Рекомбинанты III также

Распределение рекомбинанта mi напоминает распределение родительского дикого типа тем, что этот рекомбинант также дает три основных максимума. Реципрокный же рекомбинант как и родительский тип mi, сосредоточен в одном максимуме. [c.301]

Можно ли считать, что больпшнство мутантов гП несет точковые мутации Если это так, то должны соблюдаться следуюш,ие два условия 1) скрещивание любого мутанта гП по крайней мере с одним из двух других неаллельных мутантов гП, дающих при скрещивании друг с другом рекомбинанты дикого типа (г" ), должно также приводить к образованию рекомбинантов дикого типа (г" ) 2) мутанты гП должны с измеримой частотой возвращаться (ревертировать) к дикому типу, особенно если частоту мутирования (в данном случае речь, естественно, идет о превращении гП г+) повышают с помощью специальных воздействий. Оказалось, что большинство исследованных мутантов гП ведет себя именно таким образом ири этом частота обратных мутаций различна для разных мутантов гП. Большинство индуцированных мутаций можно разбить на два класса (табл. 53) 1) мутации. [c.492]

Таким образом, существуют три формы клеток, различающихся по состоянию фактора F, определяющего пол 1) F с инактивированным фактором F, 2) F со свободным фактором F и 3) Hfr с фактором F, закрепленным на хромосоме. Все три типа клеток делятся и все три формы пола повторяются в потомстве. Что касается структуры хромосом, то в клетках F" это — замкнутые линии. При мутации F ->Hfr хромосома рвется в каком-либо случайном месте и становится незамкнутой, что и делает возможным ее проникновение через протоплазменную трубку в женскую клетку. В клетке F хромосома также замкнута. Это следует из того, что при образовании рекомбинантов генетические маркеры, которые на отцовской хромосоме казались удаленными друг от друга, проявляются снова как близкие соседи (см. рис. 98). [c.326]

Морган предположил, что причина генетического сцепления факторов-это просто механический результат их локализации в одной хромосоме . Он предположил также, что образование генетических рекомбинантов можно отождествить с процессом кроссинговера, наблюдаемого в мейозе. В раннем мейозе, на стадии, когда четыре копии каждой хромосомы представлены в виде бивалента, между близко расположенными (конъюгировавшими) гомологичными парами происходит попарный перекрест генетического материала, названный хиазмой. Этот процесс схематически изображен на рис. 1.9. [c.14]

КОЙ культуре В-клеток, в которых они реплицировались. В результате происходящей в этих условиях рекомбинаций появились не только фаги с обоими типами мутаций, но также и стандартные фаги, у которых в результате рекомбинации исчезали оба типа мутаций. Поскольку в клетках штамма К растут только рекомбинанты последнего типа, среди миллиардного потомства удается идентифицировать наличие даже единичного рекомбинанта. Предположим теперь, что суммарная длина ДНК фага Т4 составляет 200 000 пар оснований, т.е. на единицу длины карты приходится 286 пар. Частота рекомбинаций между двумя мутациями, равная 0,01%, означает, что в цепи ДНК эти мутации разделены всего лишь тремя парами оснований. Исходя из сказанного, Бензер пришел к выводу, что даже в тех случаях, когда мутации затрагивают основания ДНК, расположенные в непосредственной близости друг от друга, частота ожидаемой рекомбинации между этими двумя мутациями легко может быть определена. [c.250]

Что касается серии white у дрозофилы, то в этом случае возникает некоторое осложнение, поскольку этот локус находится в Х-хромосоме и, следовательно, его наследование сцеплено с полом. Поэтому расщепление иногда происходит в отношении 3 1, а в других случаях — в отношении 1 1 1 1 (см. стр. 142—146). Однако ни в данном случае, ни в других случаях множественных аллелей в результате скрещиваний не возникают рекомбинанты, несущие больше двух представителей данной серии аллелей. Иными словами, мы можем получить особей с генотипом шоу , но не с генотипом п см. также стр. 2Щ. [c.152]

Разберем следующий пример. Если какой-то тип фага способен вызывать на агаре появление маленьких темных пятен, а другой тип фага образует большие светлые пятна, то мы получим в потомстве, кроме родительских типов, также и рекомбинантов, создающих большие темные и маленькие светлые пятна на агаре (фиг. 121). Различия в окраске обусловлены тем, что агаровая пластинка содержит смесь двух культур бактерий при этом фаг одного типа вызывает появление темных пятен, так как он способен поражать и разрушать оба типа бактерий другой же фаг может поражать только одну бактерию, и поэтому пятна остаются как бы полусъеден-ными и имеют более светлую окраску. [c.259]

Бактерии и в самом деле скрещиваются друг с другом. Если смешать клетки двух различных ауксотрофных штаммов Es heri hia oli К12, то среди их потомков обнаруживаются рекомбинанты, ауксотрофные сразу по двум факторам роста, а также рекомбинанты, возвратившиеся к дикому типу (т. е. прототрофы, или анауксотрофы). Однако в данном случае необходим прямой контакт между двумя бактериальными клетками в отличие от трансдукции (когда участок бактериального генома переносится из клетки в клетку бактериофагами) или трансформации (когда участок генома, свободно блуждая, проникает в клетку-реципиент). Показано, что если разделить два штамма, способных к взаимной рекомбинации, поместив их в U-образную трубку со стеклянной пористой перегородкой, не пропускающей бактерий, но легко проницаемой для фагов и фрагментов генома, то рекомбинации не происходит. [c.170]

Рекомбинанты с измененной антигенной структурой становятся чувствительными к одному из фагов Shigella [340], а также к фагам, которые не действовали на исходные клетки [576]. Если же рекомбинанты не подвергаются антигенным изменениям, они сохраняют восприимчивость к фагам, как и исходные клетки. В большинстве случаев не наблюдалось также изменений ферментационных способностей рекомбинантов по сравнению с родительскими штаммами [340]. Исследовалась наследуемость способности синтеза бета-галактозидазы среди рекомбинантов этих типов [486]. [c.52]

Ледерберг считал, что наиболее хорошие результаты даст метод скрещивания двух различных ауксотрофных бактерий при совместном выращивании их в полноценной среде и последующем высеве образцов культуры на минимальную среду, что дало бы возможность отобрать любые редкие прототрофные рекомбинанты, которые могут в этих условиях возникнуть. Однако Ледерберг понимал также, что если акты рекомбинаций будут настолько редкими, что число прототрофных рекомбинантов будет меньше чем 1 на 10 родительских бактерий, то обратные мутации к прототрофности у одного или обоих ауксотрофных родительских штаммов (мутации, которые, по-видимому, должны встречаться со сравни- юй частотой) могут препятствовать обнаружению истинных рекомбинантов. Поэтому он считал, что следует проводить скрещивания, используя в качестве родительских штаммов множественные ауксотрофы, несущие два или более мутантных генов. В этом случае возможность восстановления прототрофности за счет обратных мутаций практически исключалась, так как трудно было представить вероятность возникновения обратных мутаций сразу в нескольких генах одного из родительских штаммов. В 1946 г. Ледерберг решил провести такие скрещивания, однако, чтобы не тратить время на выделение необходимых множественных ауксотрофов самому, [c.214]

Дальнейшие эксперименты Хейса, а также Ледерберга и Кавалли вскоре показали, что генетическая конституция рекомбинантов, полученных в батериальном скрещивании F" X F , в очень большой степени зависит от того, какой из двух родительских штаммов несет фактор F как показывают следующие два скрещивания, большинство неселектируемых маркеров, появляющихся у рекомбинантов, получены от родительского F -штамма. В обоих случаях клетки Met штамма А скрещивали с клетками Thr Leu" штамма В, но в первом случае фактор содержался в штамме А, а Ео втором — в штамме В. На минимальном агаре отбирали реком- [c.219]

Е. соН по данным о сцепленности генов, так как частота появления неселектируемого признака у рекомбинантов, полученных в каком-либо скрещивании, зависит не только от его сцепленности с селектируемым, признаком, но также от того, вводится ли он в скрещивание с родительским F+- или родительским F -штaммoм. [c.220]

Раскрыв общую природу скрещивания Hfr х F", Вольман и Жакоб приступили к выяснению вопроса, каким образом возникают генетические рекомбинанты в классических скрещиваниях F" " X F . Объясняется ли очень низкая частота рекомбинации, достигающая в этих скрещиваниях частоты 10 на родительские клетки, тем, что каждая F -клет-ка способна переносить с небольшой, но равной вероятностью любой определенный участок своего генома в F -клетку при их столкновении Или же Р+-клетка вообще неспособна переносить никакой генетический материал, кроме своего полового фактора F, а рекомбинанты фактически образуются благодаря незначительному количествуТразличных Hfr-мутантов, спрятанных в F-популяции, причем каждый Hfr-мутант способен переносить с высокой эффективностью какой-то ограниченный участок генома Е. соИ7 Постановка этой проблемы в виде таких двух альтернатив делает ее формально аналогичной проблеме спонтанного или индуцированного происхождения бактериальных мутантов, обсуждавшейся в гл. VI, и, следовательно, для решения ее также может быть использован флуктуационный тест Лурия — Дельбрюка. [c.227]

Для выполнения этого теста штамм AF Mef высевали в очень незначительной концентрации (250 клеток/мл) в минимальную среду, содержащую ограниченные количества метионина. Половину этой суспензии делили на 50 небольншх частей и как эти части, так и остающуюся другую половину культуры инкубировали до тех пор, пока не истощался метионин и плотность во всех культурах не достигала примерно 2-10 клеток/мл. Содержимое каждой индивидуальной культуры, а также 50-кратное количество общей культуры смешивали с избытком бактерий из культуры штамма ВР Thr" Leu Str и производили отбор рекомбинантов Thr+ Leu" Str в каждом из этих 100 скрещиваний при высеве на минимальный агар, содержащий метионин и стрептомицин. Общин результат такого флуктуационного теста представлен в табл. 15. Можно [c.228]

Кроме того, доля таких рекомбинантов дикого типа (г+) меньше доли как рекомбинантов hr, так и h r , возникающих в скрещивании h х г7. Это показывает, что г13 располагается к г7 ближе, чем h, и исключает возможности 2 и 3. В процессе обмена, приводящего к образованию дикого типа (а" ), образуется также и двойной мутант г13г7, но последний не так легко выявить, поскольку фенотипически он ничем не отличается от единичного г-мутанта, т. е. так же, как и он, образует стерильное пятно типа г. В скрещиваниях г7 х г7 и г13 X г13, разумеется, не образуется рекомбинантов г+, так как никакие рекомбинационные акты между двумя геномами с г-мутациями в точно соответствующих, аллельных участках ке могут привести к образованию фагового генома, который содержал бы только г -локусы. Это позволяет идентифицировать двойной мутант г13г7, так как он в противоположность единичным мутантам не дает рекомбинантов ни в скрещивании с г7, ни в скрещивании с г13. Аналогичные исследования по картированию семи других неаллельных / -мутантов (от г2 до г8) показали, что все они тесно сцеплены с г7. Эта группа мутаций образует класс г11, который будет подробно рассмотрен в следующей главе. [c.290]

Оказалось, что такие фаги содержат мутацию в гене, кодирующем полипептид длиной 320 аминокислот, необходимый для проникновения фага в клетку-хозяина в каждой частице фага Г2 содержится по одной молекуле такого полипептида. И наконец, мутанты группы III не могут образовывать нормальный белок оболочки, так как они содержат мутации в структурном гене этого белка. Более того, в ограничивающих условиях мутанты группы III синтезируют ненормально большие количества РФ и РП, так как плюс -цепи РНК, образующиеся в зараженных клетках, не инкапсулируются фаговым белком и, следовательно, могут служить матрицами для новых минус -цепей. Опыты по комплементации, в которых бактерии одновременно заражали двумя мутантами фага f2, показали, что три фенотипические группы четко совпадают с тремя группами комплементации при смешанном заражении бактерий двумя фаговыми мутантами, относящимися к разным или к одной и той же фенотипической группе, наблюдается соответственно нормальное или ненормальное развитие фагов. Эти результаты позволили заключить, что в РНК фага f2 закодировано не более трех белков. Следует отметить, что ни в одном из опытов со смешанным заражением не было обнаружено генетической рекомбинации между фагами. Значение такого результата неясно, так как большинство культур мутантов фага 12 содержит до 0,1 % ревертантов дикого типа. Столь высокая скорость мутаций генома РНК затрудняет поиски редких рекомбинантов. Конечно, возможно, также что генетическая рекомбинация тежду геномами РНК вообще не происходит и что этот процесс присущ только полидезоксирибонуклеотидам. [c.475]

Штаммы вируса гриппа нашли широкое применение при изучении генетической рекомбинации, перекрестной и множественной реактивации, а также во всех тестах по определению возможности взаимного обмена отдельными частями геномов у вирусов двух разных штаммов, оба из которых активны (либо оба или один из них инактивированы). Из вирусов, содержащих одноцепочечную РНК, вирус гриппа единственный, с которым во многих лабораториях получены определенно положительные результаты во всех этих экспериментах [121]. Это необычное поведение вируса гриппа можно, по-В1щимому, понять, если вспомнить, что РНК этого вируса, по последним данным, состоит из нескольких молекул (см. гл. VI, разд. Г). В настоящее время выяснено, каким образом части генома инактивированной вирусной частицы могут посредством рекомбинации реплицироваться и включаться в инфекционные вирусные частицы потомства. Было показано, что нейраминидаза, присутствующая в стабильном рекомбинанте вируса гриппа, происходит из одного родительского штамма, а все прочие основные белки — из другого родительского штамма [284]. [c.181]

Новая гЛ-мутация фага Т4 дает рекомбинанты дикого типа при скрещивании с уЪ (см. рис. 6.10), но не дает их при скрещивании с 1241. Рекомбинанты дикого типа возникают также при скрещиваниях с 1993, 1695, РТ153 и Н88, но не появляются при скрещивании с 386 и 168. В каком участке карты г11 локализована мутация [c.185]

Когда фаг Р1 размножают на клетках thr leu azi , и затем полученным препаратом фага инфицируют реципиента ihr leu azi , то лишь 3% от рекомбинантов типа Thr" обладают также фенотипом Leu, и ни один из них - фенотипом Az . Однако, если отбирать рекомбинанты типа Leu, то 50% из них составляют Az . Следовательно, leu более тесно сцеплен с azi , чем с thr, и гены, по-видимому, расположены в последовательности thr leu azi . Частоты совместной трансдукции (котрансдукции) соответствующих маркеров можно использовать для определения степени их сцепления. Тот факт, что лишь 3% трансдуцирующих фагов thr содержат также ген leu, указывает на то, что эти гены столь удалены друг от друга, что редко оказываются вместе во фрагменте ДНК, попадающем в головку фага Р1. На физической карте, полученной методом прерванной конъюгации, эти маркеры расположены на расстоянии около 1/50 от общей длины хромосомы бактерии, что составляет 6,4 10 н. п. Это находится в хорошем соответствии с данными, согласно которым молекула ДНК фага Р1 содержит чуть меньше 10 н.п. [c.250]

Установлено, что определенный штамм Е. соН, требующий для роста метионин, содержит в гене met элемент ISI, инактивирующий этот ген и вызывающий потребность в метионине. Из этого щтамма выделено множество спонтанных мутантов с делециями, затрагивающими смежный по отношению к гену met оперон ilv. Носители этих делеций, кроме метионина, нуждаются также в изолейцине и ва-лине. Каждый из штаммов с одной из делеций используется в качестве донорного для трансдукции фагом Р1 маркеров ilv в реципиентные щтаммы ilv ". Используются реципиентные штаммы ilv А ", ilvB , ilv и ilvD . В приводимой таблице указано присутствие ( -I- ) или отсутствие ( — ) рекомбинантов ilv в каждом [c.257]

ПО горизонтальной оси приводит к образованию продуктов, нерекомбинантных по фланкирующим маркерам, но содержащих гетеродуплексные участки ДНК. При расщеплении по вертикали образуются рекомбинанты по фланкирующим маркерам, также содержащие гетеродуплексные участки. Если оба варианта расщепления структуры Холлидея равновероятны, то генетический обмен в половине случаев будет сопровождаться рекомбинацией фланкирующих генетических маркеров. [c.145]

Искомая мутация локализуется между генами str и his. Работая со штаммом АВ313 и используя стрептомицин для селекции против родительских клеток Hfr, студент создал условия, в которых любая мерозигота, получившая аллель дикого типа по интересующей его мутации, получит одновременно и тесно сцепленный с ним аллель str. Поэтому большинство рекомбинантов, несущих аллель дикого типа по искомой мутации, окажутся стрептомицин-чувствительными и погибнут на содержащей стрептомицин селективной среде. По совету преподавателя, удалив стрептомицин из селективной среды, студент для селекции против родительских клеток Hfr может использовать потребность в аденине (Ade "). Для этих же целей он может воспользоваться также средой с аденином, применяя в качестве селектирующего агента фаг Т1. [c.281]

Размножайте клетки в L-среде с 30 мкг/мл канамицин-суль-фата. Никогда не выращивайте космидсодержащие клетки без антибиотика и всегда — с хорощей аэрацией. Для получения-мини-препаратов мы выращиваем 5 мл в 50-миллилитровой пробирке, для препаративного выделения — 500—1000 мл в колбе на 2 л с энергичной аэрацией. Засев произведите введением-одной колонии или небольшого количества стационарной культуры и инкубируйте в течение ночи (17 ч) при 37 °С. Некоторые космиды обусловливают плохой рост клеток в таких случаях культура не достигает стационарной фазы и ее нужно культивировать дольше. Для космид, не являющихся производными фага К, мы не рекомендуем проводить амплификацию в присутствии хлорамфеникола. Это может повысить выход, но может также привести к преимущественной репликации делеционных производных исходных рекомбинантов. [c.60]

Разработка метода бляшек для вирусов гриппа в клетках фибропластов куриного эмбриона ( EF) [111 117] позволила идентифицировать одношаговые мутанты и установить частоту реверсии [117]. Она привела также к подтверждению более ранних исследований по кросс-реактивации вируса, инактивированного УФ-луча-ми [4, 19, 32, 64J, и, что особенно ван<но, к основанию методов клонирования некоторых бляшкообразующих штаммов вируса 1111]. Позднее использование перевиваемых человеческих клеточных линий расширило перечень вирусов, для изучения которых можно было применять метод бляшек и готовить рекомбинанты, различающиеся по типу образующихся бляшек [121, 122]. Только значительно позднее было установлено, что загадочная неспособность вирусов гриппа образовывать бляшки обусловлена главным образом необходимостью обязательного расщепления вирусного НА эндогенными протеазами клетки хозяина, без чего невозможны инфицирование клетки и репликация вируса [67, 76]. Возможность применения только тех нескольких вирусов (в основном WSN и RWS — вариантов оригинального штамма WS), которые образовывали отчетливые бляшки, значительно ограничивала проведение генетических экспериментов. К настоящему времени установлено, что образование бляшек вирусом WSN, по крайней мере [c.15]

Иммунофлюоресценция клетки, инфицированные ЗУ40-НА-рекомбинантами, показывали яркую цитоплазматическую флюоресценцию с особенно интенсивным окрашиванием аппарата Гольджи. Поверхность клеток также специфически окрашена, характеризуясь однородным флюоресцентным свечением. Распределение флюоресценции в клетках, инфицированных вирусом гриппа, было подобно распределению, характеризующему клетки, инфицированные рекомбинантами, но с более низкой интенсивностью. [c.172]

Для проведения полноценных генетических экспериментов необходимо, чтобы вирус был способен к бляшкообразованшо на используемых клетках хозяина. Это требование в значительной степени ограничило изучение ts-мутантов вируса гриппа использованием штамма WSN при инфицировании фибробластов куриного эмбриона [94, 141, 142, 248] или клеток MDBK [260, 261] рекомбинанта Х-3311 (на основе штамма NWS-A1, репродуцированного на хорион-аллантоисной мембране), образующего бляшки в клеточной линии человеческой конъюнктивы 1-5С-4 [271] птичьего вируса гриппа А (FPV), репродуцированного в фибробластах куриного эмбриона [9, 150, 222] некоторых человеческих вирусов — кандидатов в вакцинные штаммы, выращенных на первичных клетках почки цыпленка, обезьяны или быка [137, 159]. Совсем недавно в качестве хозяина для выращивания человеческих вакцинных штаммов были использованы также клетки MD K [117, 243, 244, 245]. [c.188]

Смотреть страницы где упоминается термин Рекомбинанты III также: [c.306] [c.13] [c.1006] [c.490] [c.370] [c.371] [c.387] [c.51] [c.51] [c.54] [c.93] [c.242] [c.302] [c.353] [c.43] [c.179] [c.70] [c.17] [c.165] [c.170] [c.170] [c.174] [c.175] [c.232]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология