Хроматография в водных элюентах

Получено сравнительно неплохое разделение тридцати полупродуктов методом двухмерной тонкослойной хроматографии [17]. Элюентами служили концентрированный аммиак — вода—50% водная фосфорноватистая кислота — петролейный эфир (30— 60°) — хлороформ — бутанол в соотнощении 20 63 2 50 250 25 (нижний слой) и хлороформ—этилацетат — этанол — уксусная кислота в соотношении 350 100 60 20. Процесс требует 8—10 ч и приводит к хорошему разделению важнейших промежуточных продуктов для оксидационного крашения. Метод двухмерной хроматографии описан также в работе [19]. [c.502]

Хроматография на полярном адсорбенте из водного элюента [c.299]

Динамическое адсорбционное модифицирование силикагеля диаминами в жидкостной хроматографии углеводов из водного элюента [c.301]

Поскольку сорбенты для лигандообменной хроматографии выпускаются, предложены некоторые модификации метода, позволяющие использовать традиционные сорбенты. Так, М-алкилированные оптически активные аминокислоты сорбируются на обращенно-фазном силикагеле. В алкильном радикале должно быть больше 5—6 углеродных атомов. В этом случае модификатор прочно удерживается на сорбенте и не смывается водным элюентом, в который добавляют следовые количества меди. [c.84]

Для жидкостной хроматографии созданы микронасосы различных типов, хотя зачастую они оказываются совершенно излишними. Фактически для равномерной подачи на колонку относительно небольшого количества жидкости существуют лишь два типа насосов поршневой и перистальтический. Первый удобен для подачи как органических, Так и водных элюентов второй ввиду наличия в нем гибких шлангов можно рекомендовать для подачи только водных систем. [c.59]

На неполярных адсорбентах из сильно полярных элюентов, например, водно-спиртовых смесей, сильнее адсорбируются молекулы, содержащие неполярные углеводородные цепи, циклы или группы (см. рис. 14.4 и 14.15). В основном эти молекулы удерживаются на неполярной (гидрофобной) поверхности за счет адсорбции их неполярных частей, т. е. за счет неспецифического межмолекулярного взаимодействия с адсорбентом, как это было показано в разделе 16.5 при адсорбции ароматических углеводородов из водных растворов на гидроксилированной поверхности кремнезема. Полярные же группы молекул дозируемого вещества при адсорбции на неполярном адсорбенте из полярного элюента уменьшают удерживание, так как их межмолекулярное взаимодействие с полярными грушпами молекул элюента, влияя на их ориентацию, ослабляет межмолекулярное взаимодействие молекул дозируемого вещества с адсорбентом и облегчает их возвращение в объем элюента. Таким образом, в этом случае удерживание в основном определяется, во-первых, неспецифическим межмолекулярным взаимодействием молекул дозируемого вещества с адсорбентом и, во-вторых, специфическим межмолекулярным взаимодействием этих молекул с элюентом, причем последнее уменьшает удерживание. Этот молекулярный механизм удерживания надо иметь ввиду, так как распространенный в литературе по жидкостной хроматографии термин обращеннофазная хроматография не передает существа дела. Действительно, из лекции 16 следует, что органические вещества, во-первых, удерживаются из водных растворов и на полярном адсорбенте (гидроксилированной поверхности силикагеля) и, во-вторых, порядок выхода органических веществ может быть изменен при изменении состава элюента как на полярном, так и неполярном адсорбентах. [c.307]

В соответствии с этими равновесными изотермами адсорбции, полученными статическим методом, такие вещества, как диоксан, ацетон, простые эфиры, бензол, толуол, циклогексанон и пиридин, т. е. слабые и сильные органические основания, ограниченно и неограниченно растворимые в воде, удерживаются на поверхности силикагеля из водных растворов, т. е. удерживаемые объемы этих веществ, исправленные на мертвый объем колонны по удерживанию, например тяжелой воды или галловой кислоты, значительные. Учитывая все эти факты, следует отметить, что подразделение жидкостной адсорбционной хроматографии на нормально-фазовую (положительное удерживание на полярном адсорбенте из неполярного элюента) и обращенно-фазовую (положительное удерживание на неполярном или слабополярном адсорбенте из полярного элюента) с точки зрения межмолекулярных взаимодействий не обосновано. Оно является поэтому не только условным, но и вводящим в заблуждение, так как органические вещества могут удерживаться на полярном адсорбенте и из чисто водных элюентов. [c.176]

Свойства химически связанных фаз с функциональными группами пока мало изучены, тем не менее мы сочли необходимым остановиться и на этом вопросе. Вероятно, в дальнейшем такие фазы в сочетании с водными элюентами будут широко применяться в ситовой хроматографии. [c.7]

В (относительно хлорсеребряного) с использованием угольных или ртутных электродов приводит к уменьшению чувствительности и селективности. Вещества, содержащие фенольную, индольную или альдегидную группу, способны окисляться при низких потенциалах (0,4-0,7 В). В качестве рабочего электрода используются электроды из платины, золота, углеродной пасты, графита. Электрод, на котором протекает интересующая нас реакция, и является рабочим электродом катод (реакция восстановления) или анод (реакция окисления). Электрохимические детекторы работают только с проводящей водной подвижной фазой, поэтому они наиболее подходят для обращенно-фазной или ионообменной хроматографии. Для увеличения проводимости подвижной фазы в водный элюент добавляют нитрат калия, перхлорат натрия, а в органический — перхлорат тетраэтиламмония. [c.195]

ТСХ). В некоторых применениях хроматографии в неорганическом анализе успешно нспользуют полярную подвижную фазу, в качестве которой может служить анализируемый водный раствор или водный элюент. В этом случае менее полярная жидкость, являющаяся неподвижной фазой, удерживается а неполярном (гидрофобном) носителе. Такой процесс типичен для хроматографии с обращенной фазой (известной также под названием экстракционной хроматографии). В распределительной хроматографии органический реагент может использоваться двумя различными способами либо для превращения разделяемых ионов в комплексные соединения, которые затем распределяются между двумя фазами, либо для обнаружения или определения in situ, т. е. непосредственно на бумажной или тонкослойной хроматограмме. Выбор реагента для inepBOiro из этих случаев опирается на соображения, изложенные в разделе, посвященном экстракции, а для второго случая он основывается яа тех же принципах, которые используются при проведении цветной или флуоресцентной пробы и (или) определения. [c.235]

Отметим одно существенное преимущество обратнофазовой хроматографии для фракционирования белков, НК и их компонентов. При такой распределительной хроматографии эти вещества выходят из колопки растворенными в элюенте, основу которого составляет вода, что способствует сохранению их нативности и облегчает дальнейшие процедуры. Кроме того, использование перечисленных выше средств управления гидрофобностью или гидрофильностью вещества в случае водного элюента значительно упрощается. [c.169]

В гель-фшшдюционной зфоматографии проводят разделение водорастворимых веществ на гидрофильных сорбентах. При этом используются водные элюенты, содержащие, как правило, буф для контроля уровня pH. В гель-проникающей хроматографии применяются гидрофобные сорбенты и соответственно неполярные орган%1ческие растворители, такие, как тетрагидрофуран, дихлорметан или толуол. С помощью гель-проникающей хроматографии определяют соединения, малорастворимые в воде. [c.291]

Некоторое время считалось, что анализ ионных или ионогенных соединений следует проводить методом ион-париой хроматографии с обращенными фазами. Однако в настоящее время исследователи останавливают свой выбор либо на традиционном варианте ионообменной хроматографии, либо на хроматографии с применением немодифициро-ванного силикагеля или оксида алюминия. В последнем случае применяют водные растворители и буферы. Хроматография на немодифицированном силикагеле или оксиде алюминия имеет существенные преимущества по сравнению с ОФ-вариаитом. Во-первых, свойства сорбента не меняются от партии к партии, во-вторых, сорбенты в меньщей степени подвержены гидролизу и, наконец, при анализе таких проб, как сыворотка, не требуется предвар1ггельная очистка [275]. Оксид алюминия ие изменяет своих свойств при использовании водных элюентов с pH от 2 до 12. Силикагель растворим в воде при рН>8, однако этот недостаток может быть преодолен при насыщении растворителя силикагелем в фор-колонке. При использовании ТСХ описанные преимущества реализуются наилучшим образом (см. разд. 1П, Б, 2). Учитывая взаимное влияние буфера, растворенного вещества, рК, состава элюента и pH, можно варьировать условия и тем самым оптимизировать процесс разделения. Разработанные [c.399]

Для аналитических и препаративных разделений пептидов и белков применяются такие гидрофильные полимерные материалы, как полидекстрины. В эксклюзионной хроматографии используют пористые полимеры с широкими порами. Эксклюзионная хроматография с органическими элюентами называется гель-проникающей хроматографией и применяется для разделения полимеров. Эксклюзионная хроматография с водными элюентами — гель-фильтрационная хроматография — используется для разделения биомолекул. [c.312]

В большинстве лабораторий, где анализируются меченые соединения, обычно используют различные методики колоночной хроматографии. Это может быть гель-фильтрация и ионный обмен, в которых используются водные элюенты, обычная адсорбционная и распределительная хроматография, где применяют органические растворители, и, наконец, высокоэффективная хроматография, в которой применяются водные и органические растворители. Поэтому желательно использовать универсальную методику, которая позволяла бы работать в различных условиях. Следует рассмотреть также и применение систем, способных работать под давлением и предназначенных для ВЭЖХ. [c.185]

В 1380] обнаружено аналогичное влияние полиэлектролитных эффектов на молекулярно-массовый анализ гепарина, ПМАК, ПАК, карбоксиметилцеллюлозы при хроматографии в водных элюентах на силикагелях Li hrospher с Гр = 30, 50 и 250 А. Авторы нашли, что добавление солей тетраметиламмония в элюент подавляет адсорбцию на силикагеле нейтральных полимеров и полика- [c.199]

В настоящее время в жидкостной хроматографии в качестве неподвижных неполярных фаз используют химически связанные фазы, которые получают простым способом и с воспроизводимыми свойствами. Неподвижные неполярные фазы называют обращенными фазами (ОФ), поскольку в отличие от обычной хроматографии в этом виде хроматографии неподвижная фаза неполярная и наиболее сильная адсорбщ1я (наибольщее удерживание) происходит из полярных элюентов, а именно из воды. Снижая полярность элюента, например в результате добавления метанола, можно уменьшить удерживание. Хроматография с обращенными фазами впервые была описана Говардом и Мартином [23], которые нанесли на силикагель парафиновое масло и н-октан и, используя водные элюенты, разделили с помощью этой распределительной системы жирные кислоты. Чтобы на силикагель легче было нанести неполярную неподвижную фазу, Говард и Мартин проведи силанизацию силикагеля диметилдихлорсиланом. Такими же хроматографическими свойствами, как эти обращенные фазы, обладают активные угли, особенно если они графитированы. Механическая прочность подобных фаз мала [c.126]

Распределительная хроматография занимает промежуточное положение между адсорбционной хроматографией и хроматографией на обращенных фазах. Распределительные системы предпочтительны при разделении членов гомологического ряда. Такое разделение можно провести и в системах с обращенной фазой. Методом адсорбционной хроматографии можно разделить только низшие члены гомологического ряда. Оптические изомеры удается разделить только в форме пар диасгереомеров (см. рис. VI.21), что в ( щем не представляет трудностей. Для расщепления рацематов в принципе пригодны оптически активные подвижные фазы. Подобные фазы для классической колоночной хроматографии известны только в форме производных целлюлозы [2, 3], для жидкостной хроматографии при высоком давлении они не пригодны. Область применения ионообменной хроматографии ограничена, так как использовать можно лишь чисто водные системы. В таких системах можно разделять те ионы или соединения, которые легко и обратимо образуют комплексы (обмен лигандов) с ионами, связанными с ионообменником. Кроме того, на органической матрице ионообменника может также происходить неионообменная сорбция. Если в системах с ионообменниками к водным элюентам добавляют органические растворители, то элюенты разделяются и образуется распределительная система. Если бы дополнительно учитывали обе эти возможности разделения на ионообменниках, то возможности использования этого метода были бы более многообразны, чем это следует из табл. Х.1. [c.218]

В обращенно-фазовой хроматографии на удерживание ионизируемых анализируемых соединений влияют также ионные свойства сорбентов, обусловленные силанольными группами. В работе [114] измерены ионообменные свойства как привитых обращенных фаз, так и находящегося под ними кремнезема. Тест-веществом в этой части являлся тозилат бретилия (ггг толуол сульфонат о-бромбензил-К-этилдиметиламмония). Полученные сведения использованы затем для полного и количественного описания удерживания ионизируемых соединений как функщга величины pH и состава подвижной фазы. Определено удерживание широкого набора кислот, оснований и полифункциональных анализируемых соединений в водных элюентах с содержанием ацетонитрила до 80 % и в диапазоне pH от 2 до 11. [c.401]

Так, в работе [300[ поверхность силикагеля обрабатывали продуктом взаимодействия 3-аминопропилтриэтоксисилана с хлорметилированным линейным полистиролом с последующей прививкой Ь-оксипролина по хлорметильным группам. В этом случае полимерный слой прочно связан с поверхностью силикагеля за счет взаимодействия триэтоксисилильных групп с силанольными, что позволяет эксплуатировать полученную хиральную фазу для разделения В,Ь-аминокислот в варианте лигандообменной хроматографии в сравнительно жестких условиях слабокислые (pH = 4,0ч-4,5) водные элюенты, термостатирование хроматографической колонки при температурах до 80° С. [c.448]

Вещества, очень слабо (Л <С 1) или очень сильно (к > 10) взаимодействующие с полярным адсорбентом, разделить в условиях хроматографии с прямой фазой затруднительно. Такие вещества с успехом могут хроматографироваться в условиях обращенно-фа-зовой хроматографии (Оф ВЖХ). В этом случае используют сорбенты с неполярной поверхностью, В качестве элюентов применяют воду и водно-органи-ческне смеси со спиртами, ацетопитрилом нли тетра-гидрофураном. Хроматографируемые соединепия не-специфически взаимодействуют с гидрофобной НФ, Одним из возможных механизмов удерживания на таких сорбентах является гидрофобное взаимодействие насыщенных углеводородных цепей сорбента с неполярными участками молекул. Полярные функциональные группы ориентированы в элюент и способны к образованию водородных связей с молекулами воды. Увеличение количества гидрофобных радикалов способствует усилению взаимодействия молекулы [c.601]

Работу проводят в токе аргона в установке, изображенной на рис. 4.4. К 1,3 М эфирному раствору, содержащему 0,06 моль фениллития, добавляют 9,3 г (0,05 моль) 4-бромоанизола. В процессе прибавления реакционная смесь слабо разогревается. Ее выдерживают в течение 24 ч при комнатной температуре. По истечении этого срока прибавляют по каплям 7,3 г (0,04 моль) бензофе-нона, растворенного в 30 мл сухого эфира. Для завершения реакции смесь нагревают 1 ч, затем охлаждают и осторожно разлагают водой. Эфирный слой отделяют, из водного продукт экстрагируют эфиром. Объединенные эфирные растворы промывают водой до нейтральной реакции, сушат. Эфир удаляют. Остаток при охлаждении затвердевает. После кристаллизации из этанола получают 11,1 г (75 %) бесцветных кристаллов т. пл. 127-128 °С. Возможна дополнительная очистка сублимацией при температуре 150 °С и давлении 5 мм рт. ст. Хроматография элюент - хлороформ и петролейный эфир, 2 1 К/ 0,6. Спектральные характеристики даны на рис. 4.7. [c.264]

В реакционную колбу, предварительно заполненную аргоном, вносят 5,5 г (0,04 моль) 4-оксибензойной кислоты и 20 мл сухого ТГФ. Раствор с помощью ледяной бани охлаждают до О °С и, энергично перемешивая, быстро (менее 1 мин) приливают 1,1 М эфирный раствор, содержащий 0,2 моль метиллития. Перемешивание продолжают в течение 2 ч при температуре О °С, а затем, не прекращая его, быстро добавляют в реакционную смесь 10 мл (0,08 моль) свежеперегнанного триметилсилилхлорида. Охлаждающую баню убирают, реакционной смеси позволяют нагреться до комнатной температуры, после чего в нее прибавляют 30 мл 1 н. хлороводородной кислоты и перемешивают в течение 0,5 ч. В делительной воронке водный слой отделяют от органического, из водного слоя делают экстракцию эфиром. Объединенные эфирные слои промывают 40 мл воды и сушат сульфатом магния. Эфир удаляют. Анализ остатка методом ГЖХ обнаруживает менее 5 % примеси 1 -метил-1-(4-оксифенил)этанола. 4-Оксиацетофенон очищают перекристаллизацией из эфира. Т. пл. 108,5-109,5 °С. Выход 4,6 г (85 %). Хроматография элюент - хлороформ и этилацетат, 1 Rf 0,5. Спектральные характеристики даны на рис. 4.11. [c.272]

При разделении относительно крупных бромциановых пептидов ОС-, р- и 7-цепей глобина человека 0,1 %-ный раствор ТФУ, помимо своей роли в осуществлении ион-парной хроматографии, оказался очень полезен как прекрасный растворитель для пептидов, в частности гидрофобных. Кроме того, раствор ТФУ прозрачен вплоть до А, = 216 нм и легко удаляется лиофилизацией. Фракционирование вели на колонке Li lirosorb RP-8 (0,46 X 50 см). Использование сорбента с меньшей, чем в рассмотренных выше примерах, гидрофобностью обусловлено большими размерами пептидов. Колонку уравновешивали 0,1%-ньш водным раствором ТФУ, впрыскивали в нее 100 мкл смеси пептидов и вели элюцию линейным градиентом концентрации изопропанола (от нуля со скоростью нарастания 1,6% в минуту) в течение 1 ч при температуре 28 и скорости подачи элюента 0,7 мл/мин. Профиль элюции показан на рис. 96 (сплошная линия). Пептиды длиной 32, 43 и 64 аминокислотных остатка хорошо отделились друг от друга [Mahoney, Hermod-son, 1980]. [c.204]

Рассмотрению возможностей обратнофазовой гидрофобной хроматографии белков в основном посвящен сравнительно недавно опубликованный обзор [Rubinstein, 1979]. Основные его выводы совпадают с тем, что было сказано выше при рассмотрении обратнофазовой гидрофобной хроматографии пептидов. Для белков с молекулярной массой в интервале 12—30 тыс. Дальтон автор отдает предпочтение силикагелям, модифицированным октилсиланом (Са). В качестве органического компонента элюента, по его мнению, следует предпочесть градиент концентрации пропанола, вплоть до 40%-ной концентрации, если позволяет растворимость белка. Для получения узких пиков рекомендуется в качестве водного компонента использовать буфер высокой (примерно 1 М) концентрации, подавляющий ионное взаимодействие белка с силанольными группами матрицы. При pH 5—6 разрешение получается обычно хуже, чем при pH 4 (формиатно-пиридиновый буфер) или 7,5 (Na-ацетатный буфер). Существенно указание на то, что скорость элюции следует снизить до 60—90 мл/см Ч. Продолжительность фракционирования белков при этом остается относительно небольшой — 1—3 ч. Белки целесообразно разделить предварительно на группы [c.210]

Подвижная фаза (элюент) в том виде ионообменной хроматографии, который нас будет интересовать, всегда в основе своей водная. Главные ее физические параметры — pH, концентрация и природа растворенных солей. Определенную роль могут играть добавки органических растворителей, изменяющие полярность и диэлектрическую проницаемость элюента. Для подавления неспецифических взаилюдействий вещества с материалом матрицы в элюент могут быть внесены мочевина, детергенты и др. [c.249]

Аппаратура. Совр жидкостной хроматограф включает емкости для элюентов, насосы высокого давления, дозатор, хроматографич колонку, детектор, регистрирующий прибор, систему управления и мат обработки результатов Элюенты подаются в насос через фильтр, задерживающий пылевые частицы (больше 0,2 мкм), иногда через элюенты пропускают небольшой ток гелия для удаления растворенного воздуха и предотвращения образования пузырьков в детекторе (особенно в случае водньи н полярных элюентов) В аналит хроматографах для подачи элюента в колонку используют поршневые насосы с системой обратной связи, позволяющие сглаживать пульсацию потока в пределах [c.153]

ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ (ТСХ), вариает хроматографии, основанный на различии в скорости перемещения компонентов смеси в плоском тонком слое (толщина 0,1-0,5 мм) сорбента при их движении в потоке подвижной фазы (элюента). Последняя представляет собой, как правило, жидкость, однако осуществлен и газовый вариант ТСХ. В качестве сорбентов используют мелкозернистые силикагель, Al Oj, целлюлозу, крахмал, полиамид, иониты и др. Суспензиями этих сорбентов покрывают пластинки из стекла, фольги или пластика для закрепления слоя применяют крахмал, гипс или др. связующие, Пром-стью вьшускаются готовые пластинки с уже закрепленным слоем сорбента. Элюентами служат обычно смеси орг. р-рителей, водных р-ров к-т, солей, комплексообразующих и др. в-в. В зависимости от выбора хроматографич, системы (состава подвижной и неподвижной фаз) в разделешш в-в осн. роль могут играть процессы адсорбции, экстракции, ионного обмена, комплексообразования. На практике часто реализуются одновременно неск, механизмов разделения. [c.608]

Готовят суспензию 19.9 г (114 ммоль) дикалийгидрофосфата, 4,14 г (30,0 ммоль) дигидрофосфата калия и 1,20 г (11,4 ммоль) бромида натрия в растворе 16,1 г (99,5 ммоль) аллилхлорида Ж-156 в 120 мл безводного диметилсульфоксида, нагревают до 80 С (температура бани) и перемещивают 24 ч при этой температуре (вытяжной шкаф, запах диметилсульфида ). После охлаждения реакционную смесь выливают в смесь 400 мл Н2О и 200 мл ССЦ (осторожно ) и после разделения фаз водную фазу экстрагируют 100 мл ССЦ. Органическую фазу высущивают над Ыа280д, растворитель отгоняют под вакуумом и желтый остаток фракционируют при 2 мм рт. ст. При 66-72 С получают 11,2 г (80%) альдегида в виде бесцветного масла, по 1,4647. [При небольших загрузках рекомендуется проводить очистку продукта хроматографией на колонке (силикагель, размер частиц 0,06-0,2 мм, элюент -гексан-эфир 9 1)]. [c.134]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология