Лактопероксидаза

Предложен ряд методов такого иодирования, но основные успехи в ра-диоиммунном анализе (РИА) получены Гинвудом и Хантером (1961 схема 7.9-1,с) при разработке метода окисления хлорамином-Т. Однако этот неспецифический окислитель подходит не для любого приложения, и растущую популярность получил ферментативный метод, использующий лактопероксидазу и пероксид водорода (Марчелонис, 1969 схема 7.9-1,б). [c.582]

На каких химических принципах основана модификация компонентов клеточной поверхности с использованием в качестве реагентов следующих соединений а) лактопероксидазы, б) галактозооксида-зы, в) формилметионилсульфонметилфосфата, г) диазониевой соли дииодосульфаниловой кислоты, д) флуоресцирующих антител, е) антител, связанных с ферритином. Напишите уравнения соответствующих химических реакций. Укажите, какие поверхностные группы модифицируются. Перечислите преимущества указанных реагентов. [c.398]

Присоединение хлора сопровождается кратковременным образованием переходного соединения железа, спектрально неотличимого от соединения I. Для него была предложена структура Ре—0С1 [29]. Белок имеет молекулярный вес 42 ООО он был выделен в низкоспиновом ферри-состоянии. Восстановленный феррофермент является высокоспиновой формой спектроскопически он почти идентичен цитохрому Р-450 (разд. Ж,2, е) [29, ЗОХ Лактопероксидаза молока в присутствии 1 и НгОг катализирует совершенно аналогичную реакцию иодирования в белках [c.378]

Рис. 9.5. Фотоаффинное мечение рецептора специфическим лигандом — метод, использованный для идентификации рецепторов инсулина, ацетилхолина и других соединений (ЬРО — лактопероксидаза).

Нужно отметить, что между этими двумя очень сходными реакциями нельзя провести резкой грани. В присутствии некоторых субстратов, папример спиртов, каталаза действует подобно пероксидазе [116]. Кристаллическая пероксидаза была выделена из хрена Теореллом [117]. Для очистки фермента им было использовано несколько методов адсорбция на алюминии, осаждение пикриновой кислотой, электрофорез и фракционированное осаждение сернокислым аммонием. Молекулярный вес полученной пероксидазы оказался равным 44 000 [пН Из молока была выделена другая пероксидаза с молекулярным весом 93 ООО, получившая название лактопероксидазы [118]. Молекула пероксидазы имеет резко выраженное асимметрическое строение (отношение осей 7 1) [117]. Простетическая группа может быть отщеплена от пероксидазы под действием ацетона и соляной кислоты при —15°. На основании данных, полученных при электрометрическом титровании и при изучении зависимости активности фермента от pH, было сделано заключение, что простетическая группа пероксидазы соединена с апоферментом не только посредством атомов железа, но также при помощи двух карбоксильных групп протогемина. Фермент-субстратные комплексы каталазы и пероксидазы были рассмотрены выше. [c.298]

Пероксидазы. Пероксидазы (донор перекись водорода — оксидоредуктазы) очень широко распространены в растительном миро и в бактериях, однако в тканях млекопитающих они встречаются довольно редко. Обнаружена пероксидаза в эритроцитах (вердопероксидаза) н в молоко (лактопероксидаза). [c.293]

Изменение активности пероксидазы при патологиях начали детально изучать только после того, как была осознана та огромная роль пероксидазных систем, которую они играют в метаболических процессах [Kiebanoff et al., 1966 Kiebanoff, 1968]. Действие животных пероксидаз (миелопероксидаза, лактопероксидаза и др.) основано на том же принципе, что и действие растительных пероксидаз,— на окислении различных субстратов в присутствии перекиси водорода. Это обязательное условие каталитического акта пероксидаз различного происхождения и объединяет их в один тип таких ферментных белков. В организме человека и животных существует несколько пероксидаз, сходных функционально, но отличающихся друг от друга по некоторым свойствам и специфичности по отношению к субстратам [Шафран, 1981]. [c.31]

Лактопероксидаза, миелопероксидаза или пероксидаза корней хрена катализируют НгОг-зависимое окисление сульфгидрильных групп белков в присутствии йода [Thomas E., Thomas М., 1977]. Данные этих авторов свидетельствуют о том, что пероксидаза может взаимодействовать непосредственно с белками патогенов по следующей схеме [c.31]

Плазмалемму и мембрану эндосом клеток яичников китайского хомячка (типичный объект исследований такого рода) метили Ч-лактопероксидазой, при этом обработка клеток про-теиназой способствовала распаду меченых белков плазмалеммы, но не мембран эндосом. Однако если промытые меченые клетки возвратить в культуральную среду, преинкубировать [c.31]

Миелопероксидаза, сокращенно МПО (донор пероксид водорода, оксидоредуктаза, КФ 1.11.1.7), молекулярная масса -150 кДа, — основной, сильно гликозилированный белок, образующий вместе с тиреоидпероксидазой, лактопероксидазой, эозин-пероксидазой, простагландин Н-синтазой и пероксидасином суперсемейство пероксидаз [121—123]. Наибольшее количество МПО содержится в азурофильных гранулах полиморфно-ядерных лейкоцитов (5 % от сухого веса клеток) и моноцитах (1—2 %) [124, 125]. При фагоцитозе, сопровождающимся обязательной активацией фагоцитирующих клеток и развитием дыхательного взрыва, МПО секретируется вместе с АФК как во внеклеточную среду, так и в фагосому. В обоих компартментах МПО усиливает окислительный потенциал АФК, катализируя образование различных оксидантов, при этом пероксид водорода используется как ко-субстрат [125—127]. В настоящее время с помощью рентгеноструктурного анализа выяснена трехмерная структура (ЗВ-структура) МПО [128]. Фермент представляет собой гомодимер, каждый мономер которого состоит из легкой (А или В) и тяжелой (С или В) полипептидной цепи и включает гем и ион кальция. Между собой мономеры соединены одиночным дисульфид-ным мостиком. Легкие и тяжелые полипептидные цепи мономеров МПО образуются из общего белкового предшественника в ходе посттрансляционного процессинга. [c.22]

Первый этап — включение изотопной метки в клеточные макромолекулы путем химического присоединения, биосинтеза или ферментативного катализа. Обычно клеточные белки метят иодированием с помощью лактопероксидазы (разд. И, А) или включением радиоактивных аминокислот в процессе биосинтеза в кратковременной клеточной культуре (разд. И, Б). Гликопротеиды и углеводы можно пометить методом восстановления бор-гидридом (разд. II, В) или путем биосинтетического включения радиоактивных сахаров (используя процедуру, сходную с описанной для включения аминокислот). [c.181]

Предлагаемая методика представляет собой модификацию метода иодирования, описанного Хаббардом и Коном для эритроцитов (Hubbard, ohn, 1972). Поскольку различные образцы лактопероксидазы могут обладать разной удельной активностью, следует предварительно подобрать оптимальную концентрацию фермента для связывания метки. [c.183]

В этом методе, как и в предыдущем, производится иодирование тирозинов белка за счет Na I, но вместо сильного химического окислителя используется ферментная система. Преимущество такого подхода состоит в том, что белок не находится в контакте с сильным окислителем. Иногда в этом направлении идут еще дальше и, чтобы избежать контакта белка с перекисью водорода, вводят две сопряженные ферментные системы глюкоза и глюкозооксидаза образуют НгО, за счет воды и окисления глюкозы, а затем уже лактопероксидаза использует образующуюся перекись водорода для окисления иода. [c.239]

В полистирольную пробирку вносят 10 мкл исходного раствора Na I (1 мКи) и 20 мкл 0,4 М H, OONa, pH 5,6. Непрерывно перемешивая, добавляют последовательно 10 мкл раствора белка (2—5 мкг), 10 мкл раствора лактопероксидазы [c.239]

Введение I с помощью HjO и лактопероксидазы в суммарные клеточные белки можно осуществить непосредственно в культуре клеток, без их предварительного разрущения. Фермент н НгОг проходят через клеточную мембрану [Horst, Roberts, [c.240]

Для очистки от невключенной радиоактивности из-за малого количества меченого белка использовали его соосаждение с 50 мкг БСА в 15%-ном растворе ТХУ. Осадок промывали 4 раза по 3 мл при 0° смесью эфир—ацетон (3 1). Было получецо включение порядка 3,5X10 имп./мин на 1 мг белка, т. е. выше, чем при иодировании Хлорамином Т или лактопероксидазой. [c.247]

Эти методы были применены также для локализации гидрофильных связок между а-спиральными колоннами. Показано, что колонны Л (ближайшая к N-концу) и В (вторая по счету от N-конца) связаны участком полипептидной цепи, содержащим Л5/7-36 и Phe-42, которые доступны для антител с цитоплазматической стороны мембраны. Следующая связка (между колоннами Б и С) обращена в периплазму и включает Lew-66 и Gly-72. Связка С—D экспонирована в цитоплазму. Она состоит из аминокислот, локализованных на участке между Туг-83 и Met- . Обработка лактопероксидазой выявила, что Туг- 3 и Туг-133 находятся на внешней стороне мембраны, участвуя, по-видимому, в связке D—Е. Связки Е—F и F—G оказались, соответственно, на внутренней и внешней сторонах, причем было показано, что в связке Е—F для образования антигенной детерминанты существен Р/ге-156, а в связке F—G — С/ -194. [c.105]

Иодирующие агенты, например иодид + лактопероксидаза Глутаминовая и аспарагиновая Карбодиимиды + амины кислоты Диазосоединения [c.106]

Смотреть страницы где упоминается термин Лактопероксидаза: [c.637] [c.325] [c.77] [c.37] [c.220] [c.362] [c.321] [c.544] [c.115] [c.30] [c.141] [c.82] [c.78] [c.120] [c.182] [c.182] [c.183] [c.186] [c.239] [c.239] [c.240] [c.240] [c.278] [c.134]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.353 , c.378 ]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.86 , c.87 ]

Химия и биология белков (1953) -- [ c.298 ]

Химия биологически активных природных соединений (1970) -- [ c.293 ]

Методы исследований в иммунологии (1981) -- [ c.78 , c.120 , c.182 , c.184 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология