Гидрофобные колонки

IL Характеристики гидрофильных и гидрофобных колонок при хроматографических разделениях. [c.543]

Функционирование гидрофобных адсорбентов основано на взаимодействиях, не играющих существенной роли в функционировании других адсорбентов. Поэтому теоретически следует ожидать, что с их помощью можно разделить компоненты смеси, которые ведут себя одинаково, например при ионообменной хроматографии. На практике же использование гидрофобной хроматографии ограниченно, поскольку этим методом не удается достичь четкого разделения фракционируемой смеси. Это обусловлено тем, что при изменении условий величина а изменяется медленно, и это приводит к значительному перекрыванию пиков отдельных компонентов (рис. 4.52). Кроме того, поскольку принципы гидрофобной хроматографии очень сходны с принципами дробного высаливания, в тех случаях, когда последний метод уже использовался, остается очень мало шансов получить хорошее разделение на гидрофобной колонке. Эти пессимистические соображения уравновешиваются некоторыми положительными моментами. Во-первых, емкость гидрофобных ионообменников по отношению к белкам весьма высока и находится в тех же пределах, что и у ионообменников, а именно 10— 100 мг/см . Во-вторых, поскольку адсорбция проводится лри вы- [c.184]

В общем случае распределительная хроматография на колонках с гидрофильными носителями обладает существенным недостатком, связанным с тем, что процесс распределения вещества зависит от состава и кислотности водной фазы. В то же время изменение состава водной фазы, находящейся на носителе, трудно осуществимо. Поэтому в колоночном варианте предпочитают применять гидрофобные носители. [c.217]

Для хроматографического разделения смеси растворенных веществ в колонках применяются носители различной молекулярной природы гидрофильные — удерживающие на своей поверхности воду и ограниченно набухающие в воде, и гидрофобные — удерживающие не смешивающиеся с водой органические растворители. [c.150]

Однако следует отметить, что использование для распределительной хроматографии носителей с неподвижной водной фазой обладает двумя существенными недостатками. В основе распределительной хроматографии лежит процесс экстракции, который зависит от состава и кислотности водной фазы. Изменение же состава водной фазы, закрепленной на носителе, сопряжено с известными трудностями. Кроме того, нанесение вещества при помощи тампона неизбежно приводит к сильному размыванию зон разделяемых веществ, а осуществить поглощение из органического растворителя не всегда возможно. Значительно удобнее так называемый метод обращенной фазы , когда на гидрофобном носителе удерживается органический растворитель, а водный раствор протекает через колонку [102]. [c.154]

Колонки с гидрофобными носителями [c.154]

В качестве гидрофобного носителя был испытан полимер трифторхлорэтилена, известный в дальнейшем под маркой Kel-F или как фторопласт-3 [105]. Он выпускается в виде порошка, который используется для нанесения защитных покрытий на металлические поверхности. Для набивки хроматографических колонок порошок измельчают и отбирают фракцию нужного размера, после чего смешивают с ТБФ или триоктиламином (TOA) в отношении 1 1, к полученной взвеси добавляют водный раствор и эту смесь заливают в колонку. [c.155]

Заполнение колонок можно проводить теми же методами, что и в обычной ВЭЖХ, если только входной фитинг колонки способен выдержать достаточно высокое давление Гидрофобные колонки, например колонки с октадецилсиликагелем (ОДС), можно заполнять вязкостным методом или суспензионным методом с неионным детергентом [c.50]

В продаже имеется значительный выбор матриксов различных типов (рис. 4-46). Ионообменные колонки набиты маленькими шариками, заряженными положительно или отрицательно. При использовании гаких колонок фракционирование белков происходит в соответствии с расположением зарядов на поверхности белковых молекул. Гидрофобные колонки наполнены шариками, из которых выступают гидрофобные цепи в таких колонках задерживаются белки с обнаженными гидрофобными участками. Колонки, предназначенные для гелъ-филътрации заполнены крошечными пористыми шариками при использовании таких колонок происходит разделение белков по размерам Молекулы небольшого размера по мере прохождения через колонку проникают внутрь шариков, а более крупные молекулы остаются в промежутках между шариками. В результате они быстрее проходят через колонку и выходят из нее первыми. Г ель-фильтрация обычно используется и для разделения молекул, и для определения их размеров. [c.212]

В 1953 г. была сделана первая попытка использовать в качестве гидрофобного носителя ацетилцеллюлозу, удерживающую хлороформенный раствор дитизона [103]. На Такой колонке при pH 7 концентрируются и выделяются из морской воды свинец, цинк, кадмий, марганец (II), медь и кобальт. Однако ацетилцеллюлоза оказалась неудачным носителем, во многих растворах она легко разрушается. Вслед за этим появились результаты ряда исследований, завершившихся предложениями различных носителей для распределительной хроматографии с обращенной фазой. Так, в качестве носителя органической фазы был предложен силиконированный силикагель (обработанный в целях гидрофобизации диметилдихлорсиланом порошкообразный силикагель), а в качестве неподвижной фазы — трибутилфосфат (ТБФ) [104]. На таких колонках были разделены цирконий и ниобий, редкоземельные эле- [c.154]

Адсорбенты представляют собой частицы шаровидной или неправильной формы приблизительно одинакового размера. Использ. силикагель с уд. пов-стью 20—600 м г и дгм-метром пор 4—100 нм, а также АЬОз. Часто примен. модифицированный силикагель, напр, с привитыми углеводородными rpynna -iH. Пов-сть таких адсорбентов становится гидрофобной, и с их помощью разделяют в-ва в водных р-рах при этом можно повысить т-ру колонки до 60—70 °С, что приводит к увеличению эффективности разделения в неск. раэ благодаря снижению вязкости элюента. [c.204]

На рис. 89 показаны результаты эксперимента, в котором элюцию смеси белков, включающей и цитохром-с-оксидазу, с колонки фенилсефарозы вели последовательно пятью разными детергентами. Как и следовало ожидать, цитохром-с-оксидазу снимает Тритон Х-100. Еще две зарегистрированные в опыте ферментативные активности выходят раньше, при элюции другими детергентами, а наибольшее количество сорбированного белка снимает с колонки на последнем этапе элюции ДДС-Na. Высокая эффективность ДДС-Na в качестве элюента, вероятно, связана с его относительно малой молекулярной массой. Можно предположить, что на каждый гидрофобный участок поверхности белка садится несколько молекул ДДС-Na, привнося тем самым сильно выраженную гидрофильную функцию. [c.185]

Авторы дайной работы обратили внимание на то, что n продажной октилсефарозе L-4B фирмы Pharma ia имеются какие-то особо гидрофобные примеси. Часть исследуемого ими фермента сорбировалась на колонке так прочно, что ЭГ ее не снимал. Для элюции этой доли фермента нужно было использовать 1 %-ный раствор холата натрия. Столь прочное задержание части фермента было связано именно с особенностями матрицы, поскольку при внесении на новую порцию сефарозы препарата, ранее снятого с колонки эти-ленгликолем, часть его снова так же прочно сорбировалась на матрице. Можно предположить, что при модификации сефарозы в октиловом спирте присутствовали более высокомолекулярные примеси. [c.188]

По незамещенным силанолам может происходить неконтролируемая сорбция белков или малых молекул, например ионов при так называемой ион-парной хроматографии (см. ниже), от чего страдают разрешающая способность и воспроизводимость хроматографического процесса. Во избежание этого силикагель после модифика ции обрабатывают еще и низкомолекулярным модификатором гидрофобной природы — триметилхлорсиланом. О том, какой эффект дает такая дополнительная обработка, молено судить по следующему примеру. Для фенилтиогндантоинового производного аргинина (ФТГ-Arg) на колонке Ultrasphere ODS , не обработанной триметилхлорсиланом, при элюции 50%-ным метанолом значение составляет 4,33. После такой обработки задержание ФТГ-Arg на колонке уменьшается настолько, что ему отвечает значение = 1,67. Между тем для ФТГ-Val подобного эффекта не наблюдается. Очевидно, что положительно заряженный остаток аргинина взаимодействует с отрицательным зарядом ионизированной силанольной группы. Из этого примера ясно, что экспериментатору следует знать, был ли имеющийся в его распоряжении сорбент дополнительно об- [c.189]

Этот выбор определяется степенью гидрофобности фракционируемых веществ. Поскольку предварительно оценить ее количественным образом невозможно, приходится идти по пути эмпирического подбора оптимальных условий хроматографии. При этом можно исходить из того, что такому оптимуму отвечает обычно значение коэффициента распределения вещества между фазами в интервале 8—10. Экспериментально такому значению К, как нам известно из гл. 1, соответствует примерно такое же отношение объемов элюции веществ к свободному объему колонки (или соотношение времен задержания). Будем иметь в виду, что гидрофобность матриц убывает в следующем ряду типов НР-18, НР-8, НР-2, а гидрофобность органических растворителей — в ряду ТГФ — ацетонитрил— пронанол—метанол. Можно рекомендовать следующую последовательность операций при подборе условий эксперимента [c.192]

В другом варианте обратнофазовой гидрофобной хроматографии плазмы крови на колонке Li hrosorb RP-8 элюцию вели в среде, подкисленной до рП 3 монохлоруксусной кислотой, используя выпуклый градиент концентрации ацетонитрила (0—45%) в смеси с 0,05 М раствором ДДС-Na (1,4%о). Последний, по-видимому, блокирует заряды аминогрупп и обеспечивает гидрофобность аминокислот, т. е. играет роль ион-парного агента, как подробнее описано ниже для случая фракционирования пептидов. [c.194]

В другой работе [Bhown et al., 1981] для идентификации ФТГ-АК методом гидрофобной хроматографии на колонке Ultrasphere ODS использована двухступенчатая элюция метанолом в смеси с 0,04 М раствором ацетата натрия (pH 3,72) сначала неизменной концентрацией (23%) метанола, а затем линейным градиентом его концентрации (23—53%)). За 16 мин хорошо разделились все ФТГ-АК, за ис- [c.197]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология