Глюкозооксидаза

Если за 10—15 мин окраска не достигнет максимума, это указывает на низкую активность глюкозооксидазы. В таком случае при приготовлении рабочего реактива ее количество следует увеличить. [c.20]

Метод основан на специфическом окислении глюкозы под влиянием глюкозооксидазы (КФ 1.1.3.4) и позволяет определить содержание глюкозы в крови и в тканях в присутствии других редуцирующих веществ. [c.18]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ГЛЮКОЗООКСИДАЗЫ [c.20]

Препарат глюкозооксидазы (коммерческий). [c.19]

Гликоген отделяют от мешающих определению веществ (глюкозы, сахарозы, гексозофосфатов, глицерина) путем осаждения спиртом на фильтровальную бумагу, затем гидролизуют глюкоамилазой (КФ 3.2.1.3) и определяют энзиматическим методом с глюкозооксидазой. [c.25]

Приготовление раствора глюкозооксидазы (раствор Б). 5—6 мг глюкозооксидазы, соответствующих 500— 600 ед./г ферментативной активности (при активности глюкозооксидазы 100000 ед./г), растворяют в 1 М фосфатном буферном растворе с pH 7,5 в мерной колбе вместимостью 50 мл к затем добавляют 2 мг пероксидазы. Объем доводят до метки 1 М фосфатным буферным раствором. [c.288]

Для определения глюкозы в плазме крови использован ферментативно-фотометрический метод, основа1 ный на превращении глюкозы в глюконовую кислоту и пероксид водорода под действием фермента глюкозооксидазы. В результате пяти параллельных определений получены следующие значения (ммоль/л) 5,40 5,35 5,60 5,45 5,50. Рассчитайте [c.456]

Ввиду того что сернокислый цинк и щ елочь частично ингибируют глюкозооксидазу, для построения стандартного графика к 0,1 мл раствора глюкозы приливают хлористый натрий, сернокислый цинк и едкий натр в тех же количествах, которые использовались для осаждения белков крови. После центрифугирования отбирают из стандартных проб по 1 мл раствора и добавляют по 3 мл рабочего реактива. Стандартный график строят для каждой серии определений. [c.20]

Рассчитывают число единиц активности в 1 г сухого препарата глюкозооксидазы. [c.21]

Реактивы для определения глюкозы с глюкозооксидазой (с. 19). [c.51]

Благодаря высокой активности и специфичности Ф. к. находит применение в пром-сти. Широко примен. протеолитические ферменты, липазы, глюкозооксидаза, каталаза и др. Новые успехи в пром. применении Ф. к. связаны с получ. т. н. иммобилизов. ферментов, искусственно связанных с нерастворимыми в воде носителями и длительно сохраняющих (полностью или частично) каталитич. св-ва. Иммобилизов. ферменты фактически являются гетерог. биокатализаторами, к-рые м. б. использованы в колонках или проточных аппаратах, что позволяет перевести мн. хим. процессы на непрерывный режим. Получение иммобилизов. ферментов и их примен. для технол. целей входит в круг проблем, решаемых инженерной энзимологией. [c.617]

В этих методах применяются мечение антигенов или антител и иммобилизация на твердой подложке одного из реагентов [34] под таким названием разработано много вариантов [113]. Иммобилизация выполняется на дне пробирок или чаще в микрокюветах, вмонтированных в пластиковые планшеты. Для мечения часто используют пероксидазы, щелочные фосфатазы, глюкозооксидазу. Возможно использование реакций конкуренции между мечеными и немечеными реагентами пример такого рода схематически представлен на рисунке 4.9. Можно описать еще один вариант метода, не основанный на реакциях конкуренции [c.106]

Явление активации ферментами электродных процессов может быть использовано для разработки так называемых биотопливных элементов, в том числе вживляемых элементов. В одном из вариантов последних анодная реакция заключается в окислении глюкозы на электродах, активированных глюкозооксидазой, а катодная— в восстановлении кислорода. [c.265]

Аэробные дегидрогеназы, для которых единственным акцептором водорода служит молекулярный кислород, называются оксида з а м и. Отнимая водород от окисляемого субстрата и передавая его кислороду воздуха, оксидазы могут образовывать воду или перекись кислорода. Из оксидаз важную роль играют полифенолокси-даза и глюкозооксидаза, окисляющие соответственно полифеноль-ные соединения (например, пирокатехин в хинон) и глюкозу в глюконовую кислоту. [c.117]

Глюкозооксидаза обладает чрезвычайно высокой субстратной специфичностью по отношению к р-О-глюкозе. Ее простетической группой является флавинадениндинуклеотид (ФАД). При окислении глюкозы образуется эквимолекулярное количество перекиси водорода, которая в присутствии пероксидазы (КФ 1.11.1.7) окисляет о-толидин. Восстановленный о-толидин (бесцветный, лейкоформа) превращается в о-толидин окисленный (окрашенный). Интенсивность возникшей синей окраски измеряют на ФЭКе при длине световой волны 620 нм. [c.19]

К 1 мл центрифугата приливают 3 мл рабочего реактива, перемешивают и развившуюся синюю окраску колориметрируют в кювете шириной 5 мм. Окраска стабильна в течение нескольких минут. Время, необходимое для развития максимальной окраски, зависит от активности глюкозооксидазы и должно быть найдено экспериментально. Для этого берут одну из проб и начиная с 10-й минуты измеряют на ФЭКе ее оптическую плотность. После установления времени, необходимого для развития в пробе максимальной окраски, проводят фото-метрирование всех остальных проб . В контрольную пробу берут 1 мл дистиллированной воды и 3 мл рабочего реактива. [c.20]

Глюкозооксидаза — раствор на фосфатном (ацетатном) буфере, содержащий около 0,5—0,6 единиц активности (Е) в 1 мл (препараты глюкозооксидазы Львовского завода бакпрепара-тов имеют активность от 20 до 200 ООО Е/г). [c.20]

В центральную часть сосудика Варбурга помещают 1 мл раствора глюкозооксидазы и 0,4 мл буферного раствора, pH 5,8 В боковую реторточку с длинным тубусом наливают 1 мл раствора глюкозы Сосудики пришлифовывают к манометрам, которые при открытых кранах переносят в водяной термостат, отрегулированный на 26 С, и оставляют на 10—15 мин для выравнивания температуры. После этого подводят уровень жидкости в обоих коленах манометра к метке 250, закрывают краны и отсчитывают уровень жидкости в левом (открытом) колене Повертывают реторточки так, чтобы жидкость из них по возможности вся попала в центральную часть сосудика, и включают качающий механизм. Через каждые 10 мин его останавливают, при закрытых кранах доводят уровень жидкости в правом колене манометра до метки 250 и записывают показание левого колена Для учета изменения давления за счет колебания температуры в термостате и изменения барометрического давления во время опыта одновременно [c.20]

Городецкий В. К. Энзиматический метод количественного определения глюкозы в крови с помощью отечественного препарата глюкозооксидазы//Современ-ные методы биохимии. М, 1964. Т. 1. С. 311. [c.48]

Глюконовую кислоту СН2ОН (СНОН)4 — СООН используют для получения ряда медикаментов. Кальциевая соль глюконовой кислоты легко усваивается в организме и служит источником кальция. Глюконовую кислоту чаще всего получают, используя грибы родов Peni illium и Aspergillus. Продуценты глюконовой кислоты содержат активный фермент — глюкозооксидазу, катализирующий окисление альдегидной группы в молекуле глюкозы. [c.152]

При заполнении проб пробирки ставят в лед. Тканевый экстракт добавляют в пробы 1 и 2 (пробы до инкубации ). После добавления экстракта и перемешивания часть реакционной смеси быстро отбирают для определения глюкозы и молочной кислоты в заранее приготовленные пробирки с соответствующими осадителями белков для определения глюкозы с глюкозооксидазой по 0,5 мл раствора из каждой пробы переносят в пробирки, содержащие 2,5 мл НгО, 2 мл 5%-го раствора сернокислото цинка и 1 мл 0,3 и. раствора NaOH, а для определения молочной кислоты по 2 мл исследуемого раствора переносят в пробирки, содержащие 2 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты или [c.52]

Количество глюкозы в опытных пробах рассчитывают по калибровочному графику. Ввиду того что сернокислый цинк и щелочь частично ингибируют глюкозооксидазу, пробы со стандартным раствором глюкозы обрабатывают так же, как и опытные. Для построения калибровочного графика готовят ряд пробирок, содержащих от 300 до 1200 мкг глюкозы (стандартного раствора). Объем проб доводят дистиллированной водой до 3 мл, в контрольную пробу (без глюкозы) вносят 3 мл дистиллированной воды. Затем в каждую пробу добавляют по 2 мл 5%-ного раствора ZnS04-7Hs0 и по 1 мл 0,3 н. раствора NaOH. Осадок гидроокиси цинка удаляют центрифугированием или фильтрованием. Из каждой пробы отбирают по 0,5 мл раствора в чистые и сухие пробирки, приливают по 0,5 мл дистиллированной воды и по 3 мл рабочего реактива , перемешивают и фотометрируют развившуюся синюю окраску при 630 нм. Предварительно определяют время, необходимое для развития максимальной окраски (с. 20). [c.52]

Количественно Г. определяют спектрофотометрич., поля-риметрич. и хроматографич. методами. При газохроматографич. определении Г. предварительно переводят в более летучие соед., напр, в ацетаты сорбита илм нитрил глюконовой К-1Ы. Наиб, специфич. метод определения D-Г.-ферментативный, для проведения к-рого используют фермент глюкозооксидазу, катализирующую в аэробных условиях окисление p-D-Г. с образованием б-г люк оно лактона и HjOj. Выделившиеся продукты количественно определяют разл. методами. [c.590]

За единицу глюкоамилазной активности принято такое коли-. ство ферментов, которое, действуя на растворимый крахмал при С и заданном значении pH 4,7 в течение 1 мин, освобождает мкмоль глюкозы. Глюкоза определяется глюкозооксидазным ме-)дом с применением глюкозооксидазы и пероксидазы. [c.287]

В десяти образцах плазмы крови человека определили содержание глюкозы (мг/100 мл) с помощью двух методов ферментативного с фотометрической индикацией и проточно-инжекционного (ПИЛ) с использованием биосенсора на основе иммобилизованной глюкозооксидазы и с амперометрическим детектированием продукта реакции (Н2О2). Результаты анализов (в мг/100 мл) приведены в таблице. [c.445]

Первые три из этих реакций могли бы с таким же успехом катализироваться дегидрогеназами, зависимыми от пиридиннуклеотидов. Вспомним, что D-глюкозо-б-фосфат — дегидрогеназа использует в качестве окислителя NADP [реакция (8-42)]. Первым продуктом является лактон, который гидролизуется до б-фосфоглюконовой кислоты. Аналогичная реакция со свободной глюкозой (реакция а в табл. 8-4) катализируется глюкозооксидазой — флавопротеидом с мол. весом 154 ООО, который содержит две молекулы FAD и синтезируется Peni illium по- [c.257]

Приготовление энзимо-хромогенного реактива в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 80—90 мл ацетатного буфера (0,25 моль/л, pH 4,8), в котором растворяют 2 мг глюкозооксидазы (ТУ 6-09-10-1382-79), а затем 1 мг пероксидазы (фирмы Реанал , ВНР), прибавляют 1 мл 1 % раствора о-толидина и доводят объем раствора ацетатным буфером до метки. Срок годности реактива 3—4 нед при хранении в защищенном от света месте при температуре от 8 до 10 С. [c.181]

Окисление p-D-глюкозы в D - г л ю к о и о-б-л а к-т о н. Эту реакцию катализирует глюкозооксидаза (нотатин, пенициллин В), содержащая ФАД (2 моля на моль фермента) [438]. Молекулярная масса фермента 154 ООО он содержится в плесневых грибах Peni illium notatum и др. [439, 4401. Механизм ферментного окисления изучен с помощью Н , меченной 0 [4411, при этом оказалось, что кислород, выделяющийся при разложении перекиси водорода под действием каталазы, не содержит О, т. е. глюкозооксидаза катализирует перенос водорода от глюкозы в газовой фазе, акцептором водорода служит газообразный кислород. По радикальному механизму в первой ступени реакции (З-Л-глюкопираноза (а) теряет протон и электрон с образованием свободного радикала (б), который, теряя второй электрон, образует оксониевый ион (в). Прототропная реакция между оксониевым ионом и перекисным анионом завершает окисление с образованием D-глюконо-б-лактона (г). [c.563]

Органическая химия. Т.2 (1970) -- [ c.725 , c.726 ]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.257 ]

Молекулярная биотехнология принципы и применение (2002) -- [ c.168 ]

Большой энциклопедический словарь Химия изд.2 (1998) -- [ c.139 ]

Перекись водорода (1958) -- [ c.67 , c.351 , c.517 ]

Общая микробиология (1987) -- [ c.247 , c.327 , c.329 ]

Химия и биология белков (1953) -- [ c.303 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.103 , c.118 ]

Справочник для работников лабораторий спиртовых заводов (1979) -- [ c.172 , c.174 , c.175 , c.176 ]

Биология Том3 Изд3 (2004) -- [ c.94 ]

Химия биологически активных природных соединений (1970) -- [ c.256 , c.291 ]

Курс физиологии растений Издание 3 (1971) -- [ c.233 , c.234 , c.267 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.3 , c.4 , c.17 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.121 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.121 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.225 , c.290 ]

Теория и практика иммуноферментного анализа (1991) -- [ c.64 , c.65 , c.67 , c.68 , c.72 , c.73 , c.108 , c.110 , c.120 , c.122 ]

Новые методы имуноанализа (1991) -- [ c.168 ]

Иммуноферментный анализ (1988) -- [ c.15 , c.24 , c.97 , c.98 , c.100 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.14 , c.122 , c.133 , c.143 , c.149 , c.160 , c.187 , c.206 , c.208 , c.214 , c.222 , c.226 , c.231 , c.239 , c.259 , c.262 , c.379 , c.457 , c.463 , c.555 , c.585 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.140 , c.145 , c.162 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология