Пятна на хроматограмме на стартовой линии

Проведение хроматографического разделения. На листе хроматографической бумаги нужного размера на расстоянии 4 см от нижнего края проводят стартовую линию, на которую наносят исследуемый раствор, содержащий дипептиды. Безбелковый экстракт ткани после упаривания на роторном испарителе чаще всего растворяют в смеси НСООН—СНзСООН—Н2О (7 5 13) или в 10%-ном изопропаноле, чтобы 1 мл раствора соответствовал 1,5—2 г ткани и наносят на хроматограмму небольшими порциями (0,01—0,03 мл), подсушивая бумагу теплым воздухом. На эту же хроматограмму наносят стандартные растворы карнозина и анзерина, содержащие по 0,03—0,05 мкмоль в пятне. Бумагу сшивают в виде цилиндра (следят, чтобы края не соприкасались) и помещают в хроматографическую камеру в строго вертикальном положении. Когда фронт растворителя дойдет до верхнего края бумаги, хроматограмму вынимают и высушивают под тягой в течение 2—3 сут. От следов фенола хроматограмму отмывают горячим ацетоном. Для этого сухую хроматограмму сворачивают трубочкой, перевязывают ниткой, помещают в цилиндр, заливают кипящим ацетоном и оставляют на 10—15 мин промывание повторяют 2—3 раза. Высушивают под тягой. [c.193]

После просушки хроматограммы измерьте при помощи миллиметровой линейки расстояние до фронта растворителя 1р, расстояние центра каждого пятна от стартовой линии Если пятно дает хвост или получилось очень большим, то полом<е-ние центра пятна определить затруднительно. В этом случае измеряйте расстояние до верхнего края пятна. Вычислите относительную скорость передвижения пятна кал<дого катиона [c.441]

Затем измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии (рис. 77, отрезок А В) и от линии фронта растворителя до стартовой точки (отрезок АС). Отношение этих отрезков есть величина постоянная, характеризующая положение данного вещества на хроматограмме, ее принято обозначать Rf. [c.438]

Для количественного определения это разделение должно быть четким и легко воспроизводимым. Положение пятен или зон разделяемых компонентов на хроматограмме характеризуется константой где — расстояние от центра пятна до стартовой линии АВ — расстояние от линии фронта растворителя до стартовой линии. Величина Р характерна для данного соединения на данном сорбенте и в данной системе растворителей. Для надежности идентификации веществ при определении Rf часто применяют метчики (свидетели). На пластинке вместе с разделяемой смесью веществ хроматографируют известное соединение (свидетель), а положение пятен на хроматограмме выражают в виде отношения исследуемого вещества к свидетеля (Яз = Р 1Я( ). На значение константы влияют следующие факторы [c.114]

Из рис. 26 и табл. 3 видно, что эффективность разделения, определяемая числом теоретических тарелок, также резко отличается для хорошо и плохо сорбируемых компонентов. С уменьшением сорбируемости эффективность разделения возрастает. Такая же закономерность отмечена для разделения методом газовой хроматографии, однако, в случае ТСХ числа теоретических тарелок для крайних пятен хроматограмм отличаются в 10 и более раз. Столь существенная разница, в известной мере, объясняется тем, что при расчете не вводится поправки на диаметр пятна на стартовой линии. В целом же это свидетельствует о большей эффективности метода ТСХ. [c.228]

Затем измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии, как показано на рис. 42 (отрезок А Б). Определяют расстояние от линии фронта жидкости до стартовой точки (отрезок А В). Отношение этих расстояний (отрезка АБ к отрезку АВ) обозначают через константу характеризующую положение вещества на хроматограмме. [c.251]

Тонкослойная хроматография [20— 22]. Разделение проводят на стеклянных пластинках, равномерно покрытых слоем активированного твердого адсорбента. На нижнюю (стартовую) линию пластины наносят капли исследуемой смеси, после чего пластину под определенным углом погружают в ванну с десорбентом так, чтобы уровень его был ниже стартовой линии. При движении фронта растворителя происходит разделение компонентов смеси. Для идентифицирования образовавшихся пятен хроматограмму проявляют с помощью тех или иных реагентов или рассматривают пластину в ультрафиолетовых лучах. Затем измеряют площадь образовавшегося пятна и Л/. Обычно величина характерна для индивидуальных соединений или групп однотипных соединений. [c.83]

При непрерывном движении пластинки на стартовой линии образуется полоса, которая при дальнейшем хроматографировании может дать одно пятно в виде линии (если из колонки вышло одно вещество) или же дать несколько пятен, если в одном нике на хроматограмме, полученной на выходе из колонки, содержалось несколько веществ, не разделенных в колонке. По выходе первого вещества на стартовой линии образуется промежуток, соответствующий промежутку между пиками двух соседних веществ на хроматограмме. [c.154]

В результате одни компоненты движутся быстрее вслед за фронтом поднимающегося растворителя (рис. 42), другие в той или иной степени отстают, а некоторые вообще остаются на стартовой линии. После разделения бумажную хроматограмму вынимают, высушивают, затем проявляют — опрыскивают из пульверизатора раствором вещества, дающего цветные реакции с пятнами индивидуальных компонентов, выделенных из смеси. [c.158]

Смеси свидетелей помещают в крайние точки стартовой линии хроматограмм по 0,05—0,1 мкмоль каждой аминокислоты в пятно. [c.128]

Для этой цели на стартовую линию одной и той же пластинки наносят три пробы одну с исследуемым веществом, вторую со стандартным образцом и третью - со смесью равных количеств исследуемого и стандартного вещества. Количество материала должно быть одинаковым во всех трех образцах. Если исследуемое вещество и стандартный образец идентичны по составу и строению, то все три пятна имеют одинаковую окраску и значение К/, а хроматограмма смеси представляет собой одно пятно. [c.104]

На рис. 82 сопоставляются. четыре простые хроматограммы, полученные при использовании обычной насыщенной камеры и камеры SB/ D в последнем случае все разделения оказываются улучшенными. Проанализируем, почему это происходит. Во-первых, выбранный вид разделительной задачи (два или три близких друг к другу пятна) идеально подходит для применения метода непрерывного элюирования. Ситуация окажется совсем иной в случае образца, компоненты которого сильно отличаются по полярности (когда большинство компонентов оказалось бы сгруппированным или около стартовой линии или около линии, с которой начинается испарение). Во-вторых, получение различной разрешающей способности на четырех парах пластинок хотя и не обусловливается одной и той же причиной, но легко объясняется благодаря использованию уравнения (54). [c.236]

Коэффициент распределения определяет скорость перемещения веществ по слою сорбента. Из уравнения Нернста следует, что изотермы распределения теоретически линейны. Поскольку изотерма, отвечающая уравнению Нернста, линейна, распределение вещества на хроматограмме описывается кривой Гаусса. Скорость перемещения вещества при хроматографическом разделении является величиной характеристической для этого вещества и в данных условиях постоянной. Скорость перемещения оценивают величиной Рр. Величина Яр данного вещества представляет собой отношение расстояния от стартовой линии хроматограммы до центра пятна этого вещества в любой момент времени к расстоянию, пройденному за то же время фронтом растворителя. [c.20]

На стартовой линии второй хроматографической пластинки снимают слой сорбента с площади, зависящей от площади пятна вещества на первой хроматограмме, со второй пластинки всегда рекомендуется выскребать сорбент с мень-щей площади, обычно диаметром от 0,4 до 1,2 см, чтобы нанести вещество в достаточно концентрированном виде. На освободившуюся поверхность помещают сорбент с хроматографируемым веществом, обнаруженным на первой пластинке без изменения его химической природы. Перенесенный сорбент с веществом увлажняют каплей воды и соответствующую зону уплотняют шпателем или алюминиевой фольгой до получения ровного слоя, соединенного с основным слоем второй пластинки [139, 195]. [c.92]

Тонкослойная хроматография. Тонкослойная хроматография — эффективный метод анализа сложных смесей веществ различных классов — углеводородов, спиртов, кислот, белков, углеводородов, стероидов II т. д. Она заключается в следующем. На одну сторону небольшой стеклянной пластинки с помощью специального валика наносят тонкий слой сорбента. На стартовую линию слоя сорбента наносят пробы веществ и их смесей край пластинкн ниже стартовой линии погружают в систему растворителей, налитую в широкий сосуд с пришлифованной крышкой. За счет капиллярных сил растворитель продвигается по пластинке. По мере продвижения жидкости по пластинке смесь веществ разделяется. Границу подъема жидкости, илп линию фронта, отмечают, пластинку сушат и проявляют. Отмечают, как указано па рнс. 77, положение пятен, соответствующих исследуемым веществам и находящихся между линией старта и линией фронта жидкости. Для этого измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии (отрезок а). Далее определяют расстояние от линии фронта жидкости до стартовой точки (отрезок Ь). Отношение отрезка а к отрезку Ь обозначают через константу / /, характеризующую положение вен1ества на данной хроматограмме. [c.70]

При перемещении слоя с постоянной скоростью простое сравнение газожидкостной хроматограммы с хроматограммой в тонком слое (обе движутся равномерно) дает возможность произвести прямую корреляцию отдельных хроматографических зон. При проведении изотермического газохроматографического разделения концентрации отдельных фракций на единицу длины стартовой линии постепенно уменьшаются из-за расширения газохроматографических зон, пропорционального времени анализа. Это явление ухудшает возможности обнаружения пятен на тонкослойной хроматограмме. Этот недостаток можно устранить, осуществляя газохроматографическое разделение в режиме программирования температуры. При правильно подобранной скорости повышения температуры ширина отдельных газохроматографических зон должна быть одинакова (в идеальных условиях). В этом случае будут одинаковыми и пятна на старте тонкослойной хроматограммы (на тонкослойной хроматограмме одинаковыми будут также расстояния между членами гомологического ряда). [c.145]

В связи с тем, что производные ПЭГ с молекулярной массой 300 и выше в этих условиях элюирования дают сливающиеся со стартовой линией пятна, целесообразно вместо смеси этилацетат—уксусная кислота применять для элюирования метилэтилкетон, насыщенный водой. В этом случае каждый из образцов ПЭГ в области молекулярных масс 200—800 дает на хроматограмме ряд пятен соответствующих производных (за исключением ПЭГ-1500 дающего одно сливающееся со стартовой линией пятно). Значения Rf начального и последнего пятна каждого из рядов уменьшаются с увеличением молекулярной массы, что позволяет так же, как и для ППГ провести оценку молекулярной массы исследуемого образца ПЭГ. [c.228]

На тонкослойных хроматограммах с небольшими значениями Rf (возле стартовой линии) получают пятна основного продукта, пятна полиэтиленгликоля занимают область больших значений Rf. [c.238]

Ход определения. Сначала находят, как и при анализе методом А , значения отдельных фенолов. Для этого на стартовую линию увлажненной бумаги наносят калиброванной пипеткой капли растворов отдельных фенолов. Бумагу свертывают в цилиндр и закрепляют в этой форме, соединяя язычки вверху и внизу обычными канцелярскими скрепками. Затем цилиндр помещают в камеру и проводят хроматографическое разделение при 5—7 °С, для чего камеру помещают % холодильник. Через 45—60 мин растворитель достигает верхней линии. Тогда хроматограмму извлекают из сосуда, быстро подсушивают на воздухе и сразу же опрыскивают раствором диазотированного п-нитроанилина, пользуясь распылителем, показанным на рис. 21. Появляются окрашенные пятна. Разделив расстояния от стартовой линии до пятен на путь, пройденный растворителем, получают значения отдельных фенолов. [c.236]

Метод ТОНКОСЛОЙНО хроматографии заключается в следующем на одну сторону небольшой стеклянной пластинки наносят тонкий слой сорбента. На такой слой, так же как на бумагу в бумажно хроматографии, на стартовую линию наносят пробы веществ и их смесей и край пластинки, ш же стартовой линии, погружают в систему растворителей. По мере продвижения жид- ости по пластин <е происходит разделение смеси веществ. Гранхщу подъема жидкости или Л Н 1Ю фронта отмечают, пластинку сушат и проявляют подобно бумажной хроматограмме, для обнаружения веществ в виде окрашенных пятен. Отмечают, как указано на рис. 1, положение пятен, отвечающих исследуемым веществам и находящихся между линией старта и линией фронта ж д-кости. Для этого измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии (отрезок АБ). Далее определя от расстояние от линии фронта жидкости до стартово точ и (отрезок АВ). Отношение расстояния от стартовой линии до центра пятна (отрезок АБ) к расстоянию от стартово линии до линии фронта (отрезок АВ) обозначается через константу характеризующую положение вещества на данной хроматограмме. Таким образом, величина 7 / = = АБ1АВ характерна для данного соединения на данном сорбенте и в данной системе и зависит от ряда условий способа работы, качества и активности сорбента, толщины слоя, качества растворителей, количества нанесенного вещества, длины пробега растворителей, положения стартовой линии и почти не зависит от температуры [28]. Для [c.7]

На стартовую линию пластинки с закрепленным слоем окиси алюминия наносят 0,02 мл раствора стандартного образца эргокальциферола в хлороформе для наркоза, содержащего в 1 мл 1,25 мг (50 000 МЕ) эр-гскальциферола и 0,04 мл раствора препарата в хлороформе для наркоза (1 1, по объему). Пластинку немедленно помещают в хроматографическую камеру с хлороформом для наркоза, к которому добавлено несколько капель диметилформамида (4—5 капель на 100 мл). Когда фронт растворителя пройдет на 10—12 см, пластинку вынимают и опрыскивают раствором хлорида сурьмы в хлороформе, содержащим 2% ацетил хлорида. На хроматограмме проявляется основное пятно эргокальциферола, окрашенное в оранжевый цвет. Между этим пятном и стартовой линией допускается появление только одного дополнительного пятна. [c.627]

Подставку помеш ают в камеру-зксикатор, на дно которого налит раствор кислоты. Следят, чтобы уровень кислоты был ниже нанесенных на стартовую линию пятен хроматографируемого соединения. Через 20 мин хроматограмму вынимают из эксикатора, карандашом отмечают фронт растворителя п переносят на фарфоровый вкладыш эксикатора с концентрированным раствором аммиака. Проявляются пятна 4-нитрофенолята аммония лимонно-желтого цвета. [c.221]

Хроматографирование проводят в режиме аналитического разделения. На стартовую линию пластинки наносят несколько проб одной и той же смеси, или же пробу наносят сплошной полосой по всей стартовой линии. В последнем случае на хроматограмме получают не пятна, а полосы, которые и удаляют. Размеры пластинок увеличивают до 40X100 см. После проявления и фиксации пятна удаляют с пластинки, собирая вместе сорбент, содержащий одно и то же вещество. Затем производят экстракцию вещества с сорбента. [c.128]

Если при помощи подвижной фазы выбранного состава не удается разделить анализируемую смесь, прибегают к способу двумерной хроматограммы. Для получения двумерной хроматограммы применяют квадратные листы бумаги размером 20X20, 30X30 или 40X40 см. В начале опыта каплю исследуемого раствора наносят на бумагу в ее левом углу на расстоянии 5 см от краев (рис. 11.5, а). После высушивания образовавшегося пятна бумагу помещают в сосуд для хроматографирования, опускают нижний край бумаги в один из выбранных растворителей и производят хроматографирование восходящим способом. После того как фронт подвижной фазы достигнет заданного предела в верхней части бумаги, хроматографирование прекращают, бумагу высушивают и поворачивают ее на 90° против часовой стрелки. При этом место нанесения капли исследуемого раствора окажется справа, а линия, по которой происходил подъем зон анализируемых веществ, образует новую стартовую линию (рис. 11.5,6). В таком положении бумагу помещают снова в сосуд для хроматографирования и опускают ее нижний край в подвижную фазу иного состава и хроматографируют по восходяще.му методу. По достижении фронтом новой подвижной фазы заданной высоты хроматографирование прекращают, бумагу высушивают и проявляют. Получают двумерную хроматограмму такого типа, как изображено на рис. 11,5, в. Двумерная хроматография значительно расширяет возможности распределительной ЖЖХ. [c.219]

Важной характеристикой в бумажной хроматофафии является величина Л/ = f Jfx, где / - смещение зоны компонента Л -смещение фронта растворителя (рис. 24.1). В начальный момент времени хроматофафируемая проба Л наносится на начальную (стартовую) линию бумажной полоски, которую погружают нижним концом в подвижную фазу (растворитель). При движении по бумаге растворитель увлекает компоненты пробы, и они движутся с разной скоростью, определяемой коэффициентом распределения вещества между подвижной и неподвижной жидкими фазами. Если компоненты окращены, через некоторое время на хроматограмме можно будет увидеть отдельные цветные пятна. Компонент 1 будет иметь Л/, = / /Л. компонент 2 - [c.293]

При восходящей хроматографии стартовая линия должна быть на расстоянии 15—20 мм от поверхности жидкости. На двумерную хроматограмму наносят пятно диаметром около 5—8 мм, содержаи1,ее от 0,3 до 1 мг вещества. Схема одномерной хроматограммы приведена на рнс. 435. [c.468]

Получение н анализ плоскостных хроматограмм. На полоске хроматографической бумаги или на тонком слое сорбенга проводят острым карандашом стартовую линию на расстоянии 1 см от нижнего края бумаги (пластинки). Пробу наносят микропипеткой на линию старта. Диаметр пятна [c.334]

Посторонние примеси. Проводят определение, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве адсорбента силикагель Р4, а в качестве подвижной фазы смесь 5 объемов 1-бутанола Р, 4 объемов воды и 1 объема уксусной кислоты ( 300 г/л) ИР. Наносят отдельно на пластинку по 5 мкл каждого из трех растворов в метаноле Р, содержащих (А) 40 мг испытуемого вещества в 1 мл, (Б) 0,40 мг испытуемого вещества в 1 мл и (В) 0,40 мг бефения оксинафтоата СО в 1 мл. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, дают ей высохнуть на воздухе и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 и 365 нм). При 254 нм видны два основных пятна на хроматограммах растворов А, Б и В, в то время как при 365 нм флуоресцируют только пятна, близкие к фронту растворителя. Любое дополнительное пятно, видимое на хроматограмме, полученной с раствором А, кроме двух основных пятен, не должно быть более интенсивным при рассмотрении при двух длинах волн, чем пятно, расположенное ближе к стартовой линии при хроматографировании раствора Б. [c.56]

В круглодонную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,5 г порошка корня женьшеня, прибавляют 10 мл 95 % спирта и нагревают с обратным холодильником на плитке в течение 1 ч, поддерживая умеренное кипение. Извлечение охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр 0,02 мл фильтрата микропипеткой наносят на стартовую линию пластинки Силуфол и хроматографируют восходящим способом в системе растворителей хлороформ — метиловый спирт — вода (61 32 7). Насыщение камеры не менее 2 ч. Когда фронт растворителей пройдет до конца пластинки, ее вынимают, опрыскивают 20 % спиртовым раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты и нагревают в сушильном шкафу при 100—110°С в течение 10 мин. На хроматограмме должны проявиться пятна розового цвета с Rf от 0,2 до 0,7 (панаксозиды). [c.349]

Ход анализа. Навеску дипина-С растворяют в хлороформе и наносят на стартовые линии полосок хроматографической бумаги Шириною 15 мм. Высушивают на воздухе 10 мин и хроматографируют в бутаноле , насыщенном 1,5 н. NH4OH, в течение 18—20 ч методом восходящей хроматографии. Затем полоску высушивают при 130 С в Сушильном шкафу, опрыскивают раствором нингидрина (2,0 г нингидрина + 2 ял ледяной уксусной кислоты в 100 мл ацетона). Хроматограмму после опрыскивания. помещают в сушильный шка(р при 120-130° С при этом проявляется пятно дипина с Rf = 0,5—0,55. [c.66]

Ход разделения. На стартовую линию пластинки наносят раствор до 450 мкг пробы в метаноле (I) или полосой раствор 120— 150 мг пробы в метаноле объемом до t,5 мл (II). Элюируют по вое-ходяш,ему способу смесью м-гексан—aцeтoн, подсушивают при комнатной температуре и помещают в камеру, насыщенную парами ода. На пластинке с силикагелем в случае (I) проявляются четко отделенные в виде двух круглых пятен спирты и гликоли. Углеводороды располагаются в виде растянутого пятна у линии фронта смеси растворителей. При увеличении пробы форма пятен спиртов и гликолей меняется и на хроматограмме появляются хвосты. При- [c.104]

Поэтому в действительности изотерма адсорбции не линейна она представляет кривую, изобрая енную иа рис. 2, а пятна веществ на хроматограмме резко очерчены сверху и размыты снизу в виде хвостов, обращенных к стартовой линии. Хвосты тем меньше, чем меньше вещества наносится на стартовую линию. [c.10]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология