Обнаружение веществ на бумажных хроматограммах

Обнаружение веществ на бумажных хроматограммах [c.4]

При кислотном гидролизе витамина В з (при 100° в запаянной трубке), помимо отщепления синильной кислоты, выделены 1 мол. фосфорной кислоты, 6 мол. аммиака и вещество, обнаруженное в виде пятна на бумажной хроматограмме, дающее положительную реакцию с нингидрином. Последнее оказалось й -1-аминопропанолом-2, что доказано синтезом и структурным анализом. Строение свободного амина доказано также расщеплением его йодной кислотой до ацетальдегида и формальдегида. [c.681]

Обнаружение веществ на бумажных хроматограммах можно осуществить двумя способами. По первому способу хроматограмму после проявления разрезают на поперечные полосы и каждую из полос анализируют отдельно (см. стр. 477). По второму способу пятна веществ обнаруживают обработкой всей хроматограммы. Последний способ более употребителен. [c.462]

Фотохимические реакции применяются в различных областях аналитической химии, в том числе для качественного обнаружения элементов, для обнаружения и количественного определения элементов и веществ на бумажных хроматограммах, для определения элементов и соединений с применением импрегнированных бумаг, для фотохимического разложения анализируемого материала и удаления мешающих органических веществ и т. д. [c.123]

Развитие и проявление. Каплю пробы наносят на один конец пластинки и получают восходящую хроматограмму по методу, описанному для получения бумажной хроматограммы. Развитие хроматограммы проводят в закрытом сосуде, насыщенном парами проявителя. Пластинку затем сушат и опрыскивают реагентом для обнаружения компонентов или чаще всего подвергают действию паров иода. Коричневые пятна указывают на положение растворенного вещества идентификацию проводят на основе длин пробега. [c.288]

Окрашенные вещества не требуют специального обнаружения, однако подавляющее большинство веществ необходимо сделать видимыми по окончании хроматографического разделения. Обнаружение осуществляют таким же образом, как и при бумажной хроматографии, т. е. опрыскиванием хроматограммы соответствующим реагентом-обнаружителем. В отличие от бумажной хрома- [c.68]

О значении терминов носитель , неподвижная фаза и подвижная фаза уже говорилось. Процесс промывания хроматограммы растворителем — подвижной фазой — называется проявлением хроматограммы. Так как большинство разделяемых веществ бесцветны, был разработан ряд способов обнаружения, при помощи которых можно определить положение бесцветного вещества на хроматограмме. Проявленную фильтровальную бумагу с обнаруженными на ней пятнами веществ называют бумажной хроматограммой. Место, куда наносится раствор разделяемых веществ, [c.444]

При кислотном гидролитическом расщеплении витамина B j при 100° С в 20%-ной соляной кислоте в запаянной трубке, помимо отщепления синильной кислоты, выделяется одна молекула фосфорной кислоты [11], шесть молекул аммиака [11, 27, 88] и вещество, обнаруженное в виде пятнана бумажной хроматограмме, дающее положительную реакцию с нингидрином ill, 88, 89]. [c.585]

Метод бумажной хроматографии широко используется в фармацевтическом анализе. Чаще всего его применяют для оценки доброкачественности лекарственных средств при испытании их на чистоту и обнаружение примесей. Разработаны методики, позволяющие определять подлинность и количественное содержание лекарственного вещества в препарате сравнением бумажных хроматограмм его и стандартного образца (целанид, препараты, содержащие индивидуальные аминокислоты и смеси аминокислот). [c.211]

Люминесцентный качественный анализ часто применяется в Сочетании с другими методами. Например, в хроматографическом методе разделения веществ широко используют люминесцентные реагенты. Наиболее часто прибегают к методу бумажной хроматографии, получая люминесцентное свечение веществ, непосредственно нанесенных на бумагу. В табл. 64 приведены примеры обнаружения некоторых катионов на бумажных хроматограммах с помощью люминесцентного метода анализа. [c.233]

Помимо качественного обнаружения разделяемых веществ на хроматограммах, метод бумажной хроматографии может быть использован и для количественных определений. Существуют две группы методов количественного бумажного хроматографического анализа методы, основанные на вымывании анализируемых веществ, и методы, не требующие удаления анализируемых веществ. [c.354]

Методы обнаружения, вызывающие деструкцию анализируемых веществ. Все реагенты, используемые для обнаружения компонентов сахаров на бумажных хроматограммах (кроме реагентов, требующих промывки хроматограмм), пригодны и для тонкослойной хроматографии. [c.40]

Как отмечалось выше, все описываемые в данной главе тетрапирролы являются сильно окрашенными соединениями, интенсивно поглощающими свет во всем спектральном диапазоне ультрафиолетовой и видимой областей, что значительно облегчает как их качественный, так и количественный анализ. За разделением компонентов в ходе колоночной или тонкослойной хроматографии можно наблюдать визуально, причем таким способом можно обнаруживать менее одного микрограмма вещества. Еще более высокая чувствительность обнаружения характерна для флуоресцирующих соединений, т. е. для большинства не содержащих иона металла порфиринов, желчных пигментов и хлорофиллов. На тонкослойных пластинках флуоресцирующие зоны часто значительно легче увидеть, если слой сорбента смочен растворителем. Интенсивность флуоресценции пятен на бумажных хроматограммах можно увеличить путем опрыскивания последних изооктаном [3]. В обоих случаях для визуального обнаружения достаточно нанограммовых количеств веще- [c.204]

Биоавтография является вариантом бумажной хроматографии, когда рост бактерий используется как высокочувствительный индикатор для выявления положения определенных веществ на хроматограмме. Метод имеет преимущества специфического определения веществ с биологической активностью, чего лишены химическая и радиоизотопная системы их обнаружения. Он применим при определении положения на хроматограммах факторов роста из супернатантов культур или клеточных экстрактов, когда концентрация этих факторов настолько низка, что их нельзя обнаружить другими обычными методами. Например, с помощью биоавтографии можно определить на хроматограмме 5—10 нг фолиевой кислоты. Примеры использования биоавтографии для определения факторов роста в клеточных экстрактах приведены в работе [15]. Биоавтографию широко используют также в фармацевтической промышленности для обнаружения антибиотиков на бумажных хроматограммах [22]. [c.367]

Обнаружение зон. Для обнаружения соединений, флуоресцирующих при облучении светом, применяют физические, но чаще всего химические методы обрабатывают хроматограмму после разделения веществ газами аммиаком, бромом, иодом — или опрыскивают реагентами, которые применяют в бумажной хроматографии. Для обнаружения биологически активных соединений (витаминов, анти [c.358]

Радиохимическая чистота может быть исследована различными методами, но наиболее важными из них являются бумажная хроматография и тонкослойная хроматография (см. с. 92—97). После завершения разделения на хроматограмме определяют распределение радиоактивности. Количество вещества, наносимого на хроматограмму, часто крайне мало (вследствие высокой чувствительности обнаружения радиоактивности), и поэтому надо быть особенно осторожным в интерпретации результатов в связи с возможностью возникновения артефактов. Кроме хроматографии, для разделения может быть использован электрофорез (см. с. 114—118). Как упоминалось выше, иногда может оказаться полезным добавление к самому радиофармацевтическому соединению или к ожидаемым примесям носителей, т. е. соответствующих нерадиоактивных соединений. Существует, однако, опасность, что прибавленный неактивный носитель радиоактивного фармацевтического вещества может взаимодействовать с радиохимической примесью, что в свою очередь может привести к заниженной оценке этих примесей. Другой подходящий метод— наблюдение за биологическим распределением инъецированного радиофармацевтического вещества в испытании на животных. [c.83]

Если перечисленные способы обнаружения оказались неэффективными, необходимо пожертвовать частью слоя. Используется прием, заимствованный из бумажной хроматографии основную часть хроматограммы закрывают, оставляя открытыми узкие полосы по обеим сторонам. Эти полоски обнаруживают подходящим реагентом. Рекомендуют разграничивать эти полосы от основной части хроматограммы, чтобы предупредить возможное просачивание раствора реагента в основной слой. Если по ходу обнаруж ения хроматограмму необходимо нагревать, то закрытую часть слоя покрывают асбестовой, пластиной, а свободные боковые участки хроматограммы после опрыскивания обнаружителем нагревают под инфракрасной лампой. Чтобы быть уверенным в том, что зоны веществ, обнаруженные по краям пластинки, находятся на том же уровне по всей длине слоя, необходимо работать с качественными слоями, равномерно нагруженными на старте разделяемой смесью и проявленными в камере, насыщенной парами растворителя. Можно также пользоваться и таким приемом, при котором обнаруживают предварительную, вспомогательную хроматограмму, а полученные значения Яр переносят вслепую на препаративный слой. Этот способ, однако, требует строжайшего [c.137]

Поскольку бумажную и тонкослойную хроматографию применяют в сочетании с колоночной хроматографией, например для проверки гомогенности отдельных компонентов, биоавтографию можно считать общим методом обнаружения антибиотиков. Биоавтография основана на способности антибиотиков подавлять развитие чувствительных к ним штаммов. В результате разделяемые вещества обнаруживаются на хроматограмме по зонам подавления. Более подробно эти вопросы рассматриваются в специальной литературе [3, 4]. [c.204]

С этой целью в случае колоночной хроматографии вытекающую из колонки жидкость разделяют на малые фракции и определяют концентрацию содержащегося в них вещества. Детектирование можно осуществлять с помощью цветных реакций, проточных рефрактометров, фотометров, поляриметров и т.д. Для проявления бумажных или тонкослойных хроматограмм бумагу или пластинку опрыскивают какими-либо проявляющими реагентами, образующими с веществами окрашенные соединения. В ряде случаев пятна веществ на хроматограмме можно увидеть в УФ-свете. Хроматографической характеристикой вещества служит величина постоянная для каждого вещества в определенной системе растворителей и представляющая собой отношение длины пробега пятна веи ества на хроматограмме к длине пробега фронта растворителя. Вещество можно выделить из хроматограммы в индивидуальном виде, экстрагируя из пятна. В газовой хроматографии для обнаружения выходящего из колонки вещества применяются иламенно-ионизационные детекторы или детекторы теплопроводности (катаро-метры). Хроматографической характеристикой вещества в этом методе является время задержки его на неподвижной фазе (время удерживания), а также задерживаемый на ней объем, отнесенный к объему подвижной фазы (удерживаемый объем), и иногда — путь, пройденный на неподвижной фазе, также отнесенный к пути, пройденному подвижной фазой (значение / /). Выделение получаемых в процессе газовой хроматографии индивидуальных компонентов возможно вымораживанием их из соответствующих газообразных фракций. [c.30]

Время зкспозиции определяется активностью разделяемых веществ, видом и энергией излучения изотопа, используемого для метки, и требуемым результатом. Достаточного почернения пленок достигают, если за время экспозиции на 1 см попадает 1—10 миллионов -частиц (в зависимости от изотопа) [23, 71]. При работе с радиоактивным углеродом следует принять в качестве эмпирического правила, что количества вещества, которые на счетчиках Гейгера — Мюллера дают удвоенное значение фона, вызовут значительное почернение рентгеновской пленки при более чем двухдневной экспозиции. В случае бумажных хроматограмм обнаружение радиоактивных углеродных соединений с помощью рентгеновских пленок является в 10—100 раз менее чувЬтвительным. [c.68]

Метод ТОНКОСЛОЙНО хроматографии заключается в следующем на одну сторону небольшой стеклянной пластинки наносят тонкий слой сорбента. На такой слой, так же как на бумагу в бумажно хроматографии, на стартовую линию наносят пробы веществ и их смесей и край пластинки, ш же стартовой линии, погружают в систему растворителей. По мере продвижения жид- ости по пластин <е происходит разделение смеси веществ. Гранхщу подъема жидкости или Л Н 1Ю фронта отмечают, пластинку сушат и проявляют подобно бумажной хроматограмме, для обнаружения веществ в виде окрашенных пятен. Отмечают, как указано на рис. 1, положение пятен, отвечающих исследуемым веществам и находящихся между линией старта и линией фронта ж д-кости. Для этого измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии (отрезок АБ). Далее определя от расстояние от линии фронта жидкости до стартово точ и (отрезок АВ). Отношение расстояния от стартовой линии до центра пятна (отрезок АБ) к расстоянию от стартово линии до линии фронта (отрезок АВ) обозначается через константу характеризующую положение вещества на данной хроматограмме. Таким образом, величина 7 / = = АБ1АВ характерна для данного соединения на данном сорбенте и в данной системе и зависит от ряда условий способа работы, качества и активности сорбента, толщины слоя, качества растворителей, количества нанесенного вещества, длины пробега растворителей, положения стартовой линии и почти не зависит от температуры [28]. Для [c.7]

Очень красивые хроматограммы получаются при исследовании вытяжек листьев другого цвета, например красных (краснокочанной капусты, лесного бука и т. д.)- Обнаружение на этих хроматограммах зеленых и желтых пятен покажет нам, что в таких листьях окраска красителей группы хлорофилла перекрывается интенсивной красной или фиолетовой окраской аи-тоцианииов. В цветках васильков содержатся, например, фиолетовый цианидин и красный пеларгонидин. Оба эти вещества входят в состав природных красящих веществ ряда антоцианинов. Для их разделения цветы обрабатывают спиртом. Полученный раствор, содержащий эти красители, наносят на бумагу для хроматографии. После высушивания язычок бумажной полоски погружают в 2 и. соляную кислоту. [c.326]

Очистка бумаги. В наиболее широко применяемом методе обнаружения хлорированных пестицидов на бумажных хроматограммах используется опрыскивание раствором нитрата серебра Для эффективного применения этого реактива необходимо уда.яить из бумаги вещества, реагирующие с серебром, до ее использования для хроматографирования. [c.69]

Заканчивая обзор методов определения элементов периодической системы по группам, следует указать на описанный во многих работах новый прием в аналитической химии — метод бумажной хроматографии (гл. V, стр. 63), иримененный для обнаружения и разделения катионов. Готовую хроматограмму обрызгивают раствором оксихинолина [147—149] или заблаговременно им пропитывают буд1агу, на которой проводят хроматографирование [148, 150]. Флуоресценция образовавшихся комплексов выявляет местоположение пятен катионов, а это позволяет определить для них значение По численному значению определяют, какому из катионов принадлежит данное пятно даже и в том случае, когда флуоресцепция отдельных пятен сходна. В зависимости от количества флуоресцирующего компонента, нанесенного в анализируемой капле, пятна одного и того же вещества различаются по размеру и по интенсивиости флуоресценции. [c.181]

При изучении биосинтеза пиридомицина и феназиновых антибиотиков использовали оригинальный метод для обнаружения предшественников антибиотиков. Культуральную жидкость продуцента хроматографировали, хроматограмму разрезали на небольшие куски, которые затем помещали около колонии продуцента на агар, засеянный тест-микробом. В том случае, если данный участок хроматограммы содержал предшественник, зона подавления тест-микроба вокруг колонии продуцента увеличивалась [78, 79]. Таким методом на хроматограммах были обнаружены четыре вещества, стимулирующих биосинтез пиридомицина. После препаративного выделения при помощи бумажной [c.44]

В период 1945—1954 гг. автор книги и сотрудники занимались выделением и идентификацией пахучих веществ, присутствующих в соках цитрусовых. Поскольку содержание таких веществ во фруктах чрезвычайно мало, нам необходимо было разработать микрохроматографический метод очистки и идентификации терпенов. Мы попытались воспользоваться в этих целях бумажной хроматографией, однако вскоре стало очевидно, что она не годится из-за ограниченной адсорбционной способности бумаги. Чтобы повысить адсорбционную способность бумаги, мы попробовали пропитывать ее различными реактивами. В частности, мы первыми ввели пропитку бумаги кремневой кислотой [31]. Полученные результаты оказались довольно обнадеживающими, однако приготовление пропитанной бумаги было весьма трудоемким, а ее емкость все еще недостаточной. Примерно в это время появилась статья Мейнхарда и Холла [30], и нам пришла мысль, что в принципе можно разработать метод, соединяющий в себе преимущества колоночной и бумажной хроматографии. С этой целью необходимо 1) устранить фильтрующий материал, чтобы получить более сильный адсорбент и более твердую поверхность возможно, для этого нужно более тщательно подобрать связующий материал, который бы не давал трещин 2) использовать другие адсорбенты, в особенности кремневую кислоту, т. е. силикагель 3) использовать в качестве адсорбента только материал, проходящий через сито в 100 меш (149 мкм) 4) использовать в качестве неорганического связующего алебастр вместо крахмала, поскольку последний может мешать обнаружению, образуя с проявляющим реактивом окрашенное соединение 5) использовать полоски и пластинки больших размеров, чтобы обеспечить более эффективное разделение 6) проводить элюирование покрытых адсорбентом пластинок в закрытой емкости восходящим током растворителя, как это делают в бумажной хроматографии 7) использовать покрытые адсорбентом пластинки для двумерной хроматографии и 8) применять для опрыскивания хроматограмм такие реактивы, которые позволили бы не только обнаружить разделенные компоненты, но и определить типы присутствующих соединений. [c.19]

Рис. 2 относится только к тиосульфату, тиомочевине и тиозинамину. Эти три вещества могут быть разделены за весьма короткое время (порядка 30 мин.) при помощи н-бутанола в качестве растворителя, хотя изображенная хроматограмма получена после 3-часового разделения. Рис. 2 позволяет сделать несколько интересных заключений. Во-первых, он показывает, что Rw данного вещества на одной и той же хроматограмме не зависит от концентрации. Во-вторых, он показывает, как и следовало ожидать, ЧТО интенсивность окраски пятна зависит от концентрации, т. е. хроматография может служить методом полуколичественного анализа. Наконец, зная концентрацию каждого вещества в исходной смеси, можно составить себе некоторое представление о минимальном количестве каждого сенсибилизатора, которое еще может быть обнаружено. Исходная смесь содержала эквимолекулярные количества трех сенсибилизаторов, а именно 0,33% тиосульфата (0,15% тиосульфат-иона), 0,1 % тиомочевины и 0,15% тиозинамина. Пятна лежат на пределе чувствительности для раствора, разбавленного в 20 раз. Следовательно, предельные концентрации, которые еще могут дать положительный результат на хроматограмме, составляют 0,008% для тиосульфата и тиозинамина и 0,005% для тиомочевины. Чтобы выразить эти концентрации в весовых единицах твердого вещества, необходимо знать объем капель, нанесенных на бумажную полосу. Измерением объема жидкости, израсходованной для нанесения большого числа капель равной площади, было найдено, что объем капли равен 1,3 v-л. Следовательно, минимальные весовые количества веществ, обнаруженные этим способом, равны 0,2 лгдля тиосульфата натрия, 0,07 для тиомочевины и 0,1 рг для тиозинамина. [c.124]

Для обнаружения бесцветных веществ на бумажных или тонкослойных хроматограммах используют методы неразру-щающего контроля (например, УФ-облучение или выдерживание в атмосфере, насыщенной парами иода), а также обработку (в частности, опрыскивание) хроматограмм более или менее специфическими обнаруживающими реагентами. До или после обнаружения зон присутствующие в них вещества можно соответствующим образом элюировать и далее использовать, например, для количественного анализа. [c.24]

В зависимости от задач анализа и разделения бумажные и тонкослойные хроматограммы могут оцениваться либо непосредственно на слое, т. е. in situ (см. выше пп. 1—8), либо после элюирования разделенных веществ (п. 9), либо после обработки целлюлозных материалов или разделенных комплексов (п. 10). Для обнаружения разделенных соединении применяются самые различные методы, используемые в неорганическом анализе. [c.89]