Гель-хроматография гель-фильтрационная хроматография

Гель-хроматография, гель-проникающая хроматография, гель-фильтрационная хроматография, хроматография на молекулярных ситах — вариант хроматографического анализа, основанный на различной доступности пор сорбента для макромолекул разных размеров. Колонку заполняют измельченным гелем [c.97]

Молекулярно-ситовая (гель-фильтрационная) хроматография [c.15]

Объем их при набухании во много раз увеличивается, и пористость возрастает пропорционально объему поглощенного растворителя. Мягкие гели используются в основном с водными растворителями, и в этом случае метод называют гель-фильтрационной хроматографией. [c.187]

Вязкость растворителя. Вязкость растворителя играет больщую роль в ГПХ, так как высокая вязкость ограничивает диффузию и ухудшает разрешение, что особенно важно при анализе макромолекул, которые имеют относительно низкие коэффициенты диффузии. Растворитель должен быть совместим с детектором и должен позволять отличать вещество от растворителя. В настоящее время в ГПХ чаще всего используется дифференциальный рефрактометр. Поэтому в качестве растворителей широко применяются толуол, трихлорбензол и л(-крезол в этой методике они предпочтительны для многих полимеров, растворимых в органических растворителях, и позволяют использовать рефрактометр. Однако они редко применяются в гель-фильтрационной хроматографии не только из-за своих свойств, но также из-за сильного поглощения в УФ-области, так как в этой методике обычно используются УФ-де-текторы. [c.198]

Молекулярно-ситовый эффект получил распространение и в хроматографии, в частности в методе, получившем название гель-проникающая или гель-фильтрационная хроматография (ГПХ или ГФХ). Неподвижная фаза состоит из гранул пори- [c.437]

Начало использования эксклюзионной или гель-проникающей, или гель-фильтрационной хроматографии относится по крайней мере к 1950 г. Наибольший успех наступил, когда начался промышленный выпуск гель-дек-страна—сефадекса. Эти гели позволили проводить разделение веществ в широком диапазоне молекулярных весов, однако при этом в качестве подвижной фазы ио-пользовали в основном воду или буферные водные растворы. При применении в качестве подвижной фазы водных растворов используют термин гель-фильтрационная хроматография, в то время как при применении неводных растворителей используют термин гель-проникаю-щая хроматография. В связи с тем, что в механизме этих разделений нет никакой разницы, было предложено употреблять один термин пространственная эксклюзионная хроматография. [c.86]

Рис. 5.13. Зависимость удерживаемого объема в гель-фильтрационной хроматографии от молекулярного веса 1 .

Во второй части книги (главы 10—13) рассматриваются вопросы селективности, эффективности и аналитического применения жидкостно-адсорбционной хроматографии. Жидкостная хроматография полимеров (ситовая или так называемая гель-фильтрационная хроматография) и жидкостная хроматография в тонких слоях, изложенные в ряде специальных монографий, не рассматриваются. [c.6]

Жидкостная ситовая (гель-фильтрационная) хроматография (ЖСХ) обладает большими возможностями для разделения и анализа высокомолекулярных соединений, белков и полимеров, а также для исследования свойств макромолекул. Этим методом, который основан на разделении молекул по размерам, можно оценить конформацию макромолекул в растворе, оценить молекулярный [c.424]

В анализе нефтяных ГАС получили распространение сорбционные и хроматографические процессы, основанные на использовании адсорбционного, абсорбционного (разделение на инертном носителе, смоченном не испаряющейся в условиях анализа жидкостью), ионообменного, эксклюзионного (молекулярно-ситового, гель-фильтрационного) и координационного принципов разделения, в колоночном или плоскостном (тонкослойная или бумажная хроматография) техническом оформлениях, с применением жидкой или газообразной подвижной фазы, [c.15]

По механизмам разделения хроматографию подразделяют на адсорбционную (газовую или жидкостную), осадочную, ионообменную, распределительную, гель-фильтрационную (гель-хроматографию) и био- [c.101]

Выбор подвижной фазы зависит от типа используемой неподвижной фал зы. Гель-хроматографические системы могут быть разделены на гель-фильтрационную и гель-проникающую хроматографию. [c.290]

Гель-хроматография (гель-фильтрационная, гель-проникающая, молекулярно-ситовая хроматография) применяется для разделения и анализа высокомолекулярных соединений, а также для отделения кх от низкомолскулярных веществ. Этим методом можно определить мо.пеку-лярную массу полимеров, рассчитать кривую распределения макромолекул по молекулярным массам. [c.58]

По традиции процесс, проводимый в органических растворителях, все еще часто называют гель-проникающей, а в водных системах — гель-фильтрационной хроматографией. В данной книге для обоих вариантов принят единый термин, который происходит от английского Size Ex lusion — исключение по размеру — ив наиболее полной степени отражает механизм процесса. [c.40]

Эксклюзионная хроматография является одним из методов жидкостно-твердофазной хроматографии, обеспечивающих разделение веществ в зависимости от размеров и формы молекул. Такая возможность открывается при использовании пористых неподвижных фаз с определенными размерами пор, соизмеримыми с размерами молекул. Метод за годы своего существования имел целый ряд названий, которые или полностью тождественны, или имеют несущественные смысловые отличия гель-проникающая, гель-фильтрационная, молекулярно-ситовая. Первый из выщеперечисленных терминов использовался при анализе органических веществ в органических растворителях, второй — в неорганическом анализе водных растворов, последний, как и современный термин — эксклюзионная, является собирательным понятием. В отличие от других хроматографических методов, использующих различия в химических свойствах разделяемых веществ, проявляющихся при их распределении между стационарной и подвижной фазами, разделение в эксклюзионной хроматографии основано на ситовом эффекте. Растворитель (подвижная фаза) заполняет в колонке как внешний объем между зернами геля, так и внутренний объем пор. Объем растворителя между зернами геля — называют промежуточным, транспортным или мертвым объемом, а внутренний объем пор — рассматривается как объем стационарной фазы. Когда в колонку вводят пробу, содержащую несколько типов ионов или молекул с разными размерами, то они стремятся перейти из подвижной фазы внутрь пор. Такое проникновение обусловлено энтропийным распределением, поскольку концентрация молекул разделяемых веществ в наружном растворе оказывается выше, чем в поровом пространстве. Но оно становится возможным только в том случае, если размеры ионов или молекул меньше диаметра пор. [c.209]

Природа пористого материала. Перед использованием в молекулярноситовой хроматографии пористый материал должен набухнуть и впитать жидкую фазу, чтобы образовалась наполненная растворителем губка , в которую молекулы могут диффундировать. Поскольку молекулярно-ситовая хроматография проводится с различными жидкими фазами, начиная от воды и кончая углеводородными растворителями, то необходим большой набор различных пористых материалов — от гидрофильных, которые набухают в воде, до липофильных, которые впитывают неполярные органические растворители. Наиболее широко используемым гидрофильным материалом является искусственно сшитый полисахарид, полученный при обработке декстрана (природного полимера глюкозы) различными количествами эпихлоргидрина для получения определенной степени сшитости между цепями. Существует по крайней мере восемь различных степеней сшитости между цепями самый плотный гель будет исключать соединения с молекулярными массами свыше 700. Для полного исключения соединений на большинстве открытых гелей их молекулярные массы должны быть свыше 200 000. Пределы ситового исключения других пористых материалов, включая полиакриламид (имеющий десять различных степеней пористости) и гели агарозы, достигаются для соединений с молекулярными массами до 150000 000. Могут быть также использованы твердые , жесткие материалы, такие как стеклянные зерна с контролируемой пористостью. Молекулярно-ситовую хроматографию, в которой пример няют водную подвижную фазу, иногда называют гель-фильтрационной хроматографией. [c.597]

Колонки и детекторы контроль потока подвижной фазы. Для гель-фильтрационной хроматографии с использованием декстрановых гелей обычно применяют простые стеклянные колонки диаметром 2,5 см и длиной 50 см. В таких колонках Уо равен от 50 до 100 мл, а (Уо Уг) —от 200 до 250 мл. Раствор пробы массой несколько миллиграммов вводят в колонку через ее верхнюю часть. Обнаружение зон растворенных веществ по мере их появления из колонки можно проводить посредством спектрофотометрического контроля элюата, измерением его показателя преломления или собирая аликвотные части для дальнейшего анализа. Подвижной фазе позволяют протекать через гeль-ф,ильтpaциoн yю колонну иод действием силы тяжести со скоростью около 3,5 мл/ч на каждый квадратный сантиметр сечения колонки. Так, для колонки диаметром 2,5 см скорость потока равна приблизительно 16 мл/ч, а время, необходимое для элюирования самых малых молекул, составляет около 16 ч. Большая скорость элюирования недопустима, так как мягкий гель деформируется потоком подвижной фазы и колонка выходит из строя (гель выдавливается или же спрессовывается и закупоривает колонку). [c.598]

В последние годы получила развитие гель-фильтрационная хроматография, предложенная Киркландом. Колонку заполняют сорбентом с высокой пористостью — сефадексом, разделение обусловлено размером пор этого сильно набухающего сорбента. [c.82]

Ситовая хроматография В ситовой хроматографии, которая известна также как гель-фильтрационная, гель-проникаюшая, или молекулярно-ситовая, используется способность материалов с контролируемой пористостью сортировать и разделять компоненты смеси в соответствии с размером и формой их молекул. Ситовая хроматография развивалась по двум параллельным направлениям, удивительно мало влиявшим друг на друга. Одно направление - применение гидрофильных полимеров, та- [c.14]

Чаще всего повышенные температуры используют в ионообменной хроматографии, где температуру колонок можно поддерживать в интервале 25—80 °С. Необходимо иметь в виду, что большинство ионообменных смол нельзя использовать при температурах выше 100 °С, кроме того, в качестве подвижных фаз применяются водные растворы. Повышение температуры колонок иногда может оказаться целесообразным в гель-проникающей и гель-фильтрационной хроматографии для улучшения растворимости высокомолекулярных полимеров. В то же время жидкостная хроматография идеально подх одит для анализа нестабильных соединений, которые не выдерживают нагревания. При анализе таких соединений нагрев колонки не производят. Больше того, с некоторыми ферментами необходимо работать при 5°С, так что требуется охлаждение, а не нагревание. [c.32]

На рис. 5,12 показано суммарное влияние вещества— регулятора и температуры на удерживаемый объем ди-нонилфталата (ДНФ). Температура также влияет на разделение в гель-проникающей и гель-фильтрационной хроматографии [11]. На рис. 5.13 показаны резличия в отнощениях удерживаемых объемов, полученные при [c.106]

Ситовая (гель-фильтрационная) хроматография связана в основном с различием в скоростях диффузии молекул и макромолекул компонентов смеси в поры соответствующих сорбентов, в частности набухающих органических пористых полимеров — сефадексов, биогелей, а также ненабухающих макропористых силикагелей или силохромов и макропористых стекол. В этом случае вещества с большими молекулярными весами, образующие наиболее крупные частицы, практически не диффундируют в поры и поэтому элюируют первыми. Удерживаемые объемы таких веществ на подходящих по размерам пор ситах увеличиваются с уменьшением их молекулярных весов или объемов. Это позволяет разделять олигомеры и смеси полимеров по молекулярным весам и в благоприятных случаях определять их размеры или молекулярновесовое распределение, а также производить препаративное фракционирование полимеров, очистку вирусов и бактерии [8]. [c.414]

Определение молекулярных масс осмотические методы - теория - среднечисловая молекулярная масса — экспериментальные методы — светорассеяние - средневесовая молекулярная масса — ультрацентрифугирование -кянстанты диффузии - седиментационное равновесие - характеристические вязкости - молекулярно-массовые характеристики - средневязкостная молекулярная масса и полидисперсность - ИК и ЯМР полимеров -гель-фильтрационная хроматография. [c.378]

За последние годы широкое применение для разделения высокомолекулярных веществ и определения их молекулярной массы нашел предложенный Л. Поратом и П. Флодином метод гель-фильтрации (гель-хроматографии). Гель-хроматография состоит в фильтровании исследуемого раствора через колонки, заполненные зернами набухающего трехмерного полимера (сефадекса). Набухшие зерна сефадекса представляют собой своеобразные клетки , внутрь которых могут проникнуть путем диффузии только молекулы (ионы) подходящего размера. Более крупные молекулы проходят с фильтрационным потоком мимо зерен сефадекса (рис, 10.8). Набор различных марок сефадексов с возрастающим размером клеток позволяет отделять низкомолекулярньк вещества от высокомолекулярных, разделять макромолекулы, изучать образование ассоциатов в макромолекулярныхрастворах. [c.299]

Гель-хроматография служит для определения веществ с одаосительной молекулярной массой более 2000, причем гель-фильтрационная хроматография применяется для разделения водорастворимых соединений, а гель-проникающая — для разделения водонерастворимых соединений. [c.291]

Опыт 3-18. Фракционирование полиакриламида методом гель-фильтрацион-ной хроматографии [c.135]

Варианты ЖТХ в зависимости от механизма удерживания разделяемых веществ твердой фазой жидкостно-адсорбционная хроматография (ЖАХ), ионообменная хроматография (ИОХ), аффинная хроматография, лигандообменная хроматография (ЛОХ), эксклюзи-онная, подразделяемая на гель-проникающую и гель-фильтрационную. [c.109]