Окраска фиксированных бактерий

По второму способу чистые культуры получают методам многократных пересевов. Зараженная жидкая среда (нагретый агар-агар) выливается в чашки Петри и застывает в инх тонким слоем. Прн затвердевании среды бактерии фиксируются на поверхности или в толще слоя студня. Через 24—48 ч вырастают колонии бактерий, которые отличаются формой, структурой или окраской. Колонии изолируют и заражают ими новую среду. [c.288]

Высушенные мазки фиксируют в пламени горелки для того, чтобы убить и закрепить бактерии на стекле, предотвратив их смывание в процессе окраски. Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители, а также не представляют опасности для работающих. Предметное стекло берут пинцетом или большим и указательным пальцами правой руки мазком вверх и троекратно проводят через наиболее горячую часть пламени горелки. Фиксация этим способом продолжается около 5 — 6 с, а действие пламени — 2 с. [c.14]

Более четко, хотя и с большими затратами времени, фиксацию осуществляют с помощью химических агентов. Проста и часто вполне удовлетворительна фиксация 5%-ным формалином (объем/объем) в течение нескольких минут, особенно для окраски по Граму (разд. 3.3.5). Подробное описание фиксации четырехокисью осмия (разд. 2.2.2) и по Боуэну (разд. 2.2.1) см. в гл. 2. В последнем случае берут бактерии, выросшие за несколько часов в микроколонии или распределенные до монослоя на твердой среде в чашке Петри. Кусочек агара с бактериями вырезают, фиксируют и переносят на покровное стекло, а затем окрашивают соответствующим образом одним из основных красителей или специально обрабатывают для получения цитохимической информации. Эту методику применяют к молодым культурам всего через несколько часов после посева на агар, когда формируется сплошной слой из микроколоний. Лучше всего заливать агар соответствующей суспензией и отсасывать избыток пастеровской пипеткой, наклоняя чашку. После этого чашку подсушивают и инкубируют. Влажные пленки бактерий на покровных стеклах фиксируют и до высушивания, выдерживая их в парах 2%-но- [c.60]

Окраска жгутиков по способу Фонтана. Для окраски жгутиков используют клетки 12—16-часовой культуры, выращенной на скошенной агаризованной среде с конденсационной водой. Культуру вынимают из термостата и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. В пробирку с 0,5 мл водопроводной стерильной воды вносят клетки, взятые на границе с конденсационной водой. Материал берут осторожно, следует только коснуться бактериологической петлей поверхности культуры. Петлю с бактериальной массой оставляют в воде на 1 ч. За это время подвижные бактерии окажутся свободно взвешенными в воде. Затем петлю вынимают, прокаливают, охлаждают и только после этого ею берут капли взвеси бактерий и осторожно наносят их на обезжиренное стекло. Нанесенные капли не размазывают, они должны быстро высохнуть, лучше в термостате. Мазки фиксируют 5 мин жидкостью Руге. Препарат промывают водой, заливают протравой и подогревают стекло до появления паров в течение [c.107]

С целью подсчета бактерий на мембранном фильтре в качестве красителя обычно применяют эритрозин. Даубнер и Петер [57] дают подробное описание процедуры окрашивания в этом случае. Для фильтрования подбирают объем воды, такой, чтобы всякий раз в поле иммерсионного микроскопа было видно по меньшей мере 30 окрашенных бактерий. После фильтрации быстро фиксируют бактерии пропусканием через мембрану 5 мл 5 %-ного раствора формалина (эту операцию можно не проводить, если в пробе нет патогенных бактерий). После окончательной промывки дистиллированной водой мембрану сушат на воздухе около получаса в прикрытой сверху чашке, затем пеоеносят ее в чашку, содержащую толстую фильтровальную бумагу, насыщенную 3 %-ным раствором эрит-розина в 5 %-ном феноле. Оставляют мембрану в контакте с красителем на 30 мин, затем несколько раз промывают ее водой (также с помощью фильтровальной бумаги), пока мембрана не будет иметь лишь слабый розовый цвет. При правильном приготовлении мембрана под микроскопом будет казаться бесцветной или слегка розоватой, а бактерии будут красными и хорошо контрастировать с мембраной. После окраски и высушивания мембрану делают прозрачной в иммерсионном масле и исследуют под покровным стеклом с помощью масляно-иммерсионного объектива. Замечено, что для обнаружения в поле зрения микроскопа статистически надежного числа бактерий необходимо отфильтровывать достаточное количество воды. Вообще говоря, для надежного подсчета необходимо около 30 бактерий на поле и подсчет следует вести по достаточно большому числу полей, чтобы стандартная ошибка снизилась до допустимого уровня. Некоторые общие правила статистического подсчета рассматриваются в разд. 8.8. [c.210]

Для микроскопических наблюдений над молочнокислыми бактериями готовят препарат из прокисшего молока. Бактериологическую петлю вводят в сгусток и, повернув вокруг оси, извлекают, прикасаясь ею и к пленке. Сгусток размазывают на предметном стекле очень тонким слоем без воды. Сушат на воздухе. Фиксируют смесью спирта с эфиром (лриблизительно 1 1), несколько раз нанося смесь на мазок и сливая ее. При такой фиксации не только погибают и прикрепляются к стеклу бактерии, но и параллельно эфиром извлекается и удаляется жир. Это необходимо, потому что капли жира на препарате мешают окраске и микроскопиро-ваиию. [c.94]

Микроскопия. Это исследование является основным методом диагностики острой гонореи и бленнореи. Материал для исследования отделяемое из уретры, предстательной железы, канала шейки матки, конъюнктивы и др. Из мочеиспускательного канала материал берут следующим образом наружное отверстие его вытирают ватой, смоченной стерильным ИХН, надавливают пальцем на заднюю стенку мочеиспускательного канала изнутри кнаружи (у женшин для этого вводят во влагалище указательный палец) и выдавливают каплю гноя. Секрет предстательной железы получают путем ее массажа. Отделяемое слизистой оболочки шейки матки извлекают тампоном после введения во влагалище зеркала Куско. При бленнорее отделяемое конъюнктивы снимают петлей. Готовят не менее два мазков на предметном стекле. Мазки фиксируют в фиксирующей жидкости и окрашивают щелочным раствором метиленового синего и по Граму. При микроскопии гонококки имеют вид бобовидных грамотрицательных диплококков, расположенных, подобно менингококкам, внутри клеток (нейтрофильных гранулоцитов), а также внеклеточно (см. цв. вклейку, рис. 18), Окраска по Граму позволяет дифференцировать гонококки со стафилококками и другими бактериями. [c.120]

Микроскопия. Т. vaginalis известна только в вегетативной форме, ее можно обнаружить в выделениях из влагалища, шейки матки, мочеиспускательного канала, секрете предстательной железы. Исследуются нативные или фиксированные и окрашенные препараты. Нативные мазки микроскопируют при увеличении в 400 раз с прикрытой диафрагмой. Перед окраской мазки фиксируют высушиванием на воздухе или путем обработки метиловым спиртом, смесью Никифорова, а также парами карболовой кислоты, формалина, осмиевой кислоты. Наиболее распространенные способы окраски — по Романовскому—Гимзе и по Граму. Последний метод используется для одновременного определения трихомонад и бактерий. [c.365]

Микоплазмы, вероятно, представляют собой самые маленькие бактерии, которые можно наблюдать в световой микроскоп и которые с трудом поддаются индивидуальному распознаванию из-за сильно выраженного плеоморфизма. Характерные колонии микоплазм, имеющие вид яичницы-глазуньи, наблюдают при прямой микроскопии чашек с агаром. Для анализа колоний полезен подход, разработанный Динесом и заключающийся в том, что препараты смотрят после того, как на место роста бактерий наносят каплю метиленового синего и накрывают ее покровным стеклом. В случае объектов, близких по размерам к пределам разрешения, оптические измерения при фазово-контрастной микроскопии затруднены по двум причинам. Первая — это ореольные артефакты и вторая — присущие фазовому контрасту особенности формирования изображения, благодаря которым круглые объекты выглядят меньше, чем они есть на самом деле. В морфологических исследованиях и при изучении подвижности микоплазм применяются влажные препараты. Что же касается типа микроскопирования, то рекомендуются методы фазового контраста и темнопольного освещения. Если нужны окрашенные препараты микоплазм, то предпочтительнее использовать несколько модифицированную методику окраски по Гь м-зе (см. ниже), которую следует применять к предварительно фиксированным организмам. Фиксировать микоплазмы лучше раствором Боуэна (разд. 2.2.1) непосредственно в слое агара, лежащем на покровном стекле. [c.84]

Фиксация атмосферного азота возможна только в образующихся в корневой системе растения клубеньках. Их возникновение связано с инфицированием корневой системы бобового растения бактериями из рода Rhizobium. Заражение корневой системы происходит только через молодые корневые волоски после внедрения бактерии прорастают внутри них до самого основания в виде инфекционной нити. Выросшие нити проникают сквозь стенки эпидермиса в кору корня, разветвляются и распределяются по клеткам коры. При этом индуцируется деление клеток хозяина и разрастание тканей. В месте локализации бактерий на корне растения-хозяина образуются клубеньки, в которых они быстро размножаются и располагаются по отдельности или группами в цитоплазме растительных клеток. Сами бактериальные клетки увеличиваются в объеме в 10—12 раз и меняют свою форму. Если такие клубеньКи имеют красноватую или розовую окраску, обусловленную наличием пигмента легоглобина (леггемоглобина) — аналога гемоглобина крови животных, то они способны фиксировать молекулярный азот. Неокрашенные ( пустые ) или имеющие зеленоватую окраску клубеньки не фиксируют азот. [c.81]

Окраска капсул по методу Гинса. На конец предметного стекла микробиологической петлей наносят каплю черной туши, вносят в нее клетки, хорошо перемешивают и ребром покровного стекла делают мазок до всей поверхности стекла. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют 5—10 мин смесью Никифорова или 3 мин абсолютным метанолом. Далее мазок окрашивают карболовым фуксином Циля, разбавленным водой в соотношении 1 3. Время окрашивания — 2—3 мин. Препарат промывают водой, высущивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой. На темно-сером фоне препарата контрастна выделяются розово-малиновые клетки бактерий, окруженные бесцветными капсулами. [c.104]

Клеточная стенка. Тонкую структуру клеточной стенки хорошо видно лишь в электронном микроскопе. Для наблюдения клеточной стенки в световом микроскопе применяют метод темного поля либо специальную окраску, с помощью которой удается легко выявить границы между отдельными клетками, расположенными в виде длинных нитей или плотных агрегатов. На обезжиренном стекле делают мазок клеток исследуемых бактерий, высушивают его на воздухе и фиксируют в течение 5 мин 5%-ным раствором фосфоромолибденовой кислоты. Затем препарат промывают водой, и окрашивают не более 15 с 0,02%-ным раствором кристаллвио-лета. Снова промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. Клеточная стенка окрашивается в черный, а цитоплазма — в бледно-сиреневый цвет. [c.104]

Липидные гранулы. У дрожжей и мицелиальных грибов запасные липиды представлены нейтральными жирами, которые легко обнаруживаются в живых клетках без специальных методов окраски в виде сильно преломляющих свет капель. Бактерии в качестве резервных липидов образуют поли-р-оксимасляную кислоту. Гранулы поли-р-оксибутирата хорошо заметны при микроскопировании живых бактериальных клеток с фазово-контрастным устройством, однако чаще для их выявления клетки окрашивают ли-пофильными красителями — Суданом III или Суданом черным. Готовят тонкий мазок клеток, высушивают его на воздухе и фиксируют в пламени горелки. Заливают поверхность мазка раствором Судана черного и оставляют краситель на 5—15 мин. Избыток красителя сливают, просушивают препарат фильтровальной бумагой, просветляют в ксилоле, погружая в него несколько раз предметное стекло. Время просветления препарата не должно превышать 1 мин. После этого клетки дополнительно окрашивают в течение 10 с 0,1%-ным водным раствором сафранина. Более длительная обработка сафранином нежелательна, так как маскируется основная окраска. Гранулы поли- -оксибутирата окрашиваются в темный цвет, остальная часть клетки — в розовый. [c.109]

Метод окраски основан на плохой растворимости волютина в растворах кислот. На обезжиренное стекло наносят тонкий мазок бактерий, сушат на воздухе, фиксируют над пламенем и окрашивают карболовым фуксином Циля. Через 0,5...1 мин промывают препарат [c.35]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология