Очистка и фракционирование макромолекул

ОЧИСТКА И ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ МАКРОМОЛЕКУЛ [c.137]

Биохимический анализ часто сопряжен с разрущением тонкой структуры клеток. Однако в настоящее время разработаны методы мягкого фракционирования клеточного содержимого, целью которых является сохранение функции различных клеточных компонентов. Подобно тому как ткань можно разделить на составляющие клетки различных типов, клетки можно разделить на ее функциональные органеллы и макромолекулы. В этом разделе мы сосредоточим внимание на методах, позволяющих проводить очистку органелл и белков Родственные методы мечения макромолекул радиоизотопами и антителами, равно как и чрезвычайно эффективные методы анализа ДНК и функции генов, обсуждаются в последующих разделах. [c.208]

Можно указать на некоторые другие применения ультрафильтрации в промышленности и фармакологии очистка антибиотиков, концентрирование и диафильтрация альбумина, процесс непрерывного сбора продуктов ферментации, очистка кристаллизационных растворов и кондиционирование поверхности кристаллов, очистка сывороток диафильтрацией при получении диагностических реактивов концентрирование и очистка ферментов, фракционирование макромолекул, концентрирование гормональных препаратов, стерилизация растворов для внутривенного введения, удаление пирогенных веш,еств, концентрирование вирусов, регенерация масляно-эмульсионных смесей, очистка стоков и регенерация растворов гальванических производств. [c.366]

Фракционирование полимеров. Синтетические и природные полимеры, как правило, неоднородны. Неоднородность полимеров может быть трех типов 1) по молекулярному весу, 2) по химическому составу, 3) по конфигурации макромолекул и структуре. Неоднородность синтетических полимеров по молекулярному весу (или полидисперсность) является следствием особенностей механизма полимеризации, а в случае природных полимеров — следствием деструкции и структурирования при их выделении и очистке. Неоднородность по химическому составу возникает при получении графт-, блок- и статистических сополимеров. Третий вид неоднородности связан с различием в конфигурации макромолекул (линейные и разветвленные макромолекулы) и тактичности. Таким образом, полидисперсность полимеров является их основным свойством и влияет на все свойства полимерного вещества как в растворе, так и в блоке. [c.323]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Как правило, при средних мол. массах (до 50—70 тыс.) подавляющее большинство полимеров практически не токсично. Это объясняется, вероятно, тем, что карбоцепные макромолекулы почти не метаболизируют и выводятся из организма в неизмененном виде. Существенно также, что при выделении и очистке Ф, а, и,, а также при создании полимерных лекарственных форм (р-ров, иленок, гелей и др,) удаляются инициаторы полимеризации, мономеры и олигомеры, к-рые часто токсичны. Кроме того, поскольку эффективность и длительность нахождения Ф, а, п, в организме зависят от мол, массы, принимаются спец, меры (подбор условий полимеризации, фракционирование, диализ и т, д.) для иолучения фракций с достаточно узким молекуляр-но-массовым распределением, [c.369]

Вскоре после первой статьи та же группа исследователей опубликовала работы по фракционированию полипептидов [12], белков [12, 13, 59, 102], пептидов [59, 102], аминокислот [95, 103], поли- и олигосахаридов [131]. В этой же лаборатории были сделаны и другие работы, посвященные многочисленным и разнообразным применениям метода ГПХ, например для очистки гормонов [58] и ферментов [59], для разделения макромолекул и низкомолекулярных соединений [102], а также посвященные некоторым специальным задачам, например исследованию сорбции [42], влияния на результаты фракционирования скорости потока элюента, размера частиц геля, объема и вязкости образца [187] и автоматизации метода [11]. [c.115]

Виды ультрацентрифуг. Все отечественные и зарубежные ультрацентрифуги можно разделить на два типа аналитические и препаративные. Аналитические центрифуги позволяют анализировать распределение вещества в пробирке в течение всего времени. Препаративные, как правило, используются для получения и очистки клеточных органелл и макромолекул, т. е. для получения чистых фракций, препаратов (отсюда название—препаративная). Для беспрерывного наблюдения аналитические центрифуги снабжены оптической системой. При работе на препаративных центрифугах применяют фракционирование содержимого центрифужной пробирки с тем, чтобы в каж- [c.104]

При очистке больших количеств макромолекул, где требуются различные виды фракционирования, часто бывает необходимо удалить соли, сменить буфер, сконцентрировать вещество, удалить вещества типа фенола и детергенты, используемые при выделении и очистке нуклеиновых кислот. Эти процедуры часто занимают много времени (например, осаждение или диализ) и поэтому могут приводить к потерям нестабильных веществ. Гель-проникающая хроматография позволяет быстро решить эти задачи. Например, соли и небольшие молекулы легко могут быть удалены, поскольку они задерживаются всеми гелями. [c.202]

Однако очистка большинства вирусов животных до середины 50-х годов представляла значительную проблему. Попытки применения методов белковой химии для очистки вирусов животных не принесли желаемых результатов. Поэтому вирус табачной мозаики длительное время выполнял роль основного и едва ли пе единственного объекта исследований. Потребовалось более двух десятилетий на исключительно большую теоретическую и экспериментальную работу, прежде чем были созданы современные, весьма изящные методы выделения и фракционирования биологических макромолекул, в том числе и вирусов. [c.42]

Число концевых группировок обычно определяют, исходя из предполагаемого механизма реакции и из допущения, что они не претерпевают изменения в ходе реакции образования полимера, а также при выделении, очистке и фракционировании его. Так, например, принято считать, что при поликонденсации оксикислот или аминокислот (или при полимеризации лактонов и лактамов) полученные полиэфиры и полиамиды обязательно должны содержать на одном конце макромолекулы карбоксильную группу, а на другом — гидроксильную или аминную. Или, например, предполагается, что при полимеризации, инициированной перекисями, каждая молекула содержит два (при рекомбинационном механизме обрыва цепи) или один (при обрыве путем диспропорционирования) остаток молекулы перекиси. Однако такое допущение является весьма грубым, ибо в процессе реакции может происходить потеря или изменение природы концевых групп вследствие их неустойчивости при высокой температуре. Может иметь место также более сложный механизм образования полимера (попутное образование циклических и разветвленных полимеров, передача цепи, наложение различных механизмов обрыва и т. д.). В случае поликонденсации двух бифункциональных соединений (например, ди-карбоновой кислоты и гликоля) может иметь место нарушение эквивалентного соотношения компонентов в результате улетучивания одного из реагентов, и, таким образом, в образце полимера каких-то групп может оказаться больше, чем предполагается, исходя из экви-молекулярности соотношения компонентов реакции. [c.256]

Ультрафильтрация обычно используется для очистки и фракционирования растворов веществ, как синтетических, так и биологического происхождения. При ультрафильтрации примеси с низкой молекулярной массой (микрорастворенные вещества) проникают через мембрану, в то время как макромолекулы задерживаются. В этом случае ультрафильтрация по существу является диализом, движущей силой в котором является разность концентраций. Фракционирование заключается в разделении макромолекул различных размеров. [c.65]

Ситовая (гель-фильтрационная) хроматография связана в основном с различием в скоростях диффузии молекул и макромолекул компонентов смеси в поры соответствующих сорбентов, в частности набухающих органических пористых полимеров — сефадексов, биогелей, а также ненабухающих макропористых силикагелей или силохромов и макропористых стекол. В этом случае вещества с большими молекулярными весами, образующие наиболее крупные частицы, практически не диффундируют в поры и поэтому элюируют первыми. Удерживаемые объемы таких веществ на подходящих по размерам пор ситах увеличиваются с уменьшением их молекулярных весов или объемов. Это позволяет разделять олигомеры и смеси полимеров по молекулярным весам и в благоприятных случаях определять их размеры или молекулярновесовое распределение, а также производить препаративное фракционирование полимеров, очистку вирусов и бактерии [8]. [c.414]

В процессе работы над книгой мы вскоре поняли, что критическая оценка преимуществ и недостатков отдельных методов принесет читателю больше пользы, чем простое перечисление лабораторных прописей. Тем не менее некоторые наиболее важные процедуры описаны весьма детально, что позволит легко воспроизвести их в экспериментальной работе. Для специальных же методик указаны лишь самые существенные моменты, а подробности читатель сможет найти в соответствующих оригинальных работах. В главах, посвященных методам выделения различных групп белков, нуклеиновых кислот и глпкоз-аминогликанов, мы стремились показать, что применение того или иного приема фракционирования обусловлено свойствами разделяемых макромолекул данного типа. Во многих случаях выбор электрофоретического метода зависит от способов выделения и очистки анализируемого образца а стадиях, предшествующих электрофорезу, так как именно эти стадии сущест- [c.8]

Ознакомившись достаточно подробно с используемой техникой, перейдем к рассмотрению основных методов ультрацентрифугирования, применяемых для очистки и фракционирования белков, нуклеиновых кислот и субклеточных органелл дифференциального, зонально-скоростного и равновесного (изопикни-ческого). Они будут рассмотрены в этом же порядке. Под частицами будем, как и прежде, понимать не только молекулярные агрегаты, но и макромолекулы. [c.199]

Препаративные центрифуги, В настоящее время имеется большое количество превосходных препаративных ультрацентрифуг, способных развивать ускорение до 420 ООО . Они применяются для выделения, очистки и концентрирования вирусов и субклеточных частиц, фракционирования белков, нуклеиновых кислот, линопро-Т0ИДОВ и других макромолекул. Наиболее популярны следующие ультрацентрифуги Спинко модель Л и Л2 (США) Судер-Спид-40 ж 50 (Англия), ВАК-40 и ВАК-60 (ГДР) и Хитачи 55Р (Япония). В нашей стране выпускаются препаративная ультрацентрифуга типа УЦП. [c.192]