Тонкослойная хроматография липидов

II. ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ЛИПИДОВ [c.149]

Этот раздел посвящен выделению индивидуальных липидов или получению достаточно простых смесей, анализ которых дает достоверные результаты. Хорошие результаты получают при разделении триглицеридов тонкослойной хроматографией в присутствии ионов серебра, тонкослойной распределительной хроматографией и газожидкостной хроматографией. Аналогично можно анализировать сложноэфирные воска, моно- и диглицериды, а также фосфоглицериды. [c.86]

Методика. Пластинку обрабатывают парами тетраоксида осмия в герметичной камере [298]. Для обнаружения соединений с изолированными двойными связями достаточно 10 мин, для обнаружения соединений с сопряженными двойными связями необходим час и больше [182]. Применение. Обнаружение соединений с двойными связями. Реактив использовался в тонкослойной хроматографии липидов [298] и стероидов [182] (пятна цветом от коричневого до черного). [c.264]

Хотя при разделении методом тонкослойной хроматографии используется преимущественно адсорбционный принцип, встречается все большее количество работ по разделению в тонком слое на основе распределительной хроматографии. Этот способ пригоден, например, для разделения гомологов одного ряда. Большую область применения этот метод имеет в химии липидов, а также используется с успехом для разделения жирных кислот, стеринов и т. д. [c.108]

В раздел включены также задачи, знакомящие с методами выделения липидов из биологического материала, фракционированием их с помощью колоночной и тонкослойной хроматографии, с методами количественного определения. [c.5]

По элюирующей способности растворители располагаются в следующем возрастающем порядке петролейный эфир, цикло-гексан, четыреххлористый углерод, толуол, бензол, хлороформ, диэтиловый эфир, этилацетат, ацетон, н-пропанол, этанол, метанол, вода. После пропускания растворителей пластинку высушивают на воздухе и идентифицируют липиды с помощью окрашивания специфическими реагентами. Для количественного определения фосфолипидов, разделенных тонкослойной хроматографией, используют спектрофотометрические методы. [c.228]

В основе адсорбционной хроматографии лежит разделение липидов в соответствии со степенью их полярности. Адсорбентом при тонкослойной хроматографии чаще всего служит силикагель. При колоночной хроматографии широкое применение получили три адсорбента силикагель, окись алюминия, флоризил (силикат магния). Прочность взаимодействия липида с адсорбентом определяется главным образом водородными и ионными связями, в меньшей степени — силами Ван-дер-Ваальса. [c.69]

Работа № 27. РАЗДЕЛЕНИЕ ЛИПИДОВ НА составляющие КОМПОНЕНТЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОГО СОСТАВА ФОСФАТИДОВ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ [c.116]

Сложные липиды в настоящее время практически всегда определяют методом тонкослойной хроматографии. [c.406]

В специальной части рассмотрено применение метода тонкослойной хроматографии для анализа соединений различных классов (углеводородов, спиртов, кислот и т. д.). Особое внимание уделено анализу природных соединений (белков, углеводов, стероидов, липидов). [c.3]

Жидкостная колоночная хроматография и тонкослойная хроматография являются наиболее важными методами очистки и разделения лиПидов, причем первая используется в основном для препаративных, а последняя для аналитических целей. Огромное количество литературы, которое существует по этому вопросу, было рассмотрено с различных точек зрения в работах [1—5]. [c.197]

Общие понятия. Тонкослойная хроматография считается одним из наиболее эффективных и универсальных способов разделения смесей липидов. Она позволяет не только определить количественный состав, но и препаративно выделить индивидуальные вещества из смеси. [c.116]

Для тонкослойной хроматографии липидов применяют слои мелкозернистого силикагеля (силикагель Н). Для аналитических целей используют слой сорбента толпд иной 0,25 мм, для препаративных — 0,5 мм. Размер стеклянной пластинки для разделения чаще всего — 20x20 см. Для разделения различных классов липидов используют разные системы растворителей. Например, полярные фрсфолипиды и гликосфинголипиды разделяют в смеси хлороформ—метанол, содержащей аммиак или разведенную уксусную кислоту. Элюирующая способность смесей растворителей определяется полярностью ее составных компонентов. [c.228]

Для полного анализа липидов их предварительно разделяют на отдельные классы адсорбционной хроматографией [122], а затем уже фракционируют каждый класс по составляющим гомологам распределительной хроматографией. Сравнительно с колоночной тонкослойная хроматография выполняется быстрее, проще и результаты более воспроизводимы. [c.83]

Тонкослойная хроматография применяется в химии липидов для разделения жирных эпоксикислот [185—187] этим методом разделяют различные продукты окисления липидов [188—191]. [c.457]

Диольные липиды по химическим свойствам и хроматографическому поведению мало отличаются от глицеридов и могут быть обнаружены лишь с помощью газо-жидкостной и тонкослойной хроматографии, поскольку они присутствуют в незначительных количествах. [c.258]

Все животные и растительные ткани содержат такие сложные смеси липидов, что выделить и идентифицировать все компоненты этих смесей каким-либо одним аналитическим методом практически невозможно, и достичь этой цели можно, только объединяя несколько методов. Предварительное разделение липидов на группы, состоящие из соединений двух или трех хорошо охарактеризованных классов, облегчает последующее разделение смеси на индивидуальные компоненты. Этот прием сейчас широко используется в тех случаях, когда исследователь располагает достаточным запасом времени и достаточным для проведения такого последовательного анализа количеством вещества. В настоящее время существует несколько очень хороших систем, включающих колоночную и тонкослойную хроматографию, которые позволяют выполнить этот анализ. [c.135]

В 1961 г. Димов [115] показал, что адсорбционные свойства силикагеля меняются, если его обработать ионами серебра. Время удерживания увеличивается для этилена на 100 %, для пропилена на 50 /о, а для этана и бутана остается прежним. Наблюдаемое изменение времени удерживания объясняется хорошо известной способностью нитрата серебра образовывать комплексы с ненасыщенными соединениями. Гёринг и сотр. [116] в 1961 г. и де Фриз [117] в 1962 г. использовали пропитанный нитратом серебра силикагель для колоночной хроматографии, а Моррис [118] и Баррет и сотр. [23] применили аналогичный адсорбент в тонкослойной хроматографии липидов. Обычно нитрат серебра добавляют либо в суспензию при приготовлении [c.47]

Работа 149. Разделение липидов мозга методом тонкослойной хроматографии [c.472]

Количественный анализ сложных смесей фосфолипидов проводят хроматографическими методами. Для препаративных целей в основном используют хроматографию на колонках. Для микроаналитических исследований успешно применяют тонкослойную хроматографию, с помощью которой можно разделить практически все классы липидов, локализовать и идентифицировать их при использовании специальных реактивов. [c.228]

И неполярные липиды (содержание последних довольно велико). Далее эфиром и смесями эфира с ацетоном (с возрастающей долей ацетона) вымывают гликозиды каротиноидов. В этих условиях фосфолипиды остаются адсорбированными в колонке. Гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, обычна этерифицируются различными жирными кислотами по одной из гидроксильных групп ГЛЮКОЗЫ. Поэтому эти эфиры необходимо омылить этанольным раствором гидроксида калия. Очень важной стадией является ацетилирование гликозидов уксусным ан-гидридом и пиридином. При этом сахарная, т. е. гидрофильная, часть молекулы становится липофильной и образующиеся ацетилированные гликозиды лучше поддаются дальнейшему разделению. Выделенные фракции повторно хроматографируют на силикагеле, однако полученные в результате фракции все-таки представляют собой смеси трех или более компонентов. Получить фракции индивидуальных компонентов можно, хроматографируя эти смеси на оксиде магния (колоночная или тонкослойная хроматография). В табл. 4.12 приведены все идентифицированные гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, а также их величины полученные на тонких слоях оксида магния элюированием смесью петролейный эфир (т. кип. 60—70 °С)—бензол — метанол (40 10 1). Подобную же смесь используют и в колоночной хроматографии. Колонку заполняют смесью (1 1) оксида магния и кизельгура (фирмы Мегск, Дармштадт, ФРГ). Как видно из табл. 4.12, каждая дополнительная сопряженная двойная связь в молекуле уменьшает Я), а циклизация молекулы увеличивает ее. Соединения В, Д и 3, перемещающиеся при хроматографии на силикагеле, как одна зона, легко разделяются этим методом. Различные типы ацетилированных гидроксильных групп (в соединениях А, В, Г я Ж) или карбонильная группа приводят к различному по величине замедлению движения хроматографируемого вещества. Очевидно, характер гликозидной связи также существенно влияет на величину [c.209]

Пластинки для тонкослойной хроматографии липидов готовят, как указано на с. 72. При аналитической хроматографии толщина слоя силикагеля обычно не превышает 0,25 мм. Для препаративных целей используют слои толщиной 0,75—1,0 мм на пластинках размером 20X Х20 см В некоторых случаях для лучшего разделения используют удлиненные пластинки (34x20 см). Для аналитического разделения липидов можно применять готовые пластинки Силуфол чехословацкого производства. Они представляют собой тонкий слой силикагеля, закрепленный на алюминиевой фольге с помощью крахмала. Для подготовки пластинок Силуфол к работе их необходимо активировать. [c.70]

Наиболее эффективным и широко применяемым методом фракционирования сложных смесей липидов является хроматография. Главную роль при аналитическом фракционировании играет адсорбционная хроматография в тонком слое сорбента. Этот метод также применяется в препаративных целях, когда разделению подвергается небольшое количество липидов (50—300 мг). Если масса липидов превышает 300 мг, используют колоночную хроматографию, хотя по разделяющей способности и времени разделения этот метод часто уступает тонкослойной и газовой хроматографии. Однократного хроматографирования обычно бывает недостаточно для выделения индивидуальных веществ, в связи с этим полученные фракции подвергают препаративной тонкослойной хроматографии или колоночной хроматографии другого типа. При колоночрюй хроматографии липидов используют не только принцип адсорбции, но и принцип распределения между двумя несмеши-вающимися жидкостями, гель-фильтрации, ионного обмена. [c.69]

Яичные желтки, обрабатывая ацетоном, освобождают от всех липидов, за исключением фосфолипидов Последние из остатка экстрагируют смесью хлороформа и метилового спирта, осаждают ацетоном и хроматографируют на колонке с А12О3. Полученные фракции подвергаются анализу с использованием тонкослойной хроматографии. Вся работа по выделению фосфолипидов проводится в холодной комнате. [c.76]

Тонкослойная хроматография (ТСХ) —один из наиболее эффективных, простых и универсальных методов разделения микроколичеств многокомпонентных смесей неорганических и органических соединений. Этот метод нащел щнрокое применение в биохимии, в анализе природных соединений, фармакологии. В органической геохимии ТСХ используют при исследовании липидов, стероидов, для разделения сернистых соединений нефти [46], ароматических УВ, фенолов и т. д. [4, 88]. Хроматография в тонком слое предполагает не только фракционирование сложных смесей на классы соединений, но и разделение внутри одного класса на индивидуальные компоненты. При исследовании сложных смесей применение ТСХ особенно эффективно в сочетании с ГЖХ и физическими методами ИК-, УФ-спектроскопией и масс-спектрометрией. Хроматография в тонком слое представляет собой метод, при котором раствор разделяемых веществ пропускается через тонкоиз-мельченный активированный сорбент, нанесенный на одну сторону стеклянной пластинки, в определенном направлении на определен-цое расстояние. Поскольку анализируемые компоненты, содержащиеся в жидкой фазе, по-разному удерживаются сорбентом, при движении растворителя происходит разделение (рис. 44). [c.114]

ЛИПИДОВ на сефадексе LH-20 с применением с качестве элюента хлороформа и этанола. Первая методика оказалась пригодной для отделения глицериновых эфиров от эфиров гликолей, простых эфиров от сложных эфиров и других нейтральных липидов (рис. 27.1). Для полного разделения использовалась комбинация гель-хроматографии и-тонкослойной хроматографии на кремневой кислоте. Кальдерон и Бауман [31] анализировали смеси липидов этиленгликоля, липидов глицирина, углеводов и восков. Наилучшие результаты были получены путем сочетания гель-хроматографии на сефадексе LH-20 с распределительной хроматографией [32]. [c.201]

Фосфолипидные и гликолипидные фракции, выделенные по указанным выше методам деления липидов на классы, далее можно разделить на подфракции с помощью различных методов колоночной хроматографии. Для целевых компонентов следует использовать комбинацию колоночной и тонкослойной хроматографии, в то время как для второстепенных компонентов можно использовать препаративную колоночную хроматографию. [c.205]

Тонкослойная хроматография на солях серебра — в основном метод разделения липидов — основана на способности серебра образовывать комплексы с липидами. В неподвижную или подвижную фазу вводят нитрат серебра, разделение определяется формой (например, цис, транс) или степенью ненасыщенности липидов. Этот вид хроматографии рассмотрен в обзоре Л орриса [95, 96]. [c.553]

Устранение такого несоответствия между возможностями изучения индивидуального соединения и возможностями выделения его из сложной смеси связано с развитием хроматографических методов. В первую очередь это касается трех разновидностей метода хроматографии — бумажной, тонкослойной и газо-жидкостной,— которые появились почти через полвека после первых успешных опытов Цвета [1] в 1901—1904 гг. Открытие и развитие метода бумажной хроматографии [2] создало прочную базу для анализа и разделения сложных смесей аминокислот, пептидов, липидов и нуклеотидов, что значительно расширило возможности биохимических исследований. В известной мере аналогичная техника тонкослойной хроматографии [3, 4] на закрепленных и незакрепленных с.лоях сорбентов ускорила исследования в области синтетической органической химии и в ряде прикладных областей химии и химической технологии. [c.5]

Составные компоненты фосфолипидов для количественного анализа вначале обрабатывают концентрированной серной кислотой, затем снимают слой силикагеля и сжигают для определения фосфора. Для этого хроматограммы опрыскивают 18 н. раствором серной кислоты, нагревают при 110° до обугливания пятен пятна соскабливают в пробирку. Рядом с последней фракцией соскабливают в пробирку пустой участок, равный обугленному. Добавляют 1 мл H IO4 (уд. вес 1,70), вводят две стеклянные бусины и нагревают на песчаной бане 3 часа. Охлаждают, вводят 5 мл дистиллированной воды, нагревают и фильтруют через ватман № 44. Пробирки и фильтр дополнительно смывают 1 мл теплой дистиллированной водой. Охлаждают и проводят реакцию молибденовой сини. Для этого добавляют 1 мл 2,5% раствора молибдата аммония и 0,4 мл восстанавливающего раствора (1-амино-2-нафтол-4-суль-фоновая кислота), перемешивают, нагревают на кипящей водяной бане в течение 7 минут. Фотометрируют при 830 ммк. Стандартная кривая строится в пределах 0,5—5 мкг фосфора. Наилучшие результаты получены при оптимальных условиях развития окраски [194], т. е. после нагревания растворов с концентрацией 1 н. раствора фосфора на кипящей водяной бане в течение 5 минут. Тонкослойная хроматография с успехом применяется для анализа липидов крови у больных с поражением печени [147] и др. [c.90]

Приветт и др. [303] обобщили литературу, посвященную методам количественного анализа липидов, а также денситометрии обугленных хроматограмм [304]. Куксис [305] опубликовал обзор работ по количественному анализу липидов посредством сочетания ТСХ и ГХ. Максу и Кварлесу [306] принадлежит обзор методов анализа ганглиозидов. Раузер и др. [307] опубликовали обзор по применению колоночной и тонкослойной хроматографии для количественного анализа смесей полярных липидов. [c.103]

В настоящее время для разделения и структурного анализа нейтральных липидов преимущественно используют различные варианты тонкослойной хроматографии (ТСХ) и газо-жидкостную хроматографию (ГЖХ). Так, с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле и кремневой кислоте разделяют нейтральные плазмалогены, триглицериды и алкилдиглицериды в нативном виде или в виде их производных. Широкое распространение метод тонкослойной хроматографии в сочетании с денситометрическим методом получил для количественного анализа отдельных классов нейтральных липидов [3]. [c.187]

В настоящее время этот метод является основным методом определения жирнокислотного состава отдельных классов липидов, выделенных из природных объектов. В ряде случаев используют сочетание методов тонкослойной хроматографии на силикагеле, пропитанном AgNOз, и газо-жидкостной хроматографии [13]. С помощью этого метода изучено распределение жирных кислот в отдельных органах и тканях животного организма, в отдельных элементах клетки (митохондрии, микросомы и т. д.) и других липидных системах. Он широко используется для изучения изменения жирнокислотного состава липидов при различных патологических состояниях организма. [c.197]

Для качественного и количественного анализа высших жирных спиртов, являющихся составной частью липидов, применяют различные методы. Большая часть из них основана на выделении алкиловых эфиров глицерина при помощи щелочного гидролиза или восстановления Ь1АШ4 фракции нейтральных или сложных липидов и последующего разделения полученной смеси алкиловых и алкен-1-иловых эфиров глицерина либо тонкослойной хроматографией на силикагеле, пропитанном А ЫОз, либо расщеплением алкен-1-иловых эфиров глицерина кислотным гидролизом. [c.215]

Глицерин. Наиболее типичным и самым распространенным поли-олом в составе липидов всех классов является глицерин. Обнаружение глицерина в липидном гидролизате достигается с помощью бумажной и тонкослойной хроматографии, а отделение от других полиолов — с помощью адсорбционной хроматографии. Для идентификации получают производные глицерина, например трибензоат. Количественное определение глицерина проводят различными методами, например периодатным окислением с количественным определением выделяющегося при этом формальдегида. Широкое развитие получил метод ГЖХ летучих производных глицерина (ацетаты, силиловые эфиры). [c.216]

До последнего времени считалось, что единственными многоатомными спиртами всех нейтральных липидов и фосфатидов являются глицерин и сфингозины. Л. Д. Бергельсон, В. А. Вавер и сотрудники обнаружили, что в природе широко распространены липиды, построенные на основе различных двухатомных спиртов (диольные липиды). Так, в жирах животного, растительного и микробного происхонедения ими были открыты два типа нейтральных диольных лииидов, представляющих собой эфиры высших жирных кислот с диолами или с 1-алкенильными простыми эфирами диолов (диольные плазмалогены). Эти липиды не удается отделить от триглицеридов обычными методами колоночной или тонкослойной хроматографии, но они могут быть обнаружены высокотемпературной газо-жидкостной хроматографией. Среди диолов, входящих в состав нейтральных липидов, были идентифицированы этиленгликоль, пронандиол-1,2, пропандиол-1,3, бутандиол-1,3, бутандиол-2,3, бутан диол-1,4. [c.541]

Чаще всего гликосфинголипиды выделяют из биологических материалов вместе с большей частью других липидов экстракцией смесью хлороформ — метанол (2 1 по объему) [6]. Чтобы удалить глицеро-фосфатиды, суммарную полярную липидную фракцию, полученную после хроматографической очистки экстракта на колонке с кремневой кислотой, подвергают щелочному метанолизу [7, 8]. Эту операцию можно проводить и до хроматографической очистки липидной фракции [9, 10]. Далее индивидуальные гликосфинголипиды выделяют хроматографией на кремневой кислоте [11-—13], флоризиле [7, 14] или ДЭАЭ-целлю-лозе [9, 15]. Небольшие количества нейтральных гликосфинголипидов очищают методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле [8, 9]. [c.14]

А. С. Соболева и сотр. показано, что в опытах in vitro инкубация биогенных аминов с продуктами перекисно1 о окисления липидоа приводит к одновременному уменьшению в реакционной смеси как количества перекисей, так и изученных аминов. Методом тонкослойной хроматографии удалось обнаружить при этом появление продуктов взаимодействия аминов с липидами. Аналогичный результат параллельно был получен в лаборатории Е. Б. Бурлаковой в работах по термическому окислению метилолеата. [c.294]

При изучении биомембран обычно имеют дело с относительно небольшими количествами липидов, поэтому для их разделения чаш е всего используют метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силикагеле, позволяюп ий проводить и качественный, и количественный анализ липидов различных классов. ТСХ осуществляют в тонком слое силикагеля, нанесенном на подложку — стеклянную, пластиковую или алюминиевую пластинку. В качестве адсорбентов можно применять и другие вещества (оксид алюминия, сефарозу, целлюлозу). Силикагель может быть с кальциевой связующей добавкой (силикагель О) или без нее (силикагель И). Для разделения липидов используют хроматографические камеры, стенки которых выстилают изнутри фильтровальной бумагой для ускорения насыщения ее парами растворителя. Камеру готовят предварительно (примерно за 1 ч или более до эксперимента), залив в нее достаточное количество растворителя на глубину около 1,5 см. Фильтровальная бумага, выстилающая стенки камеры, должна пропитаться растворителем. Необходимо плотно закрывать камеру крышкой (если необходимо — использовать вазелиновую смазку). В камеру обычно помещают одновременно не более двух пластинок так, чтобы поверхность подложки была обращена в сторону выстилающей камеру бумаги, а слои адсорбента находились на максимальном удалении друг от друга. Слой адсорбента не должен соприкасаться с боковыми стенками камеры. [c.256]

Концентрации / -глюкозамина, составляющие 1—10 мМ, вызывают торможение роста и обратимые повреждения в С6 глиомах рис. 3, см. вклейку неопубликованные данные). Спустя 6 ч после добавления 10 мМ глюкозамина к культурам клеток наблюдаются значительные изменения метаболизма гликопротеидов и липидов. Синтез гликопротеидов ингибируется, возможно, на уровне образования долихололигосахаридов, поскольку Н-глюкозамин медленнее включается во фракцию полярных липидов, экстрагированных смесью хлороформ метанол вода (1 1 0,3 по объему S. L Friedman, неопубликованные эксперименты). Н-глюкозамин включался в нейтральные гликолипиды и ганглиозиды в обработанных и не обработанных препаратом клетках. Состав меченых липидов, как показали данные тонкослойной хроматографии, был изменен в [c.111]