Гель-фильтрационная хроматография

Начало использования эксклюзионной или гель-проникающей, или гель-фильтрационной хроматографии относится по крайней мере к 1950 г. Наибольший успех наступил, когда начался промышленный выпуск гель-дек-страна—сефадекса. Эти гели позволили проводить разделение веществ в широком диапазоне молекулярных весов, однако при этом в качестве подвижной фазы ио-пользовали в основном воду или буферные водные растворы. При применении в качестве подвижной фазы водных растворов используют термин гель-фильтрационная хроматография, в то время как при применении неводных растворителей используют термин гель-проникаю-щая хроматография. В связи с тем, что в механизме этих разделений нет никакой разницы, было предложено употреблять один термин пространственная эксклюзионная хроматография. [c.86]

Гель-хроматография, гель-проникающая хроматография, гель-фильтрационная хроматография, хроматография на молекулярных ситах — вариант хроматографического анализа, основанный на различной доступности пор сорбента для макромолекул разных размеров. Колонку заполняют измельченным гелем [c.97]

Молекулярно-ситовая (гель-фильтрационная) хроматография [c.15]

Объем их при набухании во много раз увеличивается, и пористость возрастает пропорционально объему поглощенного растворителя. Мягкие гели используются в основном с водными растворителями, и в этом случае метод называют гель-фильтрационной хроматографией. [c.187]

Вязкость растворителя. Вязкость растворителя играет больщую роль в ГПХ, так как высокая вязкость ограничивает диффузию и ухудшает разрешение, что особенно важно при анализе макромолекул, которые имеют относительно низкие коэффициенты диффузии. Растворитель должен быть совместим с детектором и должен позволять отличать вещество от растворителя. В настоящее время в ГПХ чаще всего используется дифференциальный рефрактометр. Поэтому в качестве растворителей широко применяются толуол, трихлорбензол и л(-крезол в этой методике они предпочтительны для многих полимеров, растворимых в органических растворителях, и позволяют использовать рефрактометр. Однако они редко применяются в гель-фильтрационной хроматографии не только из-за своих свойств, но также из-за сильного поглощения в УФ-области, так как в этой методике обычно используются УФ-де-текторы. [c.198]

Гель-проникающая хроматография используется в основном как метод определения молекулярновесового распределения полимерных веществ, в то время как гель-фильтрационная хроматография является главным образом методом препаративного разделения, но и в том и в другом случае пригодны обе методики. При определении молекулярновесового распределения необходимо установить связь между хроматограммой и молекулярным размером или, правильнее, молекулярным весом. Сделать это можно с помощью калибровочной кривой. Если разрешение такое, что каждому компоненту соответствует индивидуальный пик, соотношение будет достаточно строгим (рис. 7.13). Отклонения, как известно, проявляются в тех случаях, когда молярный объем или размеры молекулы в растворе не коррелируются с молекулярным весом. [c.208]

Молекулярно-ситовый эффект получил распространение и в хроматографии, в частности в методе, получившем название гель-проникающая или гель-фильтрационная хроматография (ГПХ или ГФХ). Неподвижная фаза состоит из гранул пори- [c.437]

Рис. 5.13. Зависимость удерживаемого объема в гель-фильтрационной хроматографии от молекулярного веса 1 .

Во второй части книги (главы 10—13) рассматриваются вопросы селективности, эффективности и аналитического применения жидкостно-адсорбционной хроматографии. Жидкостная хроматография полимеров (ситовая или так называемая гель-фильтрационная хроматография) и жидкостная хроматография в тонких слоях, изложенные в ряде специальных монографий, не рассматриваются. [c.6]

Жидкостная ситовая (гель-фильтрационная) хроматография (ЖСХ) обладает большими возможностями для разделения и анализа высокомолекулярных соединений, белков и полимеров, а также для исследования свойств макромолекул. Этим методом, который основан на разделении молекул по размерам, можно оценить конформацию макромолекул в растворе, оценить молекулярный [c.424]

По традиции процесс, проводимый в органических растворителях, все еще часто называют гель-проникающей, а в водных системах — гель-фильтрационной хроматографией. В данной книге для обоих вариантов принят единый термин, который происходит от английского Size Ex lusion — исключение по размеру — ив наиболее полной степени отражает механизм процесса. [c.40]

Гель-хроматография служит для определения веществ с одаосительной молекулярной массой более 2000, причем гель-фильтрационная хроматография применяется для разделения водорастворимых соединений, а гель-проникающая — для разделения водонерастворимых соединений. [c.291]

Для аналитических и препаративных разделений пептидов и белков применяются такие гидрофильные полимерные материалы, как полидекстрины. В эксклюзионной хроматографии используют пористые полимеры с широкими порами. Эксклюзионная хроматография с органическими элюентами называется гель-проникающей хроматографией и применяется для разделения полимеров. Эксклюзионная хроматография с водными элюентами — гель-фильтрационная хроматография — используется для разделения биомолекул. [c.312]

Природа пористого материала. Перед использованием в молекулярноситовой хроматографии пористый материал должен набухнуть и впитать жидкую фазу, чтобы образовалась наполненная растворителем губка , в которую молекулы могут диффундировать. Поскольку молекулярно-ситовая хроматография проводится с различными жидкими фазами, начиная от воды и кончая углеводородными растворителями, то необходим большой набор различных пористых материалов — от гидрофильных, которые набухают в воде, до липофильных, которые впитывают неполярные органические растворители. Наиболее широко используемым гидрофильным материалом является искусственно сшитый полисахарид, полученный при обработке декстрана (природного полимера глюкозы) различными количествами эпихлоргидрина для получения определенной степени сшитости между цепями. Существует по крайней мере восемь различных степеней сшитости между цепями самый плотный гель будет исключать соединения с молекулярными массами свыше 700. Для полного исключения соединений на большинстве открытых гелей их молекулярные массы должны быть свыше 200 000. Пределы ситового исключения других пористых материалов, включая полиакриламид (имеющий десять различных степеней пористости) и гели агарозы, достигаются для соединений с молекулярными массами до 150000 000. Могут быть также использованы твердые , жесткие материалы, такие как стеклянные зерна с контролируемой пористостью. Молекулярно-ситовую хроматографию, в которой пример няют водную подвижную фазу, иногда называют гель-фильтрационной хроматографией. [c.597]

Колонки и детекторы контроль потока подвижной фазы. Для гель-фильтрационной хроматографии с использованием декстрановых гелей обычно применяют простые стеклянные колонки диаметром 2,5 см и длиной 50 см. В таких колонках Уо равен от 50 до 100 мл, а (Уо Уг) —от 200 до 250 мл. Раствор пробы массой несколько миллиграммов вводят в колонку через ее верхнюю часть. Обнаружение зон растворенных веществ по мере их появления из колонки можно проводить посредством спектрофотометрического контроля элюата, измерением его показателя преломления или собирая аликвотные части для дальнейшего анализа. Подвижной фазе позволяют протекать через гeль-ф,ильтpaциoн yю колонну иод действием силы тяжести со скоростью около 3,5 мл/ч на каждый квадратный сантиметр сечения колонки. Так, для колонки диаметром 2,5 см скорость потока равна приблизительно 16 мл/ч, а время, необходимое для элюирования самых малых молекул, составляет около 16 ч. Большая скорость элюирования недопустима, так как мягкий гель деформируется потоком подвижной фазы и колонка выходит из строя (гель выдавливается или же спрессовывается и закупоривает колонку). [c.598]

В последние годы получила развитие гель-фильтрационная хроматография, предложенная Киркландом. Колонку заполняют сорбентом с высокой пористостью — сефадексом, разделение обусловлено размером пор этого сильно набухающего сорбента. [c.82]

Чаще всего повышенные температуры используют в ионообменной хроматографии, где температуру колонок можно поддерживать в интервале 25—80 °С. Необходимо иметь в виду, что большинство ионообменных смол нельзя использовать при температурах выше 100 °С, кроме того, в качестве подвижных фаз применяются водные растворы. Повышение температуры колонок иногда может оказаться целесообразным в гель-проникающей и гель-фильтрационной хроматографии для улучшения растворимости высокомолекулярных полимеров. В то же время жидкостная хроматография идеально подх одит для анализа нестабильных соединений, которые не выдерживают нагревания. При анализе таких соединений нагрев колонки не производят. Больше того, с некоторыми ферментами необходимо работать при 5°С, так что требуется охлаждение, а не нагревание. [c.32]

На рис. 5,12 показано суммарное влияние вещества— регулятора и температуры на удерживаемый объем ди-нонилфталата (ДНФ). Температура также влияет на разделение в гель-проникающей и гель-фильтрационной хроматографии [11]. На рис. 5.13 показаны резличия в отнощениях удерживаемых объемов, полученные при [c.106]

Ситовая (гель-фильтрационная) хроматография связана в основном с различием в скоростях диффузии молекул и макромолекул компонентов смеси в поры соответствующих сорбентов, в частности набухающих органических пористых полимеров — сефадексов, биогелей, а также ненабухающих макропористых силикагелей или силохромов и макропористых стекол. В этом случае вещества с большими молекулярными весами, образующие наиболее крупные частицы, практически не диффундируют в поры и поэтому элюируют первыми. Удерживаемые объемы таких веществ на подходящих по размерам пор ситах увеличиваются с уменьшением их молекулярных весов или объемов. Это позволяет разделять олигомеры и смеси полимеров по молекулярным весам и в благоприятных случаях определять их размеры или молекулярновесовое распределение, а также производить препаративное фракционирование полимеров, очистку вирусов и бактерии [8]. [c.414]

Определение молекулярных масс осмотические методы - теория - среднечисловая молекулярная масса — экспериментальные методы — светорассеяние - средневесовая молекулярная масса — ультрацентрифугирование -кянстанты диффузии - седиментационное равновесие - характеристические вязкости - молекулярно-массовые характеристики - средневязкостная молекулярная масса и полидисперсность - ИК и ЯМР полимеров -гель-фильтрационная хроматография. [c.378]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология