Сдвиг заряда при электрофорезе

Эйлере и Корф [65] определяют С-потенциал как работу, затрачиваемую на перенос электрона (или единичного заряда) из внешней обкладки двойного слоя к плоскости, по которой проис- о-1ИТ скольжение (сдвиг) при электрофорезе. [c.195]

Электрофорез в ПААГ нативного белка со сдвигом заряда [c.60]

Пространственное разделение зарядов в двойном слое и обусловливает возникновение электрокинетических явлений — взаимный сдвиг граничащих фаз при наложении внешнего электрического поля (электрофорез и электроосмос) или перенос заряда при взаимном перемещении фаз (потенциалы и токи протекания и седиментации). Следующее простейшее рассмотрение, отвечающее схеме Гельмгольца, показывает спязь скорости смещения фаз, например электроосмоса, с напряженностью Е внешнего электрического поля, направленного вдоль поверхности . [c.175]

Из-за флуктуации зарядов белок может существовать при одном и том же значении pH в различных ионных формах. Поэто-му, измеряя подвижность, мы находим значение, усредненное за промежуток времени, значительно превосходящий время жизни каждой из ионных форм белка. Вблизи изоэлектрической точки зависимость подвижности и от pH часто является линейной, т. е. описывается прямой. Наклоны таких прямых для разных белков, как правило, различны. При том значении pH, где кривые, построенные для двух белков, пересекаются, разделить эти белки с помощью электрофореза невозможно. В изоэлектрической точке = 0. Величина pH, при которой и = 0, зависит от состава буфера, в котором проводится эксперимент. Обычно буфер, содержащий простые однозарядные ионы, меньше сдвигает изе электрическую точку, чем буфер с ионами более сложного строения. [c.218]

По мнению некоторых авторов [157, 158], указанные кислоты в концентрированной серной кислоте существуют в виде интенсивно окрашенного катиона Н = ОН+, что было подтверждено с помощью электрофореза [158]. При разбавлении эта форма разрушается, превращаясь в молекулярную при этом резко снижается интенсивность поглощения и максимум смещается в коротковолновую часть спектра. При постепенном увеличении pH молекулярная форма переходит в анионы различного заряда (см. табл. 2) и, наконец, при pH > 12 происходит отрыв последнего протона, сопровождающийся быстрым ростом оптической плотности и резким сдвигом полосы поглощения в длинноволновую часть спектра. По мнению Муста- [c.31]

Если малые молекулы имеют характерное спектральное поглощение, концентрация несвязанных молекул может быть определена по оптической плотности в верхней части кюветы после седиментации полимера в ультрацентрифуге. В некоторых случаях ассоциация сопровождается спектральным сдвигом или изменением флуоресценции, которые могут быть использованы для оценки равновесия при ассоциации. Если взаимодействующие молекулы несут электрический заряд, об ассоциации можио судить но результатам изучения электрофореза. [c.311]

Молекула ДНК обладает высоким отрицательным зарядом и, следовательно, в электрическом поле быстро движется к положительному электроду. При электрофорезе в полиакриламидном геле молекулы ДНК разделяются по размеру, так как меньшие молекулы легче и быстрее проходят через поры геля. Молекулы белка, связавшись с ДНК, вызывают уменьшение подвижности ее молекул в геле. Чем больше связавшийся белок, тем медленнее движется связанная с ним ДНК. Это явление лежит в основе метода, регистрирующего сдвиг подвижности в теле. С помощью этого метода удается обнаруживать даже следовые количества сайт-специфического ДНК-связывающего белка. Короткие фрагменты ДНК, длина и последовательность которых известна (полученные либо при клонировании ДНК, либо путем химического синтеза), метят радиоактивной меткой и смешивают с экстрактом клеток полученную смесь наносят на полиакриламидный гель и проводят электрофорез Если фрагмент ДНК соответствует области хромосомы, с которой связываются многие сайт-специфические белки, то при радиоавтографии выявляется серия полос, обладающих разной подвижностью. Белки, связанные с ДНК в каждой из полос геля, можно отделить, фракционируя затем клеточные экстракты (рис. 9-9). [c.102]

Рис. 27. Обнаружение гидрофобных белков двумерным электрофорезом со сдвигом заряда [ВЬакШ е1 а ., 1977]

Х-100 с добавлением в него либо цетавлона до 0,5%, либо дез-оксихолата натрия (ДОХ) до 0,25%. Тритон Х-100 образует мицеллы, которые связываются с гидрофобными участками белка в количестве, пропорциональному размеру этих участков. Цетавлон или ДОХ объединяются с Тритоном Х-100 в смешанные мицеллы, привнося тем самым в комплекс с белком соответственно положительный или отрицательный заряд, существенно превышающий собственный заряд белка. При электрофорезе белки мигрируют со скоростью, обусловленной знаком и величиной привнесенного заряда. Такой прием можно назвать электрофорезом со сдвигом заряда . Необычное введение в буфер геля 0,1 М Na l по-видимому, способствует как растворимости белков, так и образованию мицелл. Напряженность поля при этом приходится снижать до 4,5 В/см. [c.87]

Электрофорез в ПААГ нативного белка проводили в блоках полиакриламидного геля в системе Андерсон, Борг и Микаэльсон (1972) и в системе со сдвигом заряда (Колесниченко и др,, 2000), [c.10]

Рис. 30. Электрофорез со сдвигом заряда нативных цитоплазматических (1), ядерных (2) и митохондриальных (3) белков, полученных из побегов 3-х суточных этиолированных проростков озимой ржи (Se ale ereale L., сорт Дымка).

Pii . 17. Электрофорез в ПААГ нативного белка со сдвигом заряда. [c.61]

Пространственное разделение зарядов в двойном слое и обусловливает возникновение электр0]шнетических явлений — взаимный сдвиг граничащих фаз при наложении внешнего электрического ПОЛЛ (электрофорез и электроосмос) или перенос заряда при взаиА ШОм перемещении фаз (потенциалы, токи течения [c.211]

В работе [9] высказывается следующая точка зрения на механизм разделения эмульсии. Эмульсия в смесителе доводится до коллоидного состояния. Заряд на коллоидных частицах, проявляющийся при электрофорезе, обусловлен наличием на их поверхности двойного электрического слоя. При наложении внешнего электрического поля на поле двойного электрического слоя электронейтральность мицелл нарушается и создаются условия для электрофореза. На поверхности ядер возникают индуцированные внешним электрическим полем заряды связанные ранее между собой потенциалообразующие ионы и противоионы сдвигаются в направлении внешнего поля. Частицы дисперсной фазы, заряженные отрицательно, начинают перемещаться к положительному электроду, а противоионы — к отрицательному. Чем выше напряженность внешнего поля, тем интенсивнее нро- [c.13]

Методом электрофореза было установлено, что полиион циркония несет положительный заряд граница раздела фаз раствор УМСгг — 1N HNOj сдвигается в сторону отрицательно заряженного электрода. [c.188]

В то время как связывание катионов с полимерными кислотами было предметом многочисленных исследований, специфическим связыванием анионов с катионными полимерами в основном пренебрегали. Об интересном примере процессов этого типа сообщалось Штрауссом и др. [885], которые при исследовании электрофореза обнаружили, что знак заряда четвертичного поливинилпиридина обращается в присутствии больших количеств бромида. Этот эффект может быть объяснен образованием комплексов с переносом заряда из пиридинового ядра и бромид-иона, что подтверждается наличием сдвига в спектре УФ-поглощения [886]. [c.318]

Впервые двухмерная система для электрофореза рибосомных белков была описана Кальтшмидтом и Уитменом [654]. Позднее сходные процедуры были применены и другими авторами. Все существующие в настоящее время методы можно разделить на две группы. К первой группе относятся методы, в которых при электрофорезе во втором направлении изменяют заряд белков, сдвигая pH буфера геля в ту или другую сторону. В методах второй группы заряд и структура белков, разделенных в первом направлении, резко изменяются в результате комплексообразования с ДСН. [c.312]

При рассмотрении методов электрофореза был описан вариант со смещением заряда [Остерман, 1981]. Суть его в том, что в буфер геля одновременно с Тритоном Х-100 вводят дезоксихолат натрия или цетавлон. Два этих детергента имеют ионную природу и могут нести соответственно отрицательный и положительный заряды. Они связываются с Тритоном Х-100, образуя смешанные мицеллы, а через него — и с гидрофобными белками, которые при этом приобретают дополнительный заряд, нередко способствующий их отделению от прочих белков. Такой подход при электрофорезе в первом направлении был использован Бхакдн и соавторами при изучении белков, экстрагированных из мембран эритроцитов, методом перекрестного иммуноэлектрофореза. В присутствии дезоксихолата авторы наблюдали заметный сдвиг некоторых пиков по сравнению с контрольным опытом (без дезоксихолата), например для антитрипсина, орозомукоида и третьего белка комплемента [Bhakdi et al., 1977]. [c.149]

Сдвиг соседних пятен во втором направлении будет примерно одинаковым для всех фрагментов, отличающихся на один нуклеотид, так как разделение в этом направлении происходит строго по размерам. Другое дело — в первом направлении. Здесь (при pH 3,5) присоединение к предыдущему фрагменту остатка уридиловой кислоты увеличивает его массу и одновременно привносит единичный отрицательный заряд. Таким образом, отношение суммарного заряда к массе почти не изменяется. Присоединение же цитидилового остатка только увеличивает массу, но заряда не вносит, так как отрицательный заряд фосфата компенсирован положительным зарядом основания. Очевидно, что фрагмент, удлиненный на звено цитозина , будет при электрофорезе мигрировать медленнее, чем фрагмент, удлиненный на звено урацила , хотя оба они будут отставать от неудлиненного фрагмента за счет возрастания трения о гель. [c.146]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология