Клетки ТК грызунов

До недавнего времени мало было известно о локализации генов в хромосомах человека. Исключение составляли лишь признаки, сцепленные с полом (гл. 1, разд. В, 4), которые могут быть локализованы в Х-хромосомах. Ряд исследований, проведенных в последнее время, ознаменовались успехами и привели к систематическому картированию большого количества генов человека [169—171]. Наиболее важным оказался при этом метод слияния соматических клеток (дополнение 15-Д). Для слияния человеческих лимфоцитов с клетками грызунов часто используют инактивированный вирус Сендай, обладающий способностью вызывать сначала адгезию, а затем слияние клеток. Из гибридных клеток, полученных в результате слияния человеческих клеток с клетками мыши или хомяка, можно получить линии клеток, ядра в которых также сливаются. Хотя такие клетки могут размножаться, давая много поколений, тем не менее они склонны утрачивать при этом хромосомы, особенно те из них, которые ведут свое происхождение от клеток человека. Наблюдая за утратой определенных биохимических признаков, например некоторых ферментов, специфических для человека (которые могут быть отделены от ферментов хомяка методом электрофореза), можно установить наличие или отсутствие определенного гена в данной хромосоме. Очевидно, что для этого необходимо одновременно следить за потней хромосом на каждой стадии эксперимента. Новые методы окрашивания позволяют идентифицировать каждую из 26 пар хромосом человека. В настоящее время разрабатываются методы точного генетического картирования применительно к культуре клеток [171]. [c.268]

Вирус Клетка грызуна Сендай [c.296]

Использование таких приемов отбора позволило получить гибриды не только путем слияния линий клеток одного вида, о и межродовые гибриды клеток человека с клетками мыши м крысы. Эти линии клеток грызунов/человека нестабильны, тричем легче они теряют хромосомы человека, так что после тридцати делений в процессе выращивания у них остается всего семь из 24 хромосом человека, изначально присутствовавших в гибридной клетке. Этот процесс элиминации хромосом был Применен при картировании генома человека, поскольку таким путем удается быстро локализовать определенные гены на хромосомах. [c.313]

Продолжительная обработка клеток колцемидом с последующим воздействием цитохалазином В — один из наиболее простых способов индуцировать микронуклеацию [20]. Однако для каждого случая необходимо подобрать концентрацию реагентов и время экспозиции. Если этот метод окажется неудовлетворительным, можно воспользоваться двумя другими вариантами. Один из них — создание промежуточной донорной клетки. Недавно нам удалось получить гибридные соматические клетки человек—грызун и использовать их в качестве донора человеческих хромосом [37]. Гибридные клетки формируют мини-клетки в тех же условиях, что и используемые в качестве родительских клетки грызуна. [c.21]

В общем, в отличие от клеток человеческого происхождения клетки грызунов легко трансформируются либо спонтанно, либо при обработке канцерогенными веществами или онкогенными вирусами (Ponten, 1976) (см. гл. 6). Действительно, Ponten (1976) расценивает мышиные клетки как генетически нестабильные и, таким образом, представляющие малоподходящую модель для изучения многоступенчатого процесса клеточной трансформации. [c.8]

Аденовирусы человека вызывают подострые респираторные инфекции, конъюнктивиты и энтериты. Их большинство реплицируется только в человеческих клетках, однако серотипы 2 и 5 реплицируются в клетках хомячка, а серотип 2 может также реплицироваться в клетках крысы. Некоторые серотипы аденовирусов могут индуцировать опухоли после инокуляции новорожденным хомячкам. Аденовирусы человека разделены на три большие группы в зависимости от их относительной онкогенности для новорожденных хомячков, в частности, онкогенная группа А, слабо онкогенная группа В и неонко-генная группа С. Члены всех трех групп, однако, способны трансформировать клетки грызунов in vitro, но с низкой эффективностью и низкой частотой. [c.202]

Нами была проведена серия работ по трансфекции разных типов клеток крысы рекомбинантными плазмидами, содержащими регуляторные гены ВИЧ tat и е/(Шугурова и др., 1997, 2000 Shugurova et al., 2002). Была поставлена задача изучить как клеточно-специфические, так и возможные видоспецифические эффекты (по сравнению с аналогичными клетками человека) указанных регуляторных вирусных генов. Известно, что в клетках грызунов имеются многочисленные препятствия для размножения HIV (Beniasz, ullen, 2000), однако это обстоятельство, на наш взгляд, должно было только способствовать изучению более тонких механизмов генерализированного взаимодействия продуктов вирусных генов с клеточным метаболизмом. [c.152]

Таким образом, полученные нами результаты в экспериментах in vitro, указывают на плейотропное, но в целом противоположное действие регуляторных генов nef 11 tat на непермиссивные для HIV-1 клетки грызунов разного происхождения. При этом некоторые эффекты этих генов специфичны для определенных типов клеток. [c.156]

Среди этого многообразия векторов наиболее изученными и удачно используемыми являются векторы, сконструированные на основе элементов вируса Эпштейна-Барр. Преимущество этих векторов заключается в их высокой митотической стабильности, а также в низкой частоте перестроек последовательностей вектора. Эти векторы способны к автономной репликации в клетках приматов, а также в клетках грызунов (Krysan, alos, 1993 Tomiyasu et al.,1998). [c.222]

Возможность стабильного поддержания рекомбинантных конструкций на основе элементов EBV, несущих репортерный ген -галактозидазы, была продемонстрирована для клеток грызунов (Tomiyasu et al., 1998). Был показан высокий уровень экспрессии гена -галактозидазы во всех клеточных линиях при этом его экспрессия была продемонстрирована также и ш vivo, при непосредственной инъекции плазмид в сердце крысы. Особенностью этой работы является использование непермессивных для EBV клеток-ми-шеней, в которых трансгены были не способны к автономной репликации. Несмотря на это, трансгены обладали большей митотической стабильностью, чем контрольные конструкции, за счет чего обеспечивался повышенный уровень репортерного продукта. Косвенно эти данные указывают на функционирование FR-элемента ori Р и в клетках грызунов. [c.223]

ААТААА (разд. 8.3). В ходе работы с этими вирусами были открыты интроны и сплайсинг (разд. 8.5), а также белки, регулирующие транскрипцию, например Spl (разд. 8.3). И до сих пор эти вирусы остаются весьма ценной модельной системой при изучении новых аспектов молекулярной генетики эукариот и используются для конструирования эукариотических векторов. Например, исследуются механизмы репликации вирусных геномов созданы системы, в которых такая репликация осуществляется in vitro. Эти, а также другие ДНК-содержащие вирусы могут служить моделями для изучеиия дифференцировки и развигия сложных организмов, поскольку их жизненный цикл состоит из упорядоченных во времени событий, а кроме того, для них характерны альтернативные способы поведения. Например, вирус SV40 размножается в определенных клетках приматов, но в клетках грызунов он не реплицируется. Вместо этого его геном встраивается в клеточную ДНК, вызывая злокачественное перерождение (рис. 1V.4). [c.346]

Причина, по которой вирусы в непермиссивных клетках или инактивированные вирусы могут индуцировать интерферон, вероятно, заключается в том, что они содержат двухцепочечную РНК, способную из них высвобождаться. По-видимому, именно поэтому в клетках грызунов инактивированный ультрафиолетом реовирус в 200 раз более эффективен как индуктор, чем неинактивированный, поскольку первый распадается в зараженной клетке с освобождением двухцепочечной РНК [96], тогда как во втором двухцепочечная РНК всегда находится в составе вирусных частиц, а не в свободном состоянии [79]. Кинетика индукции интерферона инфекционным реовирусом сходна с его индукцией другими вирусами при 37°С синтез интерферона достигает максимума между 12 и 16 ч после заражения. В отличие от этого облученный ультрафиолетом реовирус индуцирует максимальную продукцию интерферона через 2—4 ч после заражения. Индукцию интерферона облученными ультрафиолетом или инактивированными прогреванием миксо-вирусами и парамиксовирусами объясняют следующим образом. Известно, что нормальные миксовирусы и парамиксовирусы содержат негативную РНК, но, по-видимому, некоторые вирусные частицы, количество которых не превышает 1—2%, содержат позитивную РНК, способную при высокой множественности заражения (которая используется при синтезе интерферона) гибридизоваться с негативной РНК. Образующаяся при этом в небольших количествах двухцепочечная РНК и действует как индуктор интерферона. [c.50]

Механизм действия фторацетапш, применяемого в качестве родентицида. Препарат фторацетата, изготовляемого промышленным способом, применяется как средство борьбы с грызунами. В природе фторацетат обнаружен в одном из южноафриканских растений. Проникнув в клетки, он превращается во фторацетил-СоА в реакции, катализируемой ферментом ацетаттиокиназой [c.506]

Нижняя диаграмма Б) сделана по результатам анализа 50 ядер, выделенных из печени четко видно, что эти ядра распадаются на две основные группы. Меньшая группа ядер характеризуется таким же количеством ДНК, что и ядра почки во второй, менее компактной группе среднее количество ДНК вдвое больше, чем в ядрах первой группы и в ядрах почек. В этом пике сосредоточены тетраилоидные ядра (ядра с двойным хромосомным набором), тогда как в первый пик попадают диплоидные ядра (с нормальным хромосомным набором), такие, которые обнаружены в большинстве других соматических тканей. Поскольку известно, что у грызунов в клетках печени обнаруживается полиплоидия, т. е. наличие ядер с кратным диплоидному набором хромосом, не удивительно, что при микроспектрофотометрическом анализе выявилось два класса ядер. Присутствие тетранлоидных ядер в печени крыс объясняет также, почему при химических анализах содержание ДНК в ядрах печени крыс оказывается гораздо выше [72, 77], чем в других тканях. [c.308]

Являясь сильным окислителем, хлорпикрин, проникая в клетки живых организмов, вызывает в них глубокие изменения. Восстанавливаясь в клетках, он образует ядовитое вещество — гидроксиламин. При вдыхании паров хлорпикрина у животных (грызунов) поражается слизистая оболочка дыхательных путей, происходит свертывание и частичное разрушение крови, ее форменных элементов, наблюдаются резкие изменения в сердце, скелетной мускулатуре, печени, мозгу, почках. У насекомых отмечаются усиление дыхания, декоординация движений, конвульсии. Гибель наступает от удушья при явлениях паралича. [c.183]

Заключение. Препараты вирусов папилломы всегда онкогенны, хотя часто они приводят к образованию доброкачественных опухолей. Аденовирусен, вирусы полиомы и родственные им группы могут убивать клетки, а могут и не причинять им никакого вреда они способны также продуцировать доброкачественные опухоли. Вирусы полиомы индуцируют образование злокачественной опухоли у новорожденных грызунов. Для всех этих вирусов более или ыеиее доказано, что вирусная ДНК частично включается в геном хозяина. Трансформация клеток онкогеннымп вирусами — об.часть интенсивного изучения. С результатами проведенных исследований можно познакомиться в специальном обзоре [108]. [c.273]

Рис. 18.5. Получение гибридной клеточной линии человек-грызун. Человеческие клетки, в данном случае лейкоциты, смешиваются с клетками выбранной линии грызуна в присутствии вируса Сендай. Сначала формируются клетки с двумя ядрами, дикарионы. При слиянии ядер образуются одноядерные гибридные клетки, синкарионы. Если клетки переносятся на селективную среду, то вырастают только гибридные линии. Например, если реципиентная линия клеток грызуна несет ауксотрофность по глицину, используют селективную среду, не содержащую этой аминокислоты. Неслившиеся лейкоциты человека также неспособны пролиферировать в культуре клеток. Каждая выросшая колония клеток содержит полный геном реципиентной клеточной линии грызуна и несколько донорских хромосом человека.

Линии клеток, продуцирующих моноклональные антитела, обычно получают от грызунов, например мышей и крыс, дающих хороший иммунный ответ на иммуноген. Готовят суспензию клеток селезенки этих животных и вызывают их слияние с мие-ломными клетками. Полученные в результате слияния клетки обладают свойствами и тех, и других родительских клеток, сочетая в себе способность к неограниченному размножению, свой-ствеипую миеломным родительским клеткам, со способностью продуцировать специфические антитела, присущей В-лимфоци-там селезенки. Выделение клона клеток, продуцирующих одно антитело, позволяет нарабатывать эти моноклональные антитела в больших количествах. [c.180]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология