Протогемин

НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ПОЛУЧЕНИЮ ПЕПТИДНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ПРОТОГЕМИНА К [c.25]

Ранее на кафедре химии и технологии тонких органических соединений МИТХТ им. М. В. Ломоносова были отработаны классический синтез в растворе и твердофазный метод синтеза моно- и бис-пептидных производных по карбоксильным группам протогемина IX и исследованы свойства полученных соединений. [c.25]

Новые подходы к получению пептидных производных протогемина IX [c.183]

Ранее на кафедре химии и технологии тонких органических соединений МИТХТ им. М.В. Ломоносова были отработаны классический синтез в растворе и твердофазный метод синтеза моно- и бис-пептидных производных по карбоксильным группам протогемина IX. Показана возможность применения геминпептидов в качестве моделей активных центров гемсодержащих ферментативньгх систем. [c.153]

На первой стадии протогемин РеП вступает в слабое взаимодействие с RH. При этом низкоспиновая окислительная форма цитохрома Р-450, т.е. РеП, со спином s = 1/2 переходит, как правило, в высокоспиновую (i = 5/2). Это означает, что исходный РеП содержал два экстралиганда достаточно сильного поля. Природа этих экстралигандов неизвестна. [c.290]

Очистка протогемина [21, 22]. 1 г неочищенного гемина встряхивают со смесью 5 мл пиридина и 40 мл хлороформа в течение 15 мин. Отфильтрованный раствор вносят в 150 мл ледяной уксусной кислоты, предварительно насыщенной хлористым натрием, добавляют 0,5 мл концентрированной соляной кислоты и нагревают на водяной бане. Через 24 часа отсасывают кристаллы гемина и промывают разбавленной уксусной кислотой с добавкой соляной кислоты. Выход 0,8 г. [c.170]

В качестве исходного продукта служит 4,5%-ный раствор кристаллов оксигемоглобина. Этот раствор в количестве 300 мл смешивают с 300 мл 0,8%-ной соляной кислоты, в которой] растворено 0,6 г пепсина. Смесь выдерживают 48 час. при 38° и затем обрабатывают эфиром в делительной воронке (для облегчения разделения рекомендуется прибавить воды). На границе водного и эфирного растворов появляются коричневые хлопья, которые отбрасываются нри отделении нижнего слоя.Эфирная обработка водного раствора повторяется до тех пор, пока эфир не станет бесцветным.Водный раствор ( 1,3 л), который уже не содержит протогемина, освобождают от эфира на водяной бане, затем охлаждают, фильтруют и точно нейтрализуют карбонатом калия. Нейтральный раствор выпаривают в вакууме и сушат над PaOg. Полученный продукт песочного цвета в количестве 8,3 г подготовляют для хроматографирования следующим образом растворяют в 60 мл воды, прибавляют смесь 20 мл 1/15-молярного фосфатного буфера (pH 8), 4 мл пиридина и немного гипосульфита натрия. Раствор медленно просасывают через колонку хроматографирующей окиси алюминия (размеры колонки 16 см X 3 см). После прохождения раствора образуется хроматограмма следующего вида на расстоянии около 1,5 см от верхнего края колонки видна резко отграниченная темнокрасная зона шириной 1—2 мм, ниже которой окраска меняется от желтой до коричневой. На расстоянии 6 см от верхнего края образуется размытая желто-зеленая зона, выше которой окраска красновато-коричневая, а ниже — желтоватая. После промывания колонки растворителем, содержащим гипосульфит, область вокруг темнокрасной зоны обесцвечивается, фильтрат имеет окраску от желтой до светлокоричневой и не содер- [c.104]

Денатурированный глобин, получаемый старыми методами, соединяется с восстановленным протогемином, образуя гемохромоген-, при смешении же нативного глобина с протогемином и восстановителем при pH 8—9 вновь образуется гемоглобин [121]. Глобин отличается от большинства других белков высоким содержанием гистидина (см. табл. 1), количество которого в разных препаратах глобина достигаете—10% по сравнению с 2—3% в большинстве других белков. В связи с высоким содержанием гистидина изоэлектрическая точка глобина лежит при pH 6,8—7,0 изоэлектрическая точка денатурированного глобина лежит выше, вблизи pH 8,0. Нативный глобин растворим в широких пределах pH, денатурированный же глобин выпадает в осадок при слабой щелочной реакции этим можно воспользоваться для отделения денатурированного глобина от нативного. [c.243]

Нужно отметить, что между этими двумя очень сходными реакциями нельзя провести резкой грани. В присутствии некоторых субстратов, папример спиртов, каталаза действует подобно пероксидазе [116]. Кристаллическая пероксидаза была выделена из хрена Теореллом [117]. Для очистки фермента им было использовано несколько методов адсорбция на алюминии, осаждение пикриновой кислотой, электрофорез и фракционированное осаждение сернокислым аммонием. Молекулярный вес полученной пероксидазы оказался равным 44 000 [пН Из молока была выделена другая пероксидаза с молекулярным весом 93 ООО, получившая название лактопероксидазы [118]. Молекула пероксидазы имеет резко выраженное асимметрическое строение (отношение осей 7 1) [117]. Простетическая группа может быть отщеплена от пероксидазы под действием ацетона и соляной кислоты при —15°. На основании данных, полученных при электрометрическом титровании и при изучении зависимости активности фермента от pH, было сделано заключение, что простетическая группа пероксидазы соединена с апоферментом не только посредством атомов железа, но также при помощи двух карбоксильных групп протогемина. Фермент-субстратные комплексы каталазы и пероксидазы были рассмотрены выше. [c.298]

Третьим катализатором, содержащим в качестве активной группы протогемин, является цитохром. Это вещество впервые было обнаружено в мышцах Мак-Муном [119], однако в течение долгого времени его считали продуктом распада гемоглобина или миоглобина. Кейлину и Хартри [120] удалось выделить его в чистом виде. Метод, которым воспользовались эти авторы, заключался в осаждении цитохрома из трихлоруксусного экстракта мышц сернокислым аммонием, с последующим диализом для удаления трихлоруксусной кислоты и перекристаллизацией цитохрома при помощи фракционированного осаждения сернокислым аммонием. Выделенный препарат получил название цитохрома с. Два других цитохрома а и Ь идентифицированы только спектроскопически и пока еще не получены в чистом виде. [c.298]

Цитохромоксидаза до сих пор еще не получена в чистом виде ее простетической группой является гемин, который отличается от протогемина, входящего в состав гемоглобина, цитохрома с, пероксидазы и каталазы. Формула этого гемина еще точно не установлена. [c.300]

При изучении строения ферментов протеидов удалось ближе подойти к выяснению специфичности действия как их самих, так и составных частей их. Так, например, гемоглобин, каталаза и пероксидаза (о них см. ниже) имеют одну и ту же простетическую группу (протогемин). Разница между этими тремя соединениями велика, но она определяется не активной группой, которая в них подчас одинакова, а белком, с которым она связана. При соединении этой группы с белком глобином получается гемоглобин при соединении с другим специфическим белком образуется пероксидаза, а с третьим—каталаза. Пересадка активной группы от одного носителя к другому сопровождается коренным изменением свойств изучаемого комплекса. Такую пересадку удалось осуществить. С каталазы был снят гемин и соединен с выделенным из крови глобином получился кровяной пигмент гемоглобин. [c.340]

Типичным примером синтеза из дипиррилметенов является синтез протогемина IX, осуществленный Г. Фишером [1]. Данный метод непригоден для получения порфиринов, содержащих легко отщепляющиеся группы (винильные, ацетильные, оксиэтильные и др.), поэтому первым этапом в синтезе протогемина IX было получение дейтеропорфирина IX, не содержащего таких групп. [c.114]

В кислой среде гем гемоглобина легко и обратимо отделяется от аио-протеина полипептидные цепи при этом могут быть выделены в чистом виде. Однако, для того чтобы выделить только простетическую группу, достаточно более грубой обработки при нагревании цельной рови с уксусной кислотой и хлористым натрием удается получить кристаллы протогемина, или просто гемина двухвалентное железо гема во время обработки окисляется в трехвалентное. [c.126]

Раствор геминов в пиридине разбавляют раствором аммиака или свежеприготовленным раствором гидроксида натрия и наносят на обработанную силиконовым маслом бумагу, которую помещают во внутреннюю камеру двухсекционного хроматографа. Хроматограмму элюируют смесью вода — пропанол-1—пиридин (55 1 4) до того момента, когда фронт растворителя продвинется примерно на 10 см от стартовой линии, что занимает около 1 ч. Внешнюю камеру хроматографа выстилают влажной бумагой, а на дно наливают пиридин из расчета 0,4 мл на 1 л объема камеры. С увеличением концентрации паров пиридина возрастают значения и улучшается разрешение хроматографических зон, тогда как при слишком низкой концентрации паров пиридина протогемин вместо четких зон образует полосы. В этой обращенно-фазовой системе хроматографическая подвижность геминов возрастает с увеличением числа присутствующих в их молекулах карбоксильных групп. В случае геминов, для которых характерны высокие значения Rf, в качестве элюента лучше использовать систему вода — пропанол-1— пиридин (60 1 1). На высушенных хроматограммах можно визуально обнаружить до 50 нг вещества. Этот предел обнаружения можно уменьшить путем обработки хроматограмм о-дианизидином, как описано в разд. 11.1.2. [c.213]

Хилл и Холден в 1926 г. впервые добились успеха в расщеплении молекулы пероксидазы на простетическую группу и протеин, применяя обработку соляной кислотой и ацетоном [Maehly, 1952]. Маэли [МаеЫу, 1952], используя различные приемы щелочного и кислотного гидролиза гем-протеиновой связи, показал, что при нейтрализации щелочью H l-расщепляющего раствора в присутствии подходящего буфера происходит рекомбинация протогемина и протеина в активную пероксидазу. И эта обратимая реакция может быть повторена несколько раз с тем же энзимом без заметных потерь активности. Автор также отметил, что белок пероксидазы хрена устойчив при щелочном pH, а цвет гема при этом меняется от коричневого до красного. [c.10]

Гем-протеиновая связь зарегистрирована с помощью метода Маэли [Maehly, 1952]. Разрыв связи осуществлялся при смешивании в делительной воронке равных объемов метил-этил-кетона и раствора препарата анионных пероксидаз при подкислении смеси 0,1 М H I до кислой реакции —pH от 2,0 до 1,5. В этих условиях опыта начинается быстрое отщепление апофермента от протогемина. Потерю ферментативной активности проверяли, определяя активность фермента до и после опыта по реакции с одним из субстратов — бензидином. После разрыва указанной связи в кислой среде пероксидазная функция фермента полностью утрачивалась. Таким образом, было получено доказательство наличия гем-протеиновой связи у исследуемых анионных изоэнзимов фермента. Потеря активности установлена как для опытных, так и контрольных пероксидаз, следовательно, мы имели дело с истинными пероксидазами, содержащими в составе молекулы геминовую группировку (см. 1.2). [c.87]

Пероксидазы животных и растительных тканей различаются по геминовой группе. Растительная пероксидаза содержит в качестве простетической группы протогемин (Fe -протопорфирин—красный гемин) животные лерок-сидазы, или вердопероксидазы, наоборот, содержат зеленый гемин. Особую роль играет пероксидаза хрена она используется в качестве метки антител, а также как маркерный фермент при изучении процессов транспорта и проницаемости в животных тканях. При этом очень подходящим оказался низкий молекулярный вес фермента (44 ООО). [c.218]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология