Цитохром электроде

Получение комплекса 1П. Все операции проводят на холоде 0... —4° С). Сукцинат цитохром с-оксидоредуктазу, полученную как описано на с. 426, суспендируют в фосфатном буфере (калиевые соли) с pH 7,4 до конечной концентрации белка 5 мг/мл. Суспензию помещают в небольшую трехгорлую колбу, снабженную насадкой для деаэрирования, рН-электродом (комбинированный электрод, пропущенный через герметически закрытый шлиф) и делительной воронкой. Колбу охлаждают в сосуде со льдом, помещенном на магнитную мешалку. [c.429]

Вверху запись поглощения кислорода (кислородный электрод) и запись оптических изменений. Для измерения поглощения цитохрома с был использован чувствительный двулучевой спектрофотометр (основная волна 552 тмк и волна сравнения 540 ммк), Цитохром с более восстановлен в состоянии 3, чем в состоянии 4. Внизу аналогичный опыт с цитохромом Ь (основная волна 4.30 ммк, волна сравнения 410 ммк). Цитохромы Ь более окислены в состоянии 3, чем в состоянии 4. [c.71]

Рис. 39. Зависимости потенциала электрода в системах хинон — гидрохинон (/), метиленовый голубой — лейкоформа (2) и цитохром с- -Ре(111) — цитохром с + Ре(П) (3) от pH.

Описаны системы, в которых катализаторами восстановления кислорода служили пероксидаза и цитохром-с-оксидаза. Перенос электронов с электрода на активные центры фермента осуществляли медиаторы. Потенциал электрода, определяемый в этом случае отношением восстановленной и окисленной форм медиатора, составлял 0,6—0,8 В, что значительно ниже равновесного кислородного потенциала. [c.75]

Систему цитохром с-золотой модифицированный дипиридилом электрод используют в ферментных сенсорах L-лактата [10], оксида углерода [52] и пероксида водорода [27]. Цитохром с из сердца лошади восстанавливают по ферментативной реакции [c.220]

Пять кювет полярографа заполняют раствором, содержащим ,1 М фосфатный буфер (pH 7,6) и цитохром с (100 мкг/мл). Объем раствора в каждой кювете — 2 мл. В пробы с помощью микропипеток добавляют сукцинат в конечных концентрациях 0,3 0,6 1,25 5,0 мМ. Измеряют скорость дыхания в присутствии различных концентраций субстрата. Для этого кювету устанавливают в штативе полярографа, погружают в нее электроды. После установления начального значения тока добавляют 0,05 мл суспензии препарата Кейлина—Хартри (1,5 мг/мл) и регистрируют поглощение кислорода. Во всех пробах рассчитывают скорость дыхания в микромолях поглощенного кислорода за 1 мин на 1 мг белка. [c.436]

Такою же типа ячейки можно использовать для измерения спектральных характеристик веществ, у которых гетерогенный перенос электрона протекает настолько медленно, что прямое превращение на электроде затруднительно или невозможно. В таких случаях используют переносчик электрона, способный ЕС быстрому обме(1у электронами как с электродом, так и с исследуемым субстратом, т е. проводят непрямой электролиз. Зтот метод использовали при определении формальных потенциалов н чисст электронов при восстановлении цитохрома с и цитохром с—оксидазы [174] Изменения в спектрах, наблю-дави1иеся после последовательною кулонометрического генерирования всего Б-10- экв ( ) переносчика электронов, в данном случае катион-радикала 1,Г-диметил-4,4 -бнпирпдилия, представлены на рис 3 36 Другие примеры одновременного определения числа электронов п методами кулонометрин и спектроскопии содержатся в обзоре [162]. [c.141]

Миндт и др. [479] сконструировали датчик на лактаты, представляющий собой платиновый электрод, покрытый тонким слоем фермента и отделенный от раствора полупроницаемой мембраной электрод на глюкозу имеет аналогичную конструкцию. В первом случае был взят фермент цитохром hi, который катализирует образование пируватов. Регенерация фермента в окисленную форму осуществлялась под действием гексацианоферрата(П1) калия, образовавшийся гексацианоферрат(П) калия окислялся на платиновом электроде. Последовательность реакций может быть записана в следующем виде [c.168]

Хотя цитохром 2 катализирует разложение и других субстратов (а-окси-н-бутиратов, а-окси-н-капроатов, а-оксиизокапроатов), их концентрация в биогологических средах на несколько порядков ниже, чем концентрация молочной кислоты, поэтому мешающее влияние пренебрежимо мало. Ингибиторы ферментативной активности цитохрома 2. находятся в биологических средах также в очень низкой концентрации [485, 486] и мало влияют на нее. Большое число метаболитов с восстановительными свойствами, напримф мочевая кислота, глутатион, цистеин, адреналин, аскорбиновая кислота, р-аланин, окисляются или [Fe( N)g] , или на платиновом электроде, и их ток окисления складывается с током, соответствующим окислению молочной кислоты. Поэтому в присутствии этих метаболитов проводить определение молочной кислоты нежелательно. [c.169]

Весьма заманчивым является использование спектроэлектрохимической методики для контроля кулонометрического титрования, в котором электрод, генерирующий титрант, является оптически прозрачным. Для построения кривой титрования измеряют интенсивность поглощения как функцию пропущенного через ячейку количества электричества, которое пропорционально концентрации генерированного титранта. Форма кривой титрования определяется оптическими свойствами системы, величинами нормальных окислительно-восстановительных потенциалов реагирующих веществ, а также числом электронов, участвующих в аналитической реакции. Расчет окислительно-восстановительного потенциала исследуемой титруемой системы производят исходя из формы кривой титрования. Примером удачного сочетания кулонометрического титрования со спектроэлектрохимическим контролем за его ходом служит реакция катион-радикала метилвиологена (MV ) с цитохром-С-оксидазой. Катион-радикал метилвиологена как титрант был электрогенерирован из метилвиологена в спектроэлектрохимической ячейке с прозрачным электродом из двуокиси олова по схеме [c.60]

Взаимодействие цитохрома с с модифицированным дипиридилом золотым электродом протекает, по-видимому, с участием лизиновых остатков на поверхности белка, образующих водородные связи с одним из атомов азота в промоторе. В основе этого предположения лежит сходство поведения рассматриваемой электрохимической системы и цитохрома с при белок-белковом электронном обмене. Известно, например, что полилизин ингибирует реакцию между цитохромом с и его биологическим партнером-цитохромоксидазой. При добавлении полилизина в электрохимическую ячейку, содержащую цитохром с и модифицированный дипиридилом электрод, гетерогенный перенос заряда также ингибируется. Сходным образом модификация поверхностных боковых цепей цитохрома с в равной степени ингибирует как электрохимическую стадию переноса заряда, так и реакцию с цитохромоксидазой [11, 26, 43]. [c.220]

Измерения показали, что электрохимический потенциал в митохондриях и бактериальных мембранах Дцн+ составляет от 230 до 250 мВ, т. е. достаточен для осуществления синтеза АТР. При использовании специальных методик можно получить из липидов соевых бобов или из фосфатидилэтаноламина или фосфатидилсери-на (но не из фосфатидилхолина) плоские мембраны, в которых соответствующим образом ориентирована цитохромоксидаза в таких мембранах выброс протонов происходит только на той стороне, на которой расположен цитохром с, и ДЧ может быть прямо измерено подходящими электродами. У таких грубых препаратов обнаруживали ДЧ л 200 мВ. Подобные наблюдения сделаны и с встроенным в плоскую мембрану бактериородопсином при освещении. [c.449]