут содержать заметное количество нанесенной фазы, остающейся в образце после упаривания растворителя. Трудно менять состав растворителя, так как при этом колонка длительно приходит в новое равновесное состояние с новым растворителем. Затруднено использование повышенных температур для анализа, так как растворимость неподвижной фазы при повышении температуры заметно возрастает. Растворитель, в который вводится проба, должен по составу быть максимально близким к подвижной фазе, иначе возможны частичный смыв веподвижной фазы, ложные пики и нарушение процесса хроматографии. [c.31]

В хроматографе предусмотрено использование колонок двух типов стеклянных с внутренним диаметром 1—1,5 мм, рассчитанных на работу при давлении до 1,5 МПа и создание полностью инертной хроматографической системы, и из нержавеющей стали длиной 60 и 120 мм с внутренним диаметром 2 мм. Все соединительные линии в хроматографе выполнены из толстостенных фторопластовых капилляров, на конце имеющих развальцовку, по которой и производится уплотнение при низком давлении используются капилляры из полиэтилена. Шприцевой насос Милихром имеет привод от шагового двигателя, что позволяет не только обеспечить высокую воспроизводимость времени удерживания и количества вводимой пробы, но и формировать при необходимости в камере насоса градиент растворителя заданной формы и осуществлять градиентное элюирование сложных по составу смесей веществ. Предусмотрена также работа Милихрома с микроколлектоРОМ фракций, обеспечивающим сбор микрофракций для последующей идентификации другими физико-химическими методами. [c.64]

При разработке метода разделения сложных смесей веществ, особенно биологического и природного происхождения. Исследователю часто приходится сталкиваться с тем, что в их состав не только входит большое количество соединений, но и сильно различаются их свойства. Подобрать в этом случае сорбент и растворитель, которые обеспечивали бы разделение всех или большинства интересующих исследователя компонентов, обычно не удается. Однако еще тогда, когда колонки в хроматографии были малоэффективными, было найдено и средство для решения таких задач — использование растворителя, элюирующая сила которого постепенно увеличивалась. Это приводило к тому, что как слабо, так и сильно удерживаемые вещества выходили из колонки за приемлемо короткое время, при этом зоны сильно удерживаемых соединений сужались и давали более узкие и симметричные пики. Когда эффективность колонок была повышена, популярность градиентного элюирования несколько уменьшилась, однако для многих объектов до настоящего времени это единственно приемлемый вариант — ВЭЖХ с градиентом растворителя, или градиентная ВЭЖХ (ГВЭЖХ). [c.65]

Выбор сорбента и колонки для ГВЭЖХ также имеет свои особенности. Прежде всего, колонка должна быстро приходить в равновесие с растворителем постоянно изменяющегося состава как в процессе градиентного элюирования, так и при возвращении к исходному составу растворителя при подготовке колонки к новому анализу. Если для старых колонок в жидкостной хроматографии, работавших однократно, градиент формировался и использовался один раз, после чего сорбент в колонке заменялся свежим, и это позволяло применять силикагель и оксид алюминия, то для ГВЭЖХ эти сорбенты не подходят, так как уравновешивание их со слабым растворителем после градиента слишком длительно. Однако современные обращенно-фазные и другие привитые сорбенты достаточно быстро приходят в равновесие с исходным растворителем после окончания градиентного элюирования, что позволяет успешно использовать их для этих целей. Время, необходимое для уравновешивания колонки, для каждого сорбента устанавливается экспериментально по достижению постоянства времени удерживания веществ, входящих в анализируемую смесь. Это время различно как для разных сорбентов, так и для разных по составу растворителей, и может колебаться от десятков до нескольких сотен минут. [c.66]

Большой интерес для эксклюзионной хроматографии представляют гели сферой. Эти макропористые сорбенты с высокой плотностью сшивки получают сополимеризацией оксиэтилметакрилата с этилендиметакрилатом. Они набухают как в воде, так и во многих органических растворителях, в частности, в тетрагидрофуране. Степень набухания гелей в разных растворителях почти одинакова и не меняется в широком интервале эачений pH и ионной силы, что позволяет рассматривать их как универсальные сорбенты для эксклюзионной хроматографии в органических растворителях и водных системах. Иногда можно заменять водный растворитель на органический в провесе разделения, т. е. работать в режиме градиентного элюирования. [c.105]