Уксусный ангидрид, реакции с белками

Правда, имеются и строго специфические реагенты на отдельные функциональные группы белков. Так, весьма селективными являются большинство реагентов на 5Н-группы избирательно реагирует с аминогруппами уксусный ангидрид и с карбоксильными группами — этерифицирующие агенты (метиловый и этиловый спирты) селективными по отношению к ОН-группам оксикислот являются серная кислота и фосфорный ангидрид. Однако для ряда белков условия этерификации или обработка серной кислотой и фосфорным ангидридом оказываются губительными и приводят к денатурации или распаду белка. Здесь мы сталкиваемся с третьей особенностью химических реакций белков проведение реакций в условиях, удовлетворительных для аминокислот, может привести к денатурации белка. Поэтому эти реакции приходится осуществлять возможно более мягким путем, не приводящим к необратимым структурным изменениям. [c.63]

Уксусный ангидрид наиболее широко применяется для ацилирования белков. Он более специфичен, чем кетен, не вызывает денатурации белков и не требует использования специальной аппаратуры. Для проведения реакции белок растворяют или суспендируют в охлажденном растворе ацетата натрия и к суспензии медленно добавляют уксусный ангидрид [c.69]

Реакции ацетилирования белков были изучены очень подробно. Для селективной реакции с аминогруппами ряда белков удобным реагентом оказался уксусный ангидрид, применяющийся при пониженной или нормальной температуре в ацетатном буферном растворе при pH 7—8. причем для этой цели уксусный ангидрид берут в определенном, строго ограниченном количестве [50, 61]. Реакцию проводят очень просто. К 1 й белка, растворенного или суспендированного в 20 мл раствора ацетата натрия (концентрация которого вдвое меньше концентрации насыщенного раствора), при охлаждении в ледяной бане прибавляют при перемешивании в несколько приемов в течение примерно 1 час уксусный ангидрид в количестве 1,2 мл. После исчезновения запаха уксусного ангидрида образовавшееся производное белка выделяют (количественно) путем диализа. Содержание аминного азота в получающемся продукте составляет для большинства белков 5—40% от первоначального значения. Определение количества введенных ацетильных групп дает результаты, соответствующие данным по уменьшению содержания аминного азота. [c.338]

После гидролиза растительных белков остаточные полипептиды можно видоизменять различными способами и особенно посредством реакций ацилирования. Эта химическая модификация заключается в реагировании различных ацилирующих агентов типа ангидридов моно- или дикарбоновых кислот, таких, как ангидрид уксусной, янтарной, пропионовой, глутамине вой или яблочной кислот, с полипептидами, имеющими функциональные группировки — аминные, кислородные или серосодержащие. [c.610]

Еше один метод определения N-концевой аминокислоты в белках и пептидах был предложен Шоу (1961). В этом методе используется кристаллический а-ацетил-р-этокси-Н-карбэтоксиакриламид II, получаемый присоединением уретана к дикетену с последующей реакцией образовавшегося N-ацетоацетилуретана I с ортомуравьиным эфиром и уксусным ангидридом. Реагент II в слабощелочном водном растворе быстро реагирует с пептидом, при этом образуется соответствующее 5-ацетилурацильное производное III. При последующем кислотном гидролизе получается смесь аминокислот и замещенный урацил IV из концевой аминокислоты. [c.692]

Основная область научных исследований — химия белка. Разработал (1920—1930) методы получения пептидов, в частности ами-нолизом азлактонов аминокислотами или их эфирами (реакция Бергманна). Открыл (1926) реакцию циклизации К-галогенацил-аминокислот с одновременным де-галогенированием при нагревании с уксусным ангидридом в пиридине с образованием азлакюнов (реакция Бергманна). Установил (1928) способность натрия и лития присоединяться к многоядерным ароматическим углеводородам. Совместно с Л. Зервасом предложил (1932—1936) способы получения исходных производных аминокислот, в частности способ создания К-карбоксипроизводных. Провел цикл исследований, посвященных протеолитическим ферментам и положенных в основу современной классификации последних. Открыл (1934) реакцию определения С-концевой аминокислоты в пептидах через соответствующие альдегиды, полученные превращением пептида в азид, затем в карбобенз-оксипроизводное с последующими гидрированием и гидролизом (карбобензокси-метод, или реакция Бергманна). Издал труды Э. Г. Фи- [c.50]

Процедура анализа аминокислотного состава белка сводилась к следующему. Белок гидролизовали 6 н. НС1 в запаянных под разрежением трубках в течение 24 час. Избыток НС1 удаляли выпариванием под вакуумом. Остаток разбавляли в небольшом количестве воды, затем подщелачивали 6 н. NaOH до щелочной реакции по тимолфталсину. Часть гидролизата, соответствующую 25 мг бе.лка, ацетилировали пятикратным внесением 5 мл 4 н. NaOH и 1 мл уксусного ангидрида в течение 15 мин. Между прибавлением реактивов раствор каждый раз встряхивали и о-хлаждали. Затем щелочной раствор оставляли стоять 10 мин.,после чего подкисляли 10%-ной серной кислотой (с контролем по тимол-синему). Ацетилированные аминокислоты экстрагировались из полученного раствора смесью хлороформа и 17%-ного бутилового спирта. Экстракт упаривали досуха и остаток растворяли в 1—2 мл хлороформа, содержащего 1% бутилового спирта. В таком виде смесь ацетилированных аминокислот была готова для хроматографического анализа. [c.144]

В последнее время для этой цели был избран уксусный ангидрид. Сейчас разработан (и включен в переработанную таблицу) также метод гуанидирования — превращение остатков лизина в остатки гомоаргинина с помощью О-метилизомочевины. Этот метод, повидимому, специфичен по отношению к аминогруппам, и, вероятно, реакция проходит только с остатками лизина. Он является перспективным для изучения влияния заряда и конфигурации на физические и биологические свойства белков. [c.282]

В основе этого метода лежит реакция между С-концевой аминокислотой пептида или белка и роданидом аммония в среде уксусного ангидрида, приводящая к образованию ацилтиогидантоина. Это производное разлагается гидратом окиси бария на тиогидантоин С-концевой аминокислоты и оставшуюся часть пептидной цепочки. [c.488]

Третий вариант был разработан для белков. Поскольку большинство белков нерастворимо в безводном диоксане, используемом при мечении пептидов, этот растворитель был заменен на смесь водного пиридина, и уксусного ангидрида. В такой системе три реакции проходят в одну стадию (рис. 18.3). Предполагается, что включение метки происходит с образованием промежуточного оксазолинона, находящегося в равновесии с исходным С-концевым пептидом. [c.490]

При использовании системы пиридин — НгО — уксусный ангидрид (4 2 1) в условиях, изложенных ранее, протекает быстрый катализируемый основанием гидролиз уксусного ангидрида, что приводит к разрушению ангидрида до завершения образования оксазолинона и к снижению выхода реакции. Использование большого избытка уксусного ангидрида не улучшает результаты, так как значительно возрастает температура реакции, что влияет на растворимость белка и происходят нежелательные побочные реак-цчи [14, 38]. При использовании смеси пиридин — НгО — уксусный ангидрид (3 1 3) на холоду включение трития в С-концевой остаток Leu лизо-ц 1ма яичного белка увеличилось в 20 раз [57]. [c.491]

Значения р/Са аминокислотных остатков активного центра свободного фермента и комплекса фермента с ингибитором находят по результатам измерения скорости необратимого ингибирования ферментов точно так же, как и в случае обычной ферментативной кинетики. р/Са других остатков определяют из рН-зависимости скорости реакций этих соединений с различными реагентами. Например, поскольку амины, находясь в форме основания, реагируют с уксусным ангидридом [27] или динит-рофторбензолом 128—30], степень их ионизации определяется из относительных скоростей реакций при разных pH. Этот подход был использован для определения р/Са аминогрупп в белках. [c.186]

Ацилирующие агенты (уксусный, янтарный или малеи-новый ангидриды, бензоилхлорид и т. п.) издавна применяются в белковой химии, но для модификации нуклеиновых кислот в нейтральных водных растворах они непригодны. Различные реакции ацилирования были недавно использованы для прощупывания конформации белка ВТМ в вирусной частице. Реакция сукцинилирова-ния и легко обратимая реакция малеинирования приводят к замене — КНз-групп на — СОО -группы. В результате белки вирусной обо [очки диссоциируют на субъединицы и растворяются [59, 154, 447]. Ацилироваться, вообще говоря, могут амино-фенольные и тиоловые группы. Но из них, как правило, лишь аминогруппы находятся на поверхности белков, и, таким образом, эти реакции моишо считать аминоспецифичными. Однако в особых случаях весьма легко ацилируются и фенольные и незащищенные ЗН-группы. Так, в ВТМ один из четырех тирозиновых остатков (ближайший к С-концу, № 139) [c.198]