Препаративное разделение на листах бумаги

Дальнейшим усовершенствованием является метод двумерной хроматографии на бумаге. Преимущество этого метода основано на том, что вещества имеют различные значения в разных растворителях. Смесь наносят сначала в угол листа фильтровальной бумаги квадратной формы, и производят хроматографирование в одном направлении. Полученные при этом пятна подвергают хроматографическому разделению в другом растворителе, повернув лист бумаги на 90° (т. е. чтобы фронт двигался в направлении, перпендикулярном движению фронта при первом хроматографировании). Для более быстрого разделения применяют метод круговой хроматографии на бумаге анализируемую смесь помещают в центр круглого листа фильтровальной бумаги, вырезают тонкую полосу по радиусу и погружают ее в растворитель. При этом полоска работает как фитиль. Вещества разделяются в виде концентрических кругов. Количество вещества, которое может быть подвергнуто разделению на круглом листе обычной фильтровальной бумаги (ватман № 1), составляет 1—50 мкг, причем скорость перемещения фронта растворителя может быть повышена центрифугированием. При работе с большими количествами веществ, бумага перегружается и образуются шлейфы и хвосты . Меньшие же количества веществ трудно обнаружить. В количествах до 1 мг вещества можно разделять, нанося смесь в виде полос параллельно краю куска бумаги при этом вместо пятен получаются полосы. Для препаративного разделения можно использовать также толстую бумагу (например, ватман № 3). [c.22]

При выделении и очистке бумажная хроматография может использоваться не только как аналитический метод, но и как препаративный. В этом случае хроматографирование проводят или в пачке листов хроматографической бумаги [305], или на одном листе бумаги обычным методом. Препаративная хроматография на бумаге имеет некоторые преимущества перед другими методами легкость подбора условий для разделения, очень простой переход от аналитических опытов к препаративным, возможность работать с минимальными количествами препаратов, методическая простота. Хотя теми же достоинствами обладает и хроматография в тонком слое адсорбента, все же бумажная хроматография удобнее при работе с антибиотиками, так как при помощи биоавтографического метода антибиотики проще выявлять на бумаге, чем на тонкослойной пластинке. В некоторых [c.34]

Мэн с сотр. [251] применяли БХ для препаративного разделения биологических проб. Экстракт из образца почвы в ацетоне наносили в центр листа хроматографической бумаги Ватман № 4, размером 6,3X2,5 см и обрезали два смежных угла листа, чтобы [c.322]

Электрофорез на бумаге является аналитическим и микро-препаративным методом, пригодным для разделения лишь небольших количеств вещества. Без чрезмерного расширения пятна на бумагу обычно можно нанести несколько десятков микролитров раствора. Несколько увеличить это количество можно, если применить более толстую и широкую бумагу. В последнем случае зону наносят в виде длинной полосы, перпендикулярной направлению поля. Но при этом ухудшается разрешение из-за того, что невозможно обеспечить полную однородность условий по всей ширине листа, в результате чего зоны искривляются. Толстая бумага по той же причине дает худшие результаты, чем тонкая. Хотя таким способом можно разделять десятки миллиграммов вещества, все же начиная с таких количеств предпочтительнее использовать блок или колонку. [c.94]

Химический анализ природного соединения, как известно, включает в себя ряд общих процедур, таких, как экстракция, выделение, очистка и определение его химической структуры. Для извлечения неизвестных соединений обычно используют путь ступенчатой экстракции растворителями по мере возрастания их полярности петролейный эфир, бензол, серный эфир, этилацетат, спирты и вода. Преимуществом спиртовых экстракций перед водными является низкая точка кипения этих растворителей, однако в этом случае возможно расщепление эфирных связей, например эфиров фенолов с сахарами (Swain, 1965). Недостатки водной экстракции извлечение большого количества посторонних веществ, невозможность предотвращения действия всех ферментов, функцию которых не может устранить даже кипячение. Дифференцированный подход следует избирать и при выборе метода разделения веществ. Разделение на бумаге Ватман 3 ММ удобно применять в том случае, когда нужно получить до 0,5 г вещества, разделение на колонках — для выделения больших количеств вещества. Ниже приводится схема препаративного выделения, использовавшаяся для изолирования и идентификации природного ингибитора роста капусты (фенольное вещество, 12 мг из 500 г листьев), ивы (халконглюкозид, 75 мг из 1000 г листьев), гороха (кверцетин-гликозил-кумарат, 500 мг, п-кумаровая кислота, 10 мг) и кукурузы (л-кумаровая кислота, 4 мг из 250 г листьев). Из листьев гороха была выделена также кофейная кислота. [c.34]

Метод пептидных карт на одном листе бумаги сейчас следует рассматривать скорее как аналитический, чем как препаративный. При препаративном разделении пептидов в тех же условиях обычно смесь пептидов последовательно разделяется методами электрофореза и хроматографии в несколько приемов, каждый раз нанося пробу во всю ширину бумаги. После проведения электрофореза вырезают полосы бумаги таким образом, чтобы в середине и по трем краям оставались узкие полоски бумаги. После проявления этих полосок нингидрином вырезанные полосы вставляются обратно, и на них карандашом отмечаются пептидные зоны. Пептиды соответствующих зон с нескольких листов бумаги после смывания объединяются и хроматографируются опять же на полном листе (каждая объединенная зона отдельно). Подобные трудоемкие операции связаны с необходимостью иметь достаточное количество вещества для дальнейшего анализа. Повышение чувствительности методов анализа концевых групп даст возможность определять всю аминокислотную последовательность пептида после получения пептидной карты на одном листе бумаги. Для анализа К-концевых аминокислот уже разработан [8] флуоресцентный метод с 1-диметиламинонафталин-5-сульфонилхлЬри-дом, который в сто раз чувствительнее (достаточно 10 — 10" мкмоль пептида) обычно используемого метода с динитро-фторбензолом [9]. [c.237]

Мажор и Барри [252] применяли хроматографию на бумаге для препаративного разделения экстрактов из фруктов и овощей [252]. Исходный экстракт наносили на лист бумаги Ватман № 1 (20X20 см) на расстоянии 2,5 см от нижнего края. В качестве элюента использовали ацетонитрил. Когда фронт элюента поднимался до уровня, отстоящего на 2,5 см от верхнего края бумаги, хроматограмму вынимали из камеры, высушивали и повторяли процесс вновь. В результате инсектициды поднимались к верхнему краю листа, в то время как жиры и воскообразные соединения оставались внизу. Лист бумаги поворачивали на 180° так, чтобы инсектициды оказались у нижнего края листа. Рядом с зонами инсектицидов наносили стандарты и проводили разделение по методике, предложенной Милсом [253]. [c.323]

В ряде сообщений Митчела с сотр. [255—268] описаны методики разделения на бумаге химически чистых и технических смесей пестицидов, которые при использовании соответствующего предварительного препаративного разделения можно применять для анализа экстрактов из растений и почвы. Значения Rf ИЗ (в основном хлорсодержащих) пестицидов, полученные при их разделении на бумаге водными и неводными элюентами, сведены в таблицы [255]1 Чаще других использовали соевое масло в качестве неподвижной фазы и смесь 2-метоксиэтанол — вода (75 25) в качестве водного элюента в неводных системах применяли 2-фен-оксиэтанол (неподвижная жидкая фаза) и 2,2,4-триметилпентан (элюент). Обычно используемую хроматографическую бумагу Ватман № 1 предварительно смачивали водой и высушивали на воздухе. Неподвижную фазу наносили на бумагу, погружая ее в сосуд с соответствующим растворителем. После высушивания через лист бумаги пропускали элюент в течение 4 /4 ч в камере для разделения. При разделении в неводных системах лист бумаги сразу же. после нанесения неподвижной фазы переносили в камеру с элюентом, который перемещался по бумаге в течение 85 мин. После того как фронт растворителя поднимался к верхнему краю листа, его вынимали из камеры и отмечали положение фронта растворителя. Затем листы бумаги подвешивали в сушильном шкафу на всю ночь. [c.324]

Для аналитических целей используют бумагу типа ватман № 1. Препаративные разделения проводят на более толстых листах хроматографической бумаги (ватман № ЗММ или 17). В большинстве случаев предварительная обработка бумаги не является необходимой, однако некоторые разделения существенно улучшаются при использовании бумаги, пропитанной неорганическими комплексообразующими агентами. Этот прием становится чрезвычайно действенным при хроматографии смесей-полиолов, а также смесей, содержащих сахара и образующиеся из них полиолы. Зачастую такие смеси, не поддающиеся анализу на обычной бумаге, можно разделить на хроматографической бумаге, предварительно пропитанной боратом или вольфрама-том. Ангус и др. [388] исследовали поведение большого числа полигидроксильных соединений, включая сахара, полиолы и циклиты, при хроматографии на бумаге, пропитанной вольфра-матом натрия (pH 6 или 8). В частности, была продемонстрирована возможность разделения четырех альдопентоз и соответствующих им трех полиолов, а также о-глюкозы, о-сорбита,. D-галактозы и дульцита. Оказалось, что в этих условиях степень разрешения выше, чем при использовании альтернативного метода, который предполагает введение комплексообразующего агента в систему растворителей для хроматографии [389]. [c.61]

Методика работы. Для разделения пептидов в количествах до 15 мг (15 мкмолей) обычно используют ватман № 1 или № 4. Для разделения больших количеств (до 50 мг) применяют ватман ЗММ. Предварительно следует промыть бумагу в течение ночи той системой растворителей, которая будет использована в дальнейшем. Для промывания применяют методику нисходящей хроматографии. Перед нанесением проб промытую бумагу высушивают. Для препаративной работы более удобна не восходящая, а нисходящая хроматография, так как последнюю можно вести более длительное время, что улучшает-качество разделения. Если растворителю дают возможность стекать с листа бумаги, то на нижнем крае листа следует заблаговременно вырезать зубчатые выступы, улучшающие стенание растворителя с бумаги. Вещество, подлежащее разделению по возможности освобожденное [c.120]

Примечания. Тип бумаги Ц — целлюлозная (см. разд. 122), С — стекловолокнистая (см. разд. 125). 1—4. Стекловолокнистая бумага приготовлена без добавок свяаующего, отличается высокой скоростью движения растворителя и допускает проявление хроматограмм с помощью серной кислоты при нагревании до 200—300 °С. Бумага № 1 — с небольшим содержанием сорбента, рекомендована для хроматографии липидов и других неполярных соединений. Содержание сорбента в бумагах № 2—4 значительно больше, причем в направлении к одному краю листа pH немного возрастает. Рекомендованы для разделения полярных веществ сахаров, аминокислот, витаминов. Сорт бумаги № 4 предназначен для идентификации наркотиков. 6. Для препаративных работ. 8.9. Время капиллярного поднятия воды на 75 мм —22 и 15 мин (№ 8 и 9), бензола на 115 им — 30 мин. Средний диаметр пор силикагеля 11 нм. 11, 12. Бумаги соответственно аналитического и технического сортов. [c.247]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология