Прототрофные клетки

В ЭТОМ случае. Клетки Hfr были повреждены в цистроне z, но по остальным они были прототрофны. Клетки F были прототрофны по Z, но ауксотрофны по крайнему маркеру Ad. Кроме того, они были устойчивы к стрептомицину. Рекомбинационный процесс можно было записать схемой [c.331]

Конъюгация — представляет перенос генетического материала от клетки к клетке при их контакте. Это явление было открыто Ледербергом и Татумом в 1946 г. Они смешали два ауксотрофных мутанта Е. oli К 12, каждый из которых был неспособен к синтезу разных аминокислот и витаминов. Смесь высеяли на питательную среду, не содержащую этих веществ. На среде выросли прототрофные колонии, способные самостоятельно синтезировать все витамины и аминокислоты, по которым были ауксотрофны взятые в опыт мутанты. Эти колонии появились в результате рекомбинации генов между родительскими штаммами. Частота появления прототрофных рекомбинантов была 10 . Необходимым условием рекомбинации является осуществление непосредственного контакта между клетками родительских штаммов. В дальнейшем получены электронные микрофотографии спаривающихся клеток, между которыми образовался цитоплазматический мостик. Показано, что в процессе конъюгации оба штамма неравноценны, и генетический материал переносится односторонне, т. е. всегда от одного штамма, который условно обозначили F+ (от англ. fertility — плодовитость), к другому, обозначенному F-. Штаммы-доноры стали [c.109]

У мицелиальных грибов для выделения ауксотрофных мутантов используют метод обогащения при фильтрации. Он основан на том, что при культивировании на минимальных средах прототрофные клетки делятся и образуют крупные задерживаемые фильтром частицы, а неделящиеся клетки промываются в фильтрат. Следует добавить, что методы обогащения с помощью пенициллина и фильтрации можно использовать для выделения мутантов, чувствительных к антибиотикам, повышенной температуре и т. д., если действие этих факторов обратимо останавливает рост клеток, но не убивает их. [c.75]

Положим, исходный организм принадлежит к дикому типу. В отношении сапрофитов это означает, что он способен расти на самой примитивной среде, содержащей любой сахар (или глицерин) в качестве источника углерода, соли аммония в качестве источника азота, сульфаты в качестве источника серы. Подобный организм называется прототрофным, а среду, на которой он растет, мы можем назвать минимальной. Все аминокислоты, пурины и пиримидины, витамины подобный микроб синтезирует сам. Мутируя, прототрофные организмы дают клетки с той или другой недостаточностью, утратившие способность сип- [c.293]

Превращения клетки в клетку Hfr. ЦИЮ прототрофного штамма [c.318]

Для определения относительной частоты каждого из одиннадцати генов дикого типа в экспоненциальной и стационарной культурах донора равные количества препаратов трансформирующей ДНК добавляли к компетентным клеткам каждого из ауксотрофов и для каждого мутантного гена подсчитывали число прототрофных трансформантов. Полученные значения нормировали путем деления на число Ме1" -трансформантов, образуемых при добавлении того же препарата ДНК к Met"-клеткам реципиента, и коэффициент, полученный таким способом для ДНК, выделенной из экспоненциальной культуры донора, делили на соответствующий коэффициент, полученный для ДНК донора стационарной культуры. Типичный результат приведен ниже. [c.205]

A. При скрещивании ревертанта А с клетками дикого типа все потомство (100 %) было прототрофным. [c.57]

B. При скрещивании ревертанта С с клетками дикого типа было получено 996 прототрофных клона и 4 ауксотрофных. [c.57]

После воздействия, индуцирующего мутации, и многочасового роста бактериальную суспензию инкубируют в среде с глюкозой, но без азота. Это делается для того, чтобы дать возможность клеткам использовать оставшиеся растворимые соединения азота. Через несколько часов добавляют пенициллин и сульфат аммония и проводят инкубацию (на этот раз продолжительностью до 24 ч.). Прототрофные родительские клетки растут, и пенициллин их убивает, тогда как ауксотрофные мутанты, нуждающиеся в определенной аминокислоте, не растут, и это позволяет им уцелеть. Затем суспензию освобождают от пенициллина промыванием или добавлением пенициллиназы и высевают на агаризованную среду, содержащую аминокислоты. Среди вырастающих в таких условиях бактерий процент ауксотрофных клеток оказывается более высоким (помимо них растут также прототрофные клетки, выдержавшие обработку пенициллином). Если бактерии устойчивы к пенициллину, то с той же целью можно применить другие антибиотики (новобиоцин, циклосерин, колистин, канамицин). Для избирательного уничтожения растущих клеток используют и такое явление, как летальный синтез . [c.451]

Зиндер и Ледерберг разработали прием селекции прямых мутантов,основанный па том же принципе устранения исходных клеток и сохранения в живых одних мутантов, т. е. прием работы на нулевом фоне. Здесь стояла на первый взгляд неразрешимая задача уничтожить дикие прототрофные клетки и одновременно оставить в живых дефектные мутанты. Неожиданное решение этой проблемы основано целиком на своеобразном физиологическом действии одного из ядов — пенициллина. Пенициллин отравляет в основном определенную физиологическую функцию клетки — рост ее оболочки. При отравлении бактериальных клеток пенициллином с ними происходит следуюгцее они синтезируют белки, но оболочка их остается неизменной. В конце концов разрывается оболочка и клетка гибнет, подвергаясь лизису. Следовательно, для того чтобы пенициллин убил бактериальные клетки, последние должны расти, т. е. находиться в подходяш ей для них питательной среде. [c.297]

При более подробном изучении трансдуцированных бактерий, которые приобрели признак Gal" от прототрофной клетки-донора, оказалось, что все трансдуктанты Gal" были либо активно лизогенными (выделяли при индукции инфекционный фа - X), либо по крайней мере иммунными к заражению экзогенным фагом к. Это показывает, что клетки нелизоген-ного реципиента К12 вместе с донорными генами приобрели профаг X. Выяснилось также, что большая часть трансдуктантов Gal+ в генетическом отношении нестабильна. В каждой колонии Gal содержится приблизительно 1—10% особей, утративших признак Gal+ и восстановивших фенотип Gal" их предка-реципиента. Это свойство трансдуктантов Gal+ сразу бросается в глаза, когда их высевают на ЭМС-агар с галактозой почти каждая красная колония трансдуктантов содержит бесцветные участки, образованные клонами выщепенцев Gal . Эти колонии, таким образом, аналогичны колониям диплоидов F-La /La на ЭМС-агаре с лактозой. На основании частого выщепления рецнпиентного генотипа Gal у трансдуктантов Gal (около 2-10" на одно деление) был сделан вывод, что эти трансдуктанты в действительности представляют со- [c.347]

Добавочные вещества. Помимо элементов минерального питания источников углерода и энергии многие организмы нуждаются еще в некоторых дополнительных веществах, называемых факторами роста. Эти вещества входят в основной состав клетки, но некоторые организмы не способны их синтезировать сами. Такие факторы роста относятся к трем группам соединений-к аминокислотам, пуринам и пири-мидинам, а также к витаминам. Аминокислоты, пурины и пирими-дины-составные части белков и нуклеиновых кислот, поэтому клетка нуждается в достаточных количествах этих соединений. Витамины же входят в состав коферментов или простетических групп и, таким образом, участвуют в каталитических функциях поэтому они необходимы только в очень малых количествах (табл. 6,2). Организмы, нуждающиеся в факторах роста, называют ауксотрофными и противопоставляют прототрофным организмам, которым такие факторы не нужны. [c.177]

Запаздывающее проявление мутаций. Если в гаплоидной клетке произойдет реверсия, превращающая ауксотрофную мутантную клетку в прототрофную, то такая обратная мутация сразу проявится в феноти пе. Восстановление способности вырабатывать определенный фермент можно в надлежащих условиях тотчас же распознать. Иначе обстоит дело с мутациями, приводящими, наоборот, к ауксотрофному состоянию, например к утрате способности синтезировать определенную аминокислоту. Такие мутации удается распознать лишь по прошествии периода, включающего несколько клеточных генераций. Запаздывающее проявление объясняется в данном случае тем, что, хотя мутация и делает невозможным синтез необходимого фермента, еще продолжает какое-то время действовать фермент, синтезированный ранее. Новый признак проявится лишь тогда, когда в результате клеточных делений произойдет достаточное разбавление этого фермента. С запаздывающим изменением фенотипа приходится также считаться при выявлении фагоустойчивых бактерий. Если фагочувствительные бактерии приобретают устойчивость в результате мутации, ведущей к утрате способности синтезировать особое рецепторное вещество, то эта устойчивость выявится лишь тогда, когда в результате ряда клеточных делений это вещество будет в достаточной мере разбавлено. [c.448]

На обычных твердых средах лишь немногие мутации можно непосредственно обнаружить по изменению пигмента, измененному росту колоний или иным признакам. Некоторые мутантные признаки выявляются при добавлении индикаторов или красителей. Для идентификации мутантов, отличающихся от родительских клеток пониженными или повышенными требованиями к питанию, приходится сравнивать рост тех и других на двух средах. Если, например, мутант утратил способность к синтезу лейцина, которой обладали клетки родительского (дикого) типа, то он будет расти только на той среде, к которой добавлена эта аминокислота. Мы называем такого мутанта ауксотрофны(м по лейцину, т.е. нуждаюнщмся в лейцине (1еи ), а также дефектным по лейцину, противопоставляя ему прототрофный дикий тип (leu ). Если в клеточной суспензии присутствуют одновременно и мутантные клетки 1еи , и про-то трофные клетки дикого типа, то эти два типа можно различить по росту на двух разных средах. Метод, обычно применяемый для выявления таких дефектных мутантов, представлен на рис. 15.8. [c.449]

Отбор бактерий-ауксотрофов существенно упростился благодаря открытию Ледер-берга. Он показал, что если популяцию, содержащую прототрофные и ауксотрофные бактерии и растущую на минимальной среде, обработать пенициллином, то выживают только ауксотрофы, поскольку пенициллин убивает лишь растущие клетки. Последующее перенесение клеток на минимальную среду, в которую добавлен соответствующий фактор роста, завершает отбор ауксотрофов. [c.487]

Прежде всего мы должны сообщить, что при конъюгации лишь одна клетка из миллиона или даже из десяти миллионов представляет собой истинный рекомбинант. Правда, вновь приобретенный признак передается по наследству. К тому же совершенно твердо установлено, что при этом не происходит обратной мутации к прототрофности. [c.170]

В том случае, когда ожидается с высокой вероятностью экспрессия клонированного гена, методы скрининга рекомбинантных клонов основываются либо на изменении фенотипа клетки под влиянием вновь синтезированного белка, либо просто на свойствах самого белка. Например, если необходимо изолировать гены Е. соИ, ответственные за биосинтез какой-либо аминокислоты, то отбирают рекомбинантные клоны, трансформируя гибридные плазмиды в ауксотрофные по биосинтезу аминокислот мутанты и получая прототрофные клоны. Это и есть тест на комплем 1и тацию. Прием очень удобный, но он исполь зуетея-ТУбычнопри самоклонировании , т. е. при переносе генов на многокопийных плазмидах в тот же микроорганизм, и требует наличия штаммов с хорошо охарактеризованными мутациями искомых генов. [c.154]

Бойс и Сетлоу [3] сообщают, что при добавлении в среду некоторых рибонуклеозидов и дезоксирибонуклеозидов в концентрации 250 мкг мл поглощение экзогенного тимидина клетками прототрофных штаммов Е. oli значительно увеличивается. [c.171]

Легче всего объяснить мутации типа La - -La , Тгр - -Тгр или - -His". Очевидно, что в этом случае мутантный фенотип обусловлен потерей каталитической функции фермента. Эта потеря функции обусловлена в свою очередь мутацией в гене, контролирующем первичную структуру соответствующей полипептидной цепи. Мутации такого типа должны, по-видимому, происходить с высокой частотой, обусловленной следующими причинами. Во-первых, замещение аминокислоты почти в любом месте полипептидной цепи, вероятно, нарушит третичную и четвертичную структуру белка таким образом, что он утратит свою каталитическую функцию. Поэтому любое из очень многих возможных мутационных изменений в соответствующем гене может привести к функционально дефектному мутантному фенотипу. Во-вторых, прототрофность (или способность сбраживать сахар) бактерий дикого типа зависит от последовательного действия нескольких ферментов. Поэтому при мутации в любом из этих нескольких генов возникнет мутантный, ауксотрофный, или неспособный сбраживать сахар, фенотип. Менее ясна природа мутирования Топ" — Toп так как механизм синтеза рецепторов для фага Т1 в клеточной стенке Е. соИ пока еще мало изучен. Тем не менее существуют косвенные указания на то, что отсутствие рецепторов для фага TI у мутантных клеток Топ обусловлено тем, что эти мутантные клетки утратили функциональный белок, имеющийся у клеток Топ . Но если это так, то почему мутации [c.152]

К моменту проведения этого эксперимента уже была известна генетическая трансформация пневмококков и было установлено, что она осуществляется бактериальной ДНК- Поэтому на первый взгляд казалось вероятным, что Ледерберг и Татум столкнулись всего лишь с другим случаем такой трансформации. Могло оказаться, например, что при совместном росте двух ауксотрофных родительских штаммов из некоторых клеток Met+ Bio штамма В в результате спонтанного лизиса выделялись молекулы ДНК, несущие гены met bio, и что эти молекулы проникали в компетентные клетки Thr Leu Thi штамма А, приводя к образованию прототрофных трансформантов. Однако весьма скоро выяснилось, что происхождение таких рекомбинантов едва ли можно объяснить трансформацией, поскольку было показано, что для их появления необходим непосредственный контакт между бактериями штаммов А и В. Так, Ледерберг и Татум показали, что если к культуре одного штамма добавить стерильный фильтрат среды, в которой был выращен другой штамм, то образования прототрофов не происходит, даже если клетки этого штамма были разрушены или лизированы непосредственно перед фильтрацией среды. В 1950 г. Дэвис получил дополнительные данные, подтверждающие результаты Ледерберга и Татума, проведя свой эксперимент в U-образной пробирке (фиг. 107). Два ауксотрофных штамма А и В высевали в ветви U-образной пробирки, которые были разделены в нижней части пористым стеклянным фильтром, непроницаемым для клеток Е. соИ, но пропускающим частицы размером менее 0,1 мкм, а следовательно, и свободные молекулы ДНК- Затем обе бактериальные культуры выращивали до насыщения. Повышая и понижая поочередно на одном из концов U-образной пробирки давление, медленно перегоняли культуральную жидкость из одной ветви в другую. В результате два ауксотрофных штамма использовали одну и ту же питательную среду, но между клетками непосредственного контакта не было. Ни в одной из ветвей U-образной трубки прототрофы обнаружены не были. Следовательно, для образования рекомбинантных бактериальных геномов необходимо, чтобы две конъюгирующие родительские клетки пришли в контакт. [c.216]

Эту возможность использовали в 1959 г. Чарлз Яновский и Леннокс для построения генетической карты тонкой структуры области trp хромосомы Е. oli. Эта область, как видно из общей карты на фиг. 123, расположена на кольцевой хромосоме в точке, приблизительно соответствующей 24-й минуте, поблизости от генов ton и i/sB, контролирующих структуру рецепторов фага Т1 и синтез аминокислоты цистеина соответственно. Для построения карты тонкой структуры Яновский и Леннокс сосредоточили свое внимание на наборе ауксотрофов Тгр , полученных Яновским. Эти мутанты распадаются на пять четких классов (табл. 5), различающихся по потребностям в факторах роста и по характеру накапливающихся в клетке метаболитов, что в свою очередь зависит от того, какой именно из последних этапов биосинтеза триптофана (фиг. 37) у этих мутантов блокирован. Каждый из этих ауксотрофов Тгр может быть превращен в прототроф Тгр+ заражением лизатом трансдуцирующего фага Р1, выращенного на донорном штамме Е. соИ Тгр+ дикого типа. При отборе таких прототрофных трансдуктантов путем высева зараженных фагом [c.358]

В дополнительных опытах на прототрофных штаммах было найдено, что эффективность дерепрессии треониндезаминазы в Ке1+-клетках значительно выше, чем в Ке1 -клетках, Этот результат показывает, что выражение Ilv-оперона позитивно контролируется геном ге1А. [c.186]

Для мутанта niel было получено три прототрофных клона А, Б V. В). Ютетки каждого из них скрестили с клетками дикого типа. В этих скрещиваниях были получены следующие результаты [c.57]

Б. При скретцивании ревертанта Б с клетками дикого типа 78 % потомства было прототрофным и 22 % - ауксотрофным. [c.57]

Этот факт согласуется с нашими данными о достоверном увеличении частоты спонтанных реверсий к прототрофности по аденину у некоторых из случайно отобранных YA -трансформантов. Очевидно, присутствие YA в клетке дрожжей способно существенно повышать вероятность возникновения и селекции специфичных мутаций (Арман и др., 1993). [c.75]

Смотреть страницы где упоминается термин Прототрофные клетки: [c.88] [c.74] [c.88] [c.306] [c.149] [c.151] [c.154] [c.10] [c.155] [c.222] [c.354] [c.359] [c.250] [c.250] [c.89] [c.90] [c.25] [c.127] [c.113] [c.113] [c.188] [c.210] [c.251] [c.255] [c.169]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология