Гомогенизация тканей

ГОМОГЕНИЗАЦИЯ ТКАНИ, ПОЛУЧЕНИЕ [c.282]

Микросомы — эт( фракция морфологически замкнутых везикул, в которые превращается эндоплазматическая сеть при гомогенизации тканей. В них содержатся активные оксигеназы — ферменты, катализирующие включение кислорода в молекулу субстрата (8). [c.206]

Гомогенизация тканей и клеток Механическое разрушение (окись алюминия, давление, стеклянные шарики) Химическое — детергенты Ферментативное—лизоцим, проназа 3-8 [c.66]

Многие исследования биохимии синаптической передачи выполнены с препаратами синапсов, которые получают из ткани головного или спинного мозга. При гомогенизации ткани нервные окончания отрываются, мембрана в месте разрыва смыкается и получаются замкнутые пузырьки — синаптосомы их отделяют от других компонентов гомогената методом дифференциального центрифугирования. Синаптосомы секретируют медиатор при воздействиях, изменяющих их трансмембранный потенциал в сторону положительного знака. [c.538]

Почти все витамины — соединения весьма неустойчивые, легко подвергающиеся окислению, изомеризации и полному разрушению под воздействием высокой температуры, кислорода воздуха, света и других факторов. Эти процессы могут в значительной мере ускоряться в результате нарушения целостности клеточных структур при гомогенизации тканей, освобождения и активации ферментов, содержащихся в самих исследуемых объектах. Для предохранения витаминов от разрушения в ходе анализа рекомендуется соблюдать все возможные меры предосторожности максимально сокращать время на предварительную подготовку материала, избегать сильного нагрева и действия света, использовать антиоксиданты и т. д. [c.196]

В используемых в настоящее время методах [60] применяется и ряд других предосторожностей, например гомогенизация ткани проводится в глициновом буфере (pH 10,4) с хлороформом при 2—4°. Обработка для освобождения от белка применяется повторно и проводится, как и скоростное центрифугирование, при низкой температуре. Конечной стадией очистки является осаждение этанолом. [c.186]

Для того чтобы получить неповрежденные препараты, гомогенизацию ткани нужно проводить в специальной среде. Применение растворов сахарозы дает возможность получать препараты ядер и митохондрий, которые кажутся нормальными под микроскопом и обладают высокой ферментативной активностью. Первоначально для этой цели использовали гипертонический раствор сахарозы (0,88М), поскольку было обнаружено, что он позволяет наилучшим образом сохранить морфологические свойства клеточных компонентов позднее, однако [c.86]

Получение функционально активных митохондрий из растений связано с рядом определенных трудностей. В первую очередь, к ним относится наличие плотных и жестких клеточных оболочек, вызывающих механические повреждения при растирании клеток. Отрицательную роль играют кислая реакция клеточного сока, выделяющегося в процессе гомогенизации ткани, а также содержащиеся в значительном количестве во многих растительных клетках фенольные соединения, являющиеся разобщающими агентами и ингибиторами. Другие особенности растительных тканей, например высокое содержание крахмала, хлорофилла, масел и т.д., также оказывают влияние на качество и чистоту изолированной митохондриальной фракции. Поэтому для получения интактных митохондрий в каждом конкретном случае в [c.11]

Сперри [121], так же как и Энтенман [19], описывает приборы для гомогенизации ткани и приводит адреса поставщиков этих приборов. Наиболее известен гомогенизатор по Поттеру и Эльвейему [106], обеспечивающий полное измельчение тканей. Этот прибор состоит из пестика, пришлифованного к толстостенной пробирке так, что остается щель менее 1 мм. Ткань, подлежащую измельчению, помещают в виде суспензии в пробирку, затем вводят пестик и с помощью электромотора осуществляют вращение с большой скоростью. Ткань между пестиком и стеклянной стенкой полностью измельчается. [c.146]

Выделяемые подобным способом микросомы (диаметр 16— 150 ммк) настолько малы, что они не видны в световом микроскопе, и первоначально эти частицы были лишь цитохимическим понятием, которое нельзя было отождествить с каким-либо определенным компонентом пптактной клетки . Палад и Сикевиц [235], изучавшие срезы микросом из ткани печени при помош,и электронного микроскопа, обнаружили, что преобладающий структурный элемент этих частиц представлен ограниченными мембранами образованиями. Последние напоминают соответствующие структуры эндоплазматической сети, наблюдаемые на срезах интактной клетки печени. При изучении этих образований в трех измерениях оказалось, что они представляют собой трубочки или пузырьки. Поверхность этих образований может быть и гладкой, однако у большинства из них на поверхности расположены мелкие плотные частицы, сходные с теми, которые видны на электронных микрофотографиях целой клетки (стр. 129). Следовательно, микросомы — это не артефакт, вызванный гомогенизацией ткани, а фрагменты эндоплазматической сети. Они представляют собой цитоплазматические структуры, существование которых в интактной клетке доказано. [c.131]

При метилировании in vitro ониевыми соединениями — бетаином, холином (сначала превращается в бетаин [4]) и двумя тетипами — кислорода и аденозинтрифосфата не требуется, и гомогенизация ткани не ингибирует реакцию. Это объясняется, по-видимому, тем, что указанные соединения уже находятся в ониевом состоянии. Отсюда можно сделать вывод, не подтвержденный, правда, экспериментально , что бетаин и тетины способны также переносить свою метильную группу, как таковую возможность метилирования окисленным одноуглеродным фрагментом при этом также не исключается. Было бы желательно проверить справедливость этого предположения (которое не ново, но подтверждается исследованиями Кантони), взяв для исследования соединение, содержащее С Оз-группу (см. стр. 214). [c.220]

После гомогенизации ткани митохондрии легко отделяются от клеточных обломков, а также от других цитоплазматических включений при помощи дифференциального центрифугирования. Как показывает опыт работы с митохондриями животных, все операции по выделению нужно проводить так, чтобы изолированный материал удовлетворял определенным жестким требованиям [13, 19]. Эти требования следующие 1) высокая степень контроля дыхания со стороны АДФ 2) удовлетворительное отношение Р О, соответствующее общепринятым пределам этой величины для различных субстратов окисления 3) высокое отношение пиридинну-клеотидов к цитохромам 4) сходство ультраструктуры изолированных митохондрий со структурой митохондрий интактной клетки. Общая схема метода выделения растительных митохондрий, представляющего собой модификацию методики Вискича и Боннера [96], приведена на фиг. 23. [c.58]

Более подробно [53] исследовано активирование метилпаратиона кишечником таракана. Активирование носило аэробный характер, было чувствительным к нагреванию и прекращалось после гомогенизации ткани. В фосфатном буфере активность была выше, чем в вероналовом (в отличие от того, что наблюдалось для описанной выше системы, активирующей шрадан). Активирующим действием обладали многие ткани насекомых все участки кишечника, мальпигиевы сосуды, жировое тело и нервная цепочка. Наиболее эффективной была передняя кишка. Кутикула и мышцы были лишены активности. Многие ингибиторы, в частности сульфгидриль-ные яды (хлорпикрин и иодацетат) и ингибиторы металлофермен- [c.172]

Как и в случае препаратов печени, гомогенизация тканей насекомых приводила к утрате активирующего действия и фактически усиливала способность разрушать ФОС. Добавление Д11Н, магния и никотинамида к гомогенату кишечника таракана в некоторой степени восстанавливало способность активировать паратион, тогда как шрадан-активирующая способность этого препарата совершенно не восстанавливалась при добавлении перечисленных кофакторов. [c.173]

Для исследования ультраструктуры клетки используют метод, основанный на гомогенизации ткани или разрушении клеточных стенок и последующем разделении субклеточных структур (фракционирование). После фракционирования клеток и последуюш его выделения ядра, митохондрий и микросом остается растворимая фракция (надосадок), состоящая из растворимых белков и ферментов гиалоплазмы. В ней основными являются ферменты, принимающие участие в процессах гликолиза [c.27]

Мембраны саркоплазматического ретикулума — удобная модель для изучения механизма преобразования энергии при ак-тивнем транспорте ионов. Для исследования биохимических и структурных свойств саркоплазматического ретикулума используют преимущественно микросомальную фракцию, выделяемую из скелетных мышц кролика в результате гомогенизации ткани и последующего дифференциального центрифугирования. Под электронным микроскопом она выглядит как довольно гомогенная смесь замкнутых пузырьков диаметром от 50 до 200 нм. В мембранах такого препарата локализован высокомолекулярный белковый компонент — Са-АТФаза, на долю которого приходится от 70 до 90% всего белка. Благодаря исключительной простоте данной системы ионного транспорта она в настоящее время детально охарактеризована. [c.52]

Количество РНК в гомогенате сердечной мышцы, постмитохондриальном экстракте и рибосомных препаратах определяют по методу Спирина (А. С. Спирин, 1958). Содержание РНК в постмитохондриальном экстракте сердца составляет около 57% всей РНК гомогената, что дает в препарате рибосом около 0,5 мг РНК на 1 г сырой массы ткани. Такой выход рибосом примерно в 4 раза превосходит выход препаратов рибосом, получаемых при гомогенизации тканей сердца в буфере с низкой ионной силой. [c.311]

В выделении сарколеммных препаратов можно отметить три основных этапа а) гомогенизация тканей до получения бесклеточного препарата б) выделение фракции субклеточных структур дифференциальным центрифугированием в) очистка фракций, полученных в результате ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы. [c.216]

Гомогенизацию ткани и последующее цент рифугирование ведут при О С. Цифры с левой стороны пробирок указывают молярные концентрации растворов сахарозы, обеспечивающих в данной зоне пробирки плСтность раствора, при которой дальнейшее оседание определенных субклеточных частиц не происходит [c.21]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология