Зональные роторы

Известен такой вариант колоночной хроматографии, в котором элюент перемещается по колонке под действием центробежной силы [18], а не давления. В этом случае колонка представляет собой своего рода зональный ротор центрифуги, вдоль [c.16]

Зональное центрифугирование представляет собой эффективный способ разделения структур, имеющих сходную плавучую плотность, но различающихся по форме и массе частиц. В качестве примеров можно привести разделение субъединиц рибосом, различных классов полисом, а также молекул ДНК, имеющих различную форму. Центрифугирование осуществляют либо в бакет-роторах, либо в специально устроенных зональных роторах для предотвращения конвекции при центрифугировании в стаканах бакет-ротора или в камере зонального ротора создают слабый градиент (обычно сахарозы). Пробу наносят в виде зоны или узкой полосы в самом верху градиентного столбика. Для субклеточных частиц обычно используется градиент сахарозы от 15 до 40% (вес/объем) большинство этих частиц в достаточной степени разделяется центрифугированием при 100000 д в течение 1—4 ч. [c.149]

Рис. 47. Схема зонального ротора ТМ4 с пере-( ходным устройством (см.1

Рис. 48. Последовательность операций при использовании зонального ротора (см. текст)

При помощи схем 1—6 (рис. 48) опишем последовательность операций при использовании зонального ротора. На схемах [c.195]

Для вытеснения жидкости через периферическую систему каналов буфер или воду подкачивают через центральный канал, однако в зональном роторе с обычной крестовиной зоны градиента оказываются смазанными. Удобнее для тех же стандартных разборных роторов пользоваться специальной крестовиной (тип В-29) и дополнительным кольцом, придающим наружной стенке полости ротора форму перевернутого конуса (рис. 49). Б этой системе зоны градиента, не искажаясь, одна за другой выходят через периферическую систему, каналы которой связаны с верхним углом конической полости ротора. [c.196]

Главной проблемой при эксплуатации зонального ротора является опасность подтекания жидкости между двумя близко Расположенными системами каналов в переходном устройстве, а трущихся торцевых поверхностях двух цилиндров гидрав- [c.197]

Если центрифугирование предполагается вести на холоду, зональный ротор предварительно охлаждают (в собранном виде) в течение 4—5 ч в холодной комнате. При этом его полость должна быть закрыта пробкой во избежание конденсации влаги внутри ротора. Заполнение градиентом ведут через змеевик, погруженный в баню со льдом, со скоростью 40—50 мл/ /мин. Препарат через центральную трубку наслаивают со скоростью 5—10 мл/мин. С такой же скоростью наслаивают и буфер на препарат. [c.198]

Исходную смесь частиц разных размеров наносят. в виде тонкого слоя на более плотную среду, заполняющую весь объем пробирки бакет-ротора или полости зонального ротора (для зонально-скоростного центрифугирования используют только эти два типа роторов). В ходе центрифугирования наиболее тяжелые частицы быстро продвигаются ко дну пробирки или к пе- [c.201]

ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ В ЗОНАЛЬНЫХ РОТОРАХ [c.275]

В большинстве случаев зональные роторы используют для зо-нально-скоростного центрифугирования в градиенте плотности раствора сахарозы на стадии препаративного выделения и очистки макромолекул или частиц из большого объема материала. [c.275]

При подаче в ротор линейного градиента, т. е. раствора, в котором концентрация сахарозы увеличивается пропорционально объему подаваемой жидкости, в нем создается нелинейный — вогнутый — градиент концентрации сахарозы ( эффект радиального разбавления ). Это легко понять, если мысленно рассмотреть положение внутри зонального ротора двух одинаковых объемов подаваемого линейного градиента сахарозы, из которых один взят из начального, а другой — из конечного участка этого градиента. Каждый из двух одинаковых объемов обусловливает один и тот же прирост концентрации сахарозы (условие линейности подаваемого в ротор градиента). В цилиндрической пробирке бакет-ротора этим одинаковым приростам плотности соответствуют и одинаковые участки длины пробирки, так как сечение ее неизменно. Градиент оказывается линейным по длине, вдоль пути миграции молекул. В зональном же роторе двум оди> наковым объемам соответствуют цилиндрические слои разной толщины большей близ центра и меньщей у его периферии. Это означает, что один и тот же прирост концентрации сахарозы будет растянут во внутренней зоне градиента и сжат вблизи наружной стенки ротора. Иначе говоря, градиент плотности будет характеризоваться увеличением крутизны своего профиля при переходе от внутренней зоны к периферической, т. е. будет вогнутым. В целях получения более близкого к линейному профиля градиента в ротор подают иногда не линейный, а выпуклый (например, экспоненциальный) градиент сахарозы (см. выше). [c.275]

Зональные роторы, или роторы Андерсона [c.53]

Зональные роторы делают из алюминиевых или титановых сплавов, которые способны выдерживать весьма значительные центробежные ускорения. Обычно в них имеется цилиндрическая полость, закрывающаяся съемной крышкой. Внутри полости, на оси вращения расположена осевая трубка, на которую надевается насадка с лопастями, разделяющими полость ротора на четыре сектора. Ло- [c.53]

Рис. 2.6. Стадии центрифугирования (а—е) в зональном роторе

Емкость зональных роторов, используемых при средних скоростях, варьирует от 650 до 1600 см , что позволяет получать довольно большое количество материала (до 100 мг). Зональные роторы применяются для удаления белковых примесей из различных препаратов и для выделения и очистки митохондрий, лизосом, полисом и белков. [c.56]

Рис. 18. Схема работы зонального ротора а — начало заполнения ротора градиентом б

Зональные роторы имеют следующие важные преимущества перед другими роторами [c.200]

Характеристика высокоскоростных зональных роторов приведена в таблице 19. [c.202]

Характеристика высокоскоростных зональных роторов МСЕ [c.202]

Для формирования градиента в зональных роторах фирма МСЕ (Англия) выпускает приборы двух типов. На рисунке 21 изображен прибор для формирования фиксированного градиента плотности. [c.204]

Рис. 21, Прибор для формирования фиксированного градиента плотности в зональном роторе.

Фирма Весктап выпускает пять модификаций роторов описанного типа. Роторы Т1-14 и А1-14 отличаются друг от друга материалом, из которого они изготовлены, и соответственно максимально допустимыми скоростями вращения 48 и 35 тыс. об/мин. Вместимость обоих роторов 665 мл. Два других одинаковых по конструкции зональных ротора (Т1-15 и А1-15) вмещают по 1675 мл и могут работать при скоростях вращения 32 и 22 тыс. об/мин соответственно. Высокоскоростной титановый ротор 2-60 объемом 330 мл может работать на скорости 60 тыс. об/мин. Он имеет определенные конструктивные отличия от названных выше роторов, но в принципе сходен с ними и применяется с тем же самым переходником. [c.196]

Заполнение зонального ротора при открытой камере центрифуги занимает немало времени (около 1 ч). Если работают с охлаждением, то при этом происходит столь значительное накопление конденсата на стенках камеры, что для достижения вакуума, необходимого для разгона ротора до высокой скорости, воздух из камеры приходится откачивать в течение нескольких часов. При этом весь конденсат попадает в масло форва-куумного насоса. Было предложено в этом случае закрывать камеру легкой крышкой из плексигласа с уплотнениями для ввода трубок. Крышку можно прижать к уплотнительной прокладке, откачивая воздух из камеры водоструйным насосом [Webb, lark, 1976]. [c.197]

Фирма MSE выпускает зональные роторы В-14 и В-15 аналогичной конструкции, причем каждый в двух вариантах (из алюминиевого сплава и титана). Зональными роторами (J F-Z) на 20 тыс. об/мин комплектуются и лабораторные рефрижераторные центрифуги J-21 фирмы Весктап . [c.197]

Не следует разгонять зональный ротор до больших скоростей, если он не заполнен целиком, т. е. до полного вытеснения воздуха из его полости. Изготовленная из норила крестовина может быть разорвана центробежными силами, если она не опирается на жидкость. [c.197]

При равновесном центрифугировании в градиенте плотности раствора s l резиновое кольцо, уплотняющее крышку зонального ротора, желательно менять после каждого опыта, поскольку раствор s l разъедает резину. После опыта ротор разбирают, вынимают крестовину и все детали тщательно споласкивают теплой водой. Через каналы крестовины прогоняют- [c.198]

Так, для препаративного разделения рибосомных субъединиц в зональный ротор Т1-15 подавали экспоненциальный градиент сахарозы [8урЬег(1, 1гетап, 1974]. В смесителе постоянного объема (700 мл) находился раствор сахарозы с концентрацией 7,4%, а в резервуаре —50%-ный раствор. Объем градиента был небольшим (всего 700 мл), что обеспечивало в роторе диапазон концентраций 7,4—38%. Вместе с подушкой из 45%-ной сахарозы градиент занимал лишь половину объема ротора — слой в [c.275]

Другой способ заключается в наслаивании образца на поверхность раствора с непрерывным градиентом плотности, охватывающим диапазон плотностей всех компонентов смеси. Центрифугирование проводят до тех пор, пока плавучая плотность частиц не сравняется с плотностью соответствующих зон, т. е. пока не произойдет разделение частиц по зонам. Метод получил название зснально-изопикнического, или рв -зонального центрифугирования, так как основным моментом здесь является плавучая плотность (рв), а не размеры или форма частиц (рис. 2.4). На величину плотности, при которой частицы образуют изопикнические полосы, влияет природа среды суспендирования частицы могут быть проницаемыми для одних соединений, находящихся в растворе, и непроницаемыми для других или же присоединять молекулы раствора. При использовании зонального ротора (разд. 2.5.3) митохондрии, лизосомы, перок-сисомы и микросомы концентрируются в полосах с 42 %-, 47%-, 47%-и 27%-НОЙ сахарозой, соответствующих плотности 1,18, 1,21, 1,21 и 1,10 г-см"3 соответственно. Плотность субклеточных органелл зависит также и от избирательного поглощения ими определен- [c.48]

В настоящее время самыми совершенными моделями являются препаративные ультрацентрифуги Супер-Спид-65 , Хитачи 65Р и Спинко модель Л2-65В. При скоростях до 65 ООО об/мии предельное ускорение составляет 420 ООО g. Эти центрифуги имеют широкий набор угловых и горизонтальных роторов, выплавленных из алюминия и титана, а центрифуга Супер-СпиД 65 имеет два зональных ротора (см. ниже), которые можно использовать без модификации самой центрифуги. [c.192]

Зональные роторы, В поисках решения яроблемы разделения больших количеств ряда субстанций — макромолекулы, субклеточные частицы и вирусы — доктор Андерсон из Национальной лаборатории ОУК Ридж (США) разработал роторы для зонального центрифугирования в которых градиент и исследуемое вещество можно вносить в ротор и извлекать нз него непосредственно во время вращения ротора. Подобные операции невозможны в роторах с подвесными приборами. [c.198]

Схема работы зонального ротора показана на рисун ке 18. Ротор помещается в центрифужную камеру и разгоняется при низкой скорости. Наиболее легкие фракции преформированного градиента накачиваются во вращающийся ротор через каналы в перегородках. Жидкость обра-зует равномерный слой вокруг стенки ротора под действием слабого центробежного ускорения (рис, 18, а). По мере того как в ротор накачиваются более плотные фракции вещества, легкие фракции жидкости все время смещаются к центру ротора до тех пор пока ротор полностью не заполнится жидкостью, образующей градиент плотности (рис. 18, б). На этой стадии исследуемый образец вводится через трубку, ведущую в центральную часть ротора, чтобы вносимый материал располагался вокруг оси ротора (рис. 18, в). При этом часть жидкости, образующей градиент (наиболее плотные фракции), выдавливается через трубку, соединенную с периферической частью ротора. Чтобы устранить механические помехи, исследуемый образец оттесняют от центра ротора введением в централь- [c.199]

Имеется три основных типа зональных роторов. Их выпускают две фирмы Бекман (США) и МСЕ (Англия). Фирма МСЕ выпускает ассортимент зональных роторов для ряда моделей своих центрифуг Эти роторы можно использовать в качестве стандартного цодсобпого оборудования без какой-либо модификации центрифуг. [c.200]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология