Электроды с оксидазой аминокислот

Селективные к аминокислота.м электроды разрабатывались на основе стеклянных обратимых по катионам электродов, например электрода, чувствительного к однозарядным катионам (Бекман, тип 39137). Получают эти электроды следующим образом наносят тонкий слой фермента (оксидазы ь-аминокислоты, г-ААО, для г-аминокислотного электрода оксидазы о-аминокислоты, о-ААО, для о-аминокислотного электрода аспарагиназы для аспарагинового электрода глутаминазы для глутаминового электрода и т. д.) на электрод, чувствительный к однозарядным катионам. [c.186]

ИЗ силиконовой резины, наполненной антибиотиком, и который предназначен для определения аммония, образующегося в результате гидролиза L-фенилаланина под действием оксидазы ь-аминокислоты. Мембрану электрода получают, смешивая силиконовую резину с антибиотиком нонактином [546]. Мембранный диск приклеивают к торцу стеклянной трубки, которую заполняют 0,2 М хлоридом лития — внутренним раствором сравнения внутренним электродом сравнения служит полоска серебра. Иммобилизацию фермента проводят методом, сходным с описанным в [553]. [c.189]

Согласно уравнению (XI. 12), разрушение L-аминокислоты, катализируемое L-аминокислотной оксидазой, происходит с поглощением кислорода, так что протекание реакции может контролироваться посредством измерения уменьшающегося количества растворенного кислорода. С этой целью применяли систему, представляющую собой платиновый электрод, на поверхность которого с помощью найлоновой пленки и резинового кольца наносили иммобилизованную L-AKO [20]. Этот электрод вместе с НКЭ погружали в буферный фосфатный раствор (0,1 М, 10 мл, pH = = 7,3) и подавали напряжение —0,6 В. Когда устанавливался [c.339]

Потенциометрические ферментные электроды были предложены для определения аминокислот, мочевины, нитрат- и нитрит-ионов, пенициллина. В качестве ферментов в них использовались оксидазы или декарбоксилазы аминокислот, уреаза, нитрит- [c.92]

В амперометрических ферментных датчиках чаще всего применяются ФАД-зависимые оксидазы для определения глюкозы, холестерина, аминокислот и т. д. в сочетании с Ог- или НгОг-электрода ми. [c.93]

Биосенсоры на основе электрода Кларка позволяют определять лактаты, Ь-аминокислоты, салицилаты, оксалаты, пируваты (табл. 14.1). В основном применяются оксидазы (холестериноксидаза, пероксидаза, оксидазы аминокислот, алкогольоксидаза и др.), гид- [c.501]

Предложены электроды для огфеделения суммы некоторых аминокислот (тирозин, фенилаланин, триптофан, метионин) в крови, поскольку их содержание является важным диагностическим показателем в клинических анализах. Такие датчики представляют собой катионоселективный электрод, чувствительный к образующимся при ферментативном окислении ионам аммония, на котором иммобилизован слой Ь-аминокислотной оксидазы из змеиного яда. Датчики другого типа регистрируют уменьшение активности ио-дид-ионов на поверхности электрода в результате реакций [c.216]

Хорощо известно, что скорость ферментативных реакций зависит от pH. Гюильбо и Храбанкова [542 — 544] нащли, что оптимальное pH для реакций с оксидазой ь-аминокислот составляет 7 — 7,5, а для оксидазы о-аминокислоты 8 — 8,5. Поскольку такой электрод чувствителен к однозарядным катионам калия, натрия и аммония, их присутствие мещает определению аминокислот. Влияние этих катионов можно устранить, только удалив их из раствора ионным обменом. [c.187]

Гюильбо и Нейджи [546] разработали чувствительный к ь-фенила-ланину электрод на основе иодидного ион-селективного электрода. Активная поверхность иодидного электрода представляет собой поверхность диска, спрессованного из смеси Ag2S и Agi 1 1 (по массе). Этот диск подсоединяют к корпусу стеклянного электрода. В качестве внутреннего раствора используют раствор нитрата серебра, а электродом фавнения служит погруженная в него серебряная полоска. Ффментная система фактически представляет собой смесь оксидазы ь-аминокислоты и пероксидазы, иммобилизованных в полиакриловом геле. Последний распределяют тонким слоем на поверхности электрода под слоем диализной бумаги. Как уже отмечалось в разд. 14.1, электрод, чувствительный к глюкозе, имеет аналогичное устройство. Образовавшаяся при разложении фенилаланина перекись водорода окисляет иодид, добавленный (в известном количестве) к пробе. Описанный выше электрод регистрирует снижение концентрации иодида. [c.189]

Наньо и Гюильбо [548] разработали новый ферментный электрод на L-аминокислоты на основе электрода — датчика растворенного кислорода, который представляет собой платиновый дисковый электрод (Бекман 39273), запрессованный в пластмассовый цилиндрический корпус. Иммобилизованный сополимер фермента, полученный смешением оксидазы L-аминокислоты, альбумина и глутарового альдегида в 0,1 М фосфатном буферном растворе (pH 7,3), наносят на поверхность платины. Чтобы защитить слой фермента, на электрод надевают чехол из найлоновой ткани, укрепленный резиновым кольцом. Снижение концентрации растворенного кислорода в результате ферментативной реакции [см. реакцию (15.2)] измеряют полярографическим методом. Порядок работы в этом случае такой же, как и при определении спиртов (см. разд. 7.1). Электрод стабилен в течение по крайней мере 4 месяцев, время отклика составляет 1 мин. [c.191]

Гюильбо и Любрано [549] описали амперометрический метод определения некоторых L-аминокислот (цистеин, лейцин, аланин, тирозин, фенилаланин, триптофан и метионин), основанный на применении электрода с оксидазой L-аминокислоты. Электрод содержит оксидазу L-аминокислоты, которая удерживается на поверхности платинового электрода (Бекман 39273) с помощью целлофановой пленки и резинового кольца. Концентрацию образующейся по реакции типа (15.2) перекиси водорода определяют амперометрически при pH 7,8. [c.191]

Гюильбо и др. [663] исследовали катион-селективные стеклянные электроды Бекман 39047 и 39137 для определения уреазы, глутаминазы, аспарагиназы и оксидаз о- и L-аминокислот. К известному объему трис-буфера (pH 7,0) добавляют определенный объем анализируемого раствора фермента. Индикаторный электрод и электрод сравнения (нас.к.э.) погружают в раствор, после чего потенциал записывается автоматически. Потенциал, соответствующий наименьшей концентрации NH4, можно установить по калибровочной кривой. Большой положительный потенциал указывает на присутствие катионов щелочных металлов, которые воздействуют на электродную функцию. В этом случае в пробу добавляют небольшое количество катионообменной смолы (дауэкс 50 или подобной ей), перемешивают 5 мин, фильтруют и к профильтрованному раствору добавляют определенный объем соответствующего субстрата (мочевина, глутамин, аспарагин, о-пролин или г-тирозин). Потенциал меняется как функция концентрации образовавшихся ионов аммония. Количество имеющегося фермента можно рассчитать из кривой зависимости Д /мин от концентрации фермента. [c.212]

Многочисленные способы анализа аминокислот рассмотрены Гильбо [45]. Им же и Храбанковой [46] описан электрод на основе фермента -аминокислотной оксидазы (L-AKO), тонким слоем которой покрывали катионоселективный электрод фирмы Весктап [47]. L-аминокислота диффундировала в энзимный слой, где фермент катализировал ее разложение до NH по реакции [c.336]

Подобным же образом для определения D-аминокислот сконструированы и испытаны электродные системы, состоящие из катионоселективного стеклянного электрода Весктап 39137 и энзимного слоя D-аминокислотной оксидазы [49]. Определяли следующие D-аминокислоты D-фенилаланин, -аланин, -валин, -метионин, -лейцин и изолейцин, которые могут вступать в реакции типа (XI.12) и (XI.13) в присутствии Ь-аминокислотной оксидазы. [c.337]

Поскольку фермент оксидаза L-аминокислот не специфичен к определенной аминокислоте, а катализирует группу их, для определения индивидуальной аминокислоты, например L-фенилаланина, в работе [279] предложена L-фенилаланинаммиаклиаза. Применение электрода с газовым зазором обеспечивает высокую селективность в присутствии не только других аминокислот, но и различных катионов. Реакция протекает по схеме [c.131]

З. Определение аминокислот. Ферментные электроды широко применяют в клинических анализах, поскольку некоторые аминокислоты (тирозин, фенилаланин, триптофан, метионин) являются важными диагностическими индикаторами. Первые такие электроды [17] представляли собой катионоселективный электрод, чувствительный к образующимся при ферментативном окислении аминокислот ионам аммония, на котором был иммобилизован слой L-аминокислотной оксидазы из змеиного яда. Гилболт и Надь [23] разработали два различных типа сенсоров для определения L-фенилаланина в крови. В сенсоре одного типа полиакриламидный слой, содержащий смесь L-аминокислотной оксидазы с пероксидазой, наносили на иодидселективный электрод. Этот датчик регис трирует уменьшение активности иодид-ионов на поверхности электрода в результате следующих реакций [c.127]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология